鬼针草(Bidens bipinnata L.)多倍体的诱变

我们用改良琼脂法对鬼针草（ＢｉｄｅｎｓｂｉｐｉｎｎａｔａＬ．）进行多倍体诱变，其诱变率达５５％。多倍体后代Ｂ—９７的生物学特征与对照相比有显著差异。Ｂ—９７叶片面积是对照叶面积的１．５—２倍；果实长度比对照增大１７．５％；气孔器长度约是对照的１．５倍。Ｂ—９７结实极度下降。

鬼针草血清与抗菌药联合对耐药E.coli体外抑菌的研究

为了探讨鬼针草血清与抗菌药联合诱导细菌传代的体外抑菌活性,试验制备了鬼针草含药血清,采用二倍微量稀释法体外检测鬼针草血清与抗菌药联合诱导耐药大肠杆菌的抑菌传代情况。结果表明:鬼针草血清与抗菌药联合诱导细菌传代对耐药大肠杆菌有不同程度的抑菌活性。说明鬼针草血清可明显增强β-内酰胺类、氨基糖苷类和酰胺醇类抗菌药对耐药菌的抑制作用。

HPLC法测定鬼针草总黄酮部位中芦丁的含量

目的建立鬼针草总黄酮部位中芦丁的HPLC含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,流动相为乙腈-四氢呋喃-冰乙酸-水(15.5∶5.5∶0.1∶117.5);流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长360 nm。结果芦丁在75-376μg/ml的范围内线性关系良好,方程为:Y=16 262X-10 726,相关系数r=0.999 1;日内、日间精密度RSD均小于2.5%;平均回收率均为95.5%。结论该法准确、简便、重现性好,可用于鬼针草总黄酮部位中芦丁的含量控制。

鬼针草茎、叶微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图的比较研究

对鬼针草茎、叶经微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图进行了分析比较。采用Welch materials-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸水溶液进行梯度洗脱,检测波长360 nm,得HPLC色谱图,再对各色谱图的各色谱峰的相对率进行分析比较。结果鬼针草茎、叶发酵前后HPLC指纹图谱有较明显的改变,各吸收峰相对率也有较显著的改变。微生物发酵使鬼针草总黄酮中某些化学成分发生了生物转化,其化学成分的组成有较显著的变化。

鬼针草煎液对S180荷瘤小鼠抑瘤率及IL-2、TNF-a影响的研究

目的探讨鬼针草对S180荷瘤小鼠的治疗机制。方法将50只清洁级昆明小鼠制成S180实体瘤模型,分为模型组、CTX组、鬼针草高剂量组、鬼针草中剂量组、鬼针草低剂量组,给药14 d,第15 d后摘眼球取血,处死小鼠,用放射免疫法检测血清中IL-2、TNF-a的含量。结果鬼针草煎液有一定的抑瘤作用,能增加S180荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α的含量。结论鬼针草抗肿瘤的机制是可能增加了S180荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α的含量,与改善荷瘤小鼠的免疫功能有关。

鬼针草植物HPLC指纹图谱研究

目的建立鬼针草植物的HPLC指纹图谱,为鬼针草药材的品种鉴定质量控制提供依据。方法采用迪马Diamonsil 5U(C18,250×4.6mm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0m L·min-1,检测波长为360nm,柱温为25℃:进样量为20μL。结果建立了10批鬼针草的HPLC指纹图谱,确立了17个共有峰,多数峰可以达到较好分离。并对种间相似度进行了比较。结论该方法稳定性、重复性好,建立的指纹图谱可为鬼针草药材的质量评价提供依据。

