稳定表达VP5蛋白BGC823细胞系的构建

溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2是对Ⅱ型单纯疱疹病毒HSV-2进行基因改造后得到的新型溶瘤病毒。UL19基因编码的VP5蛋白为oHSV2主要衣壳蛋白之一。在前期已经通过GST pull-down与质谱检测分析确定了oHSV2的VP5蛋白为人类白细胞抗原E(HLA-E)的相互作用蛋白的基础上,将HLA-E作为NK与CTL等免疫细胞表面CD94/NKG2A的强效抑制性配体,当它与CD94/NKG2A结合后,NK与CTL细胞的免疫功能会受到一定程度的抑制。前期研究已证实oHSV2会在体外上调部分肿瘤细胞系表面HLA-E表达,为探究oHSV2是否通过VP5蛋白上调肿瘤细胞系表面HLA-E的表达,进而影响HLA-E和CD94/NKG2A的结合,最终改变NK细胞的抗肿瘤能力,通过PiggyBac转座系统构建稳定表达VP5蛋白的人胃腺癌细胞BGC823-VP5细胞系。所构建的细胞系经流式检测单克隆细胞阳性率在99%以上;Western Blot检测到VP5蛋白在细胞内表达;实时无标记动态细胞分析技术(RTCA Real Time Cell AnaIysis)检测表明BGC823-VP5细胞系与亲本细胞BGC823细胞生长活性一致。稳定表达VP5蛋白的人胃癌细胞BGC823-VP5细胞系的构建,为进一步研究oHSV2上VP5蛋白在人胃癌BGC823细胞内影响HLA-E的表达,进而影响免疫细胞的抗肿瘤能力奠定了基础。

幽门螺杆菌L型感染对胃癌BGC-823细胞增殖的影响

目的:研究幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染对胃癌BGC-823细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:将胃癌BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例(1:20、1:100、1:500)共培养,以不加Hp-L型为对照组,在不同时段进行以下实验:倒置显微镜观察细胞形态学变化;四甲基噻唑氮蓝(MTT)法检测细胞生长增殖率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;免疫组化(SP法)检测癌基因(skp2)、抑癌基因(p53)和核增殖指数(Ki-67)的表达情况。结果:Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞分裂增多,增殖旺盛,瘤巨细胞增多,出现明显的生长加速现象;MTT法测定细胞生长曲线显示,Hp-L型对胃癌BGC-823细胞增殖有促进作用;FCM检测可见,Hp-L型影响胃癌BGC-823细胞周期的分布,使G0/G1期比例降低,S期比例升高;免疫组化可见细胞中Skp2、p53和Ki-67蛋白表达阳性率逐渐增加;以上作用均呈细菌浓度和作用时间依赖性。结论:Hp-L型可促进胃癌BGC-823细胞增殖,其机制与上调Skp2、p53和Ki-67蛋白的表达有关。

幽门螺杆菌L型抑制胃癌细胞凋亡的实验研究

背景与目的:研究幽门螺杆菌L型(helicobacter pyloriL-form,Hp-L型)抑制胃癌细胞BGC-823凋亡的作用及其作用机制。材料与方法:将BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例(1∶20、1∶100、1∶500)共培养,以不加Hp-L型为对照组,在不同时段进行以下实验:倒置显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞凋亡及超微结构变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化(SP法)检测细胞中凋亡抑制基因Livin、bcl-2及抑癌基因p53的表达情况。结果:与对照组相比,Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到BGC-823细胞增殖旺盛,瘤巨细胞增多,并出现明显的凋亡抑制现象;电镜观察到BGC-823细胞凋亡形态特征及凋亡数目减少;流式细胞仪检测结果显示Hp-L型可降低BGC-823细胞的凋亡率(P<0.05);免疫组化结果发现BGC-823细胞中Livin、bcl-2和p53蛋白表达阳性率逐渐增加(P<0.05);以上作用均呈细菌浓度和作用时间依赖性(P均<0.05)。结论:Hp-L型可抑制胃癌细胞BGC-823凋亡,其机制与上调Livin、bcl-2、p53蛋白的表达有关。

胃癌BGC-823细胞中HIF-1α、HIF-2α对PKM2的调控作用

目的研究siRNA特异性沉默人胃癌BGC-823细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α)后PKM2的表达情况,探索HIF-1α、HIF-2α对胃癌细胞内PKM2的调控作用。方法用Realtime RT-PCR及Western blot法检测转染HIF-1α、HIF-2α及Control siRNA后细胞内PKM2表达情况。结果 RNA干扰技术能有效沉默BGC-823细胞中的HIF-1α、HIF-2α。转染HIF-1α、HIF-2αsiRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均下降(P<0.05),其中siRNA抑制HIF-1α后,PKM2下调最明显;转染Control siRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均无明显变化(P>0.05)。结论 HIF-1α和HIF-2α均参与调控PKM2的表达,其中HIF-1α起主要调控作用,HIF-1α、HIF-2α与PKM2共同促进肿瘤的Warburg效应。

PKM2对人胃癌细胞HMGB1释放的影响

目的:探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)对胃癌细胞高迁移率族蛋白B-1(high mobility group box 1,HMGB1)释放的作用。方法:通过siRNA干扰抑制人胃癌BGC823细胞PKM2的表达,Western blot检测各组细胞PKM2蛋白的表达,以评价PKM2 siRNA的转染效率;CCK-8法检测各组细胞活力,分析干扰PKM2的表达对胃癌BGC823细胞增殖的影响;Western blot检测各组细胞HMGB1的表达以及ELISA检测各组细胞培养液HMGB1的水平,分析PKM2对胃癌BGC823细胞HMGB1的作用。结果:与空载体pU6组相比,PKM2 siRNA组PKM2的表达显著降低(P<0.01),表明siRNA有效地抑制胃癌BGC823细胞PKM2的表达;CCK-8结果显示,PKM2 siRNA组细胞活力明显低于空载体pU6组(P<0.001),表明干扰PKM2抑制胃癌BGC823细胞增殖;此外,PKM2 siRNA组HMGB1的表达以及细胞外HMGB1的水平显著降低(P<0.01),表明干扰PKM2抑制人胃癌BGC823细胞HMGB1的释放。结论:PKM2促进人胃癌BGC823细胞HMGB1的释放。

10万t/a高电流密度离子膜法烧碱装置运行总结

介绍了10万t/a高电流密度离子膜法烧碱装置的二次盐水精制、BITAC-888型电解槽、淡盐水脱氯等工序的装置、工艺控制及运行概况,并针对生产及工艺中存在的问题提出相应的解决办法。

浅述我厂20 kt/a离子膜烧碱装置中的技术改进

介绍CEC公司提供的电解装置概况、生产工艺流程、运行情况及存在的问题和改进措施。

6-姜烯酚对胃癌BGC-823细胞糖酵解的影响

胃癌是世界上男性排名第二大而女性排名第三大癌症[1]。近年来的研究表明,某些功能性食物,比如水果、蔬菜等,对癌症有一定的预防作用,因而受到一些研究者的关注[2-3]。6-姜烯酚,一种酚醛酮,是生姜的重要成分之一,具有广泛的生物效应,包括抗氧化,抗炎和抗癌活性[4-8]。前期研究显示6-姜烯酚可以抑制胃癌BGC-823细胞增殖并诱导其凋亡[9],但其机制需进一步探讨。