HPLC法测定鬼针草不同部位三种黄酮成分含量

目的 :建立同时测定鬼针草中三种黄酮类成分含量的方法 ,并比较鬼针草茎和叶中三种成分的含量。方法 :采用HPLC法对鬼针草中三种黄酮类成分芦丁、异奥卡宁7-0-β-D-葡糖苷和异槲皮苷的含量测定方法学进行考察,并同时分析三种黄酮类成分在鬼针草茎和叶总黄酮中的含量。结果:芦丁在0.010~1.040 mg/m L(r=0.999 9)、异奥卡宁7-0-β-D-葡糖苷在0.012~1.168 mg/m L(r=0.999 5)、异槲皮苷在0.012~1.230 mg/m L线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为98.51%、99.21%、98.73%、97.33%、98.92%、98.77%。采用此方法同时测定鬼针草茎和叶中芦丁、异奥卡宁7-0-β-D-葡糖苷、异槲皮苷三种黄酮的含量。结论:建立的HPLC法同时测定鬼针草中三种黄酮类成分含量的方法良好,可用于鬼针草不同部位中黄酮的含量测定。

鬼针草提取物通过TGF-β1/Smad3/Angptl4信号保护急性胰腺炎大鼠肺损伤的实验研究

目的:探究鬼针草提取物在急性胰腺炎大鼠肺损伤中的保护作用。方法:随机将大鼠分为8组:对照(Sham)组,模型(SAPLI)组,鬼针草提取物低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组,鬼针草提取物+TGF-β1组(外源性TGF-β1),鬼针草提取物+empty vector组、鬼针草提取物+Angptl4plasmid vector组。大鼠实验结束后12h,检测各组肺湿干重比(W/D),血清淀粉酶(AMY)活性,肺组织髓过氧化物酶的活性(MPO),炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,RT-PCR和western blot分别检测TGF-β1、Smad3、Angptl4的mRNA和蛋白表达水平。结果:和Sham组比较,SAPLI组AMY、MPO活性、肺湿干重比、TNF-α、IL-6、IL-1β的水平和TGF-β1、Smad3、Angptl4的表达水平显著升高,而鬼针草提取物可使上述指标下降(P<0.05);注射外源性TGF-β1蛋白或过表达Angptl4可逆转TFB的肺损伤保护作用。结论:鬼针草提取物对急性胰腺炎大鼠相关性肺损伤有保护作用,这与阻断TGF-β1/Smad3/Angptl4信号通路有关。

鬼针草调节PI3K-Akt信号通路改善急性肺损伤作用的分子机制研究

目的研究鬼针草对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的改善作用及其机制。方法将60只Balb/c小鼠随机分为6组:空白组、模型组、鬼针草(低、中、高剂量)组及阳性药组,腹腔注射LPS诱导ALI模型12 h后进行灌胃给药,建模5 d后处死并分离肺组织,观察组织病理切片及检测相关炎症因子活性,通过网络药理学预测鬼针草改善ALI作用的药效物质基础及潜在的作用机制,采用免疫组织化学方法对相应通路的关键靶点进行验证。结果鬼针草可改善ALI小鼠肺泡间质水肿、肺泡壁增厚等病理损伤,显著抑制肺组织髓过氧化物酶(MPO)及血清TNF-α,IL-1β和IL-6的表达(P<0.05),从而缓解机体的炎症反应。通过网络药理学预测分析,鬼针草治疗ALI的主要活性成分可能为黄酮类化合物中的槲皮素和木犀草素;通过作用于TNF、IL-6、ALB、GAPDH、AKT1、VEGFA、STAT3等靶点,调控PI3K-Akt、TNF、HIF-1等通路来发挥改善ALI的作用。RT-qPCR及免疫组织化学结果显示鬼针草可促进ALI小鼠肺组织Akt的转录及表达(P<0.05)。结论鬼针草对ALI炎症反应具有改善作用,其机制可能为激活PI3K-Akt信号通路来发挥肺保护作用。为鬼针草的进一步开发利用提供了一定的实验基础。

鬼针草总黄酮调控PI3K/Akt/mTOR自噬通路对高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨鬼针草总黄酮(TFB)调控磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路对自发性高血压(SHR)大鼠心肌纤维化(MF)的影响。方法将30只SHR大鼠随机分为5组:SHR组、SHR+坎地沙坦组、SHR+TFB组、SHR+IGF-1(PI3K/Akt/mTOR通路激活剂)组、SHR+TFB+IGF-1组,每组6只。另取6只年龄匹配的雄性WKY大鼠作为WKY大鼠对照组。WKY大鼠对照组和SHR组大鼠予剂量匹配的生理盐水灌胃,SHR+坎地沙坦组予溶于生理盐水的坎地沙坦(40 mg/kg)灌胃,SHR+TFB组予溶于生理盐水的TFB(240 mg/kg)灌胃,SHR+IGF-1组大鼠经侧脑室注射20μg/kg IGF-1,SHR+TFB+IGF-1组大鼠经侧脑室注射20μg/kg IGF-1后予240 mg/kg TFB灌胃,每日1次,连续12周。给药结束后,检测各组大鼠血压、左心室功能指标;HE和Masson染色观察组织病理变化;TUNEL染色观察组织细胞凋亡;试剂盒法测量抗氧化状态;RT-qPCR检测Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA水平;Western blot检测CollagenⅠ、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、自噬标志蛋白(Beclin-1、LC3B、p62)、PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白水平。结果与SHR组相比,SHR+坎地沙坦组、SHR+TFB组大鼠左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)明显升高,收缩压、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室收缩末期容积(LVESV)、左心室质量指数(LVMI)明显降低,MF程度减轻,CollagenⅠ、α-SMA、Fibronectin、Vimentin表达显著下调,凋亡小体百分比显著降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)显著升高,内源性过氧化氢(H_(2)O_(2))、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)显著降低,Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ显著升高,p62表达显著降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值显著降低(P<0.05)。与SHR+TFB组相比,SHR+TFB+IGF-1组EF、FS明显降低,收缩压、LVEDD、LVEDV、LVESD、LVESV、LVMI明显升高,MF程度加重,CollagenⅠ、α-SMA、Fibronectin、Vimentin表达显著上调,凋亡小体百分比显著升高,GSH-Px、SOD、Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ显著降低,H_(2)O_(2)、MDA、ROS水平、p62表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值显著升高(P<0.05)。结论TFB显著降低SHR大鼠的收缩压,并通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活心肌自噬,降低氧化应激水平和心肌凋亡,进而减轻SHR大鼠的MF。

婆婆针黄酮类化学成分及其药理作用研究进展

婆婆针为鬼针草属植物,是我国民间常用中药,植物资源丰富,药用历史悠久,具有清热解毒、消瘀散肿的功效。婆婆针中黄酮类化合物含量较高,为其主要活性成分,具有保肝、抗炎镇痛、降血糖、降血脂、减轻肺损伤等多种药理活性。本文对婆婆针中的黄酮类化学成分及其药理作用研究进展进行综述,以期为该植物药的深入研究提供参考。

中药鬼针草化学成分的研究

目的:研究鬼针草治疗糖尿病的有效化学成分。方法:采用80%乙醇渗漉提取,硅胶,反相硅胶,Sephadex-LH20柱层析分离纯化,化学反应和波谱分析鉴定其化学结构。结果:从鬼针草中得到槲皮素(Ⅰ)、金丝桃苷(Ⅱ)、槲皮素-7-O-鼠李糖苷(Ⅲ)、6,7,3’,4’-四羟基橙酮(Ⅳ)、4,5-双咖啡sg酰奎宁酸(Ⅴ)、豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(Ⅵ)、3,4-二羟基苯甲酸乙酯(Ⅶ)、奥卡宁(Ⅷ)、木犀草素(Ⅸ)。结论:以上化合物除奥卡宁、金丝桃苷外,其余7个化合物均为首次从鬼针草中分离得到。

鬼针草总黄酮对急性炎症的保护作用及可能机制研究

目的:研究鬼针草总黄酮(TFB)对急性炎症的保护作用与可能机制。方法:二甲苯诱导急性小鼠耳肿胀,检测耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量;氟氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠原发性炎症,检测足肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8含量,HE染色观察炎症关节病理学变化,免疫组织化学法检测关节软骨组织ASIC1a蛋白。结果:小鼠急性耳肿胀和AA大鼠原发性炎症中,模型组动物血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量均明显升高,TFB(100、200mg/kg)灌胃给药能降低小鼠耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量,TFB(67、133mg/kg)可以升高AA大鼠血清IL-2的含量。TFB灌胃给药可以使AA大鼠关节炎性细胞减少,改善病理变化。在AA大鼠原发性炎症中模型组大鼠关节软骨组织ASIC1a表达明显升高,TFB(67、133mg/kg)组ASIC1a的表达明显降低。相关性分析结果显示,AA大鼠原发性炎症中ASIC1a与血清TNF-α、IL-1、IL-8含量呈正相关。结论:TFB对急性炎症具有保护作用,其抗炎机制可能与调节炎症介质释放有关。

鬼针草总黄酮抗大鼠免疫性肝纤维化作用及部分机制研究

目的探讨鬼针草总黄酮(TFB)抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、TFB大、中、小剂量组和秋水仙碱阳性药对照组,采用腹腔注射猪血清诱导肝纤维化模型。造模后,给药组分别灌服相应的受试药物,正常组和模型组灌服等量的生理盐水。ELISA法测定大鼠血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原酶(PCⅢ)、Ⅳ型胶原酶(CⅣ)含量;取固定部位肝组织做病理组织学检查;免疫组织化学技术测定肝组织中α-SMA蛋白的表达;RT-PCR技术测定肝组织中TGF-β1mRNA的表达情况。结果TFB能明显降低肝纤维化大鼠血清中HA、LN、PCⅢ、CⅣ含量;病理组织学检查结果显示TFB组肝脏组织结构明显改善,肝纤维化程度减轻;TFB大、中剂量组明显抑制肝组织中α-SMA蛋白和TGF-β1mRNA的表达。结论TFB对猪血清所致大鼠免疫性肝纤维化有明显治疗作用,其机制可能与降低TGF-β1mRNA表达进而抑制肝星状细胞活化有关。

鬼针草有效成分的研究(Ⅱ)

目的研究鬼针草Bidensbipinnata的地上部分的化学成分。方法采用硅胶、ODS柱色谱分离并结合SephadexLH-20和HPLC分离纯化,通过理化鉴定和波谱分析鉴定其化学结构。结果从鬼针草的正丁醇部位得到6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-6,7,3′,4′-四羟基噢(海生菊苷)()、6-O-(6″-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-6,7,3′,4′-四羟基噢()、槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷()、槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷()、异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷()、七叶苷()、(E)2-己烯基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷()、正己烷基O-β-D-吡喃葡萄糖苷()、异戊基O-β-D-吡喃葡萄糖苷()、正丁基O-α-D-呋喃果糖苷()、正丁基O-β-D-呋喃果糖苷()、正丁基O-β-D-吡喃果糖苷()。结论以上12个化合物中除海生菊苷和异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷外,其他10个化合物均为首次从鬼针草中分离得到。

正交设计法优选鬼针草中总黄酮的提取工艺研究

目的对从鬼针草中提取鬼针草总黄酮的工艺进行优化。方法采用L9(34)正交设计,以鬼针草总黄酮含量为考察指标,考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取的影响。结果最佳提取工艺为12倍量80%乙醇提取2次,1 h/次。结论该工艺经实验重现性好,对进一步的工艺开发有较好的参考价值。

柳叶鬼针草总黄酮对四氯化碳所致小鼠急、慢性肝损伤的保护作用

目的:采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射制备小鼠急、慢性肝损伤模型,探讨柳叶鬼针草(TFB)总黄酮对肝损伤的保护作用及其作用机制。方法:60只ICR小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药护肝片(4g·kg-1)组及TFB高、中、低(120、60和30mg·kg-1)剂量组,每组10只。采用腹腔注射不同剂量及不同给药次数给予CCl4分别制备小鼠急、慢性肝损伤模型,观察肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,以及肝脏组织病理形态学变化。结果:与模型组比较,TFB(120、60和30mg·kg-1)及阳性药护肝片(4g·kg-1)组小鼠肝脏水肿明显减轻(P<0.05或P<0.01),血清AST及ALT活性明显降低(P<0.05或P<0.01),血清SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),肝脏组织病理损害明显改善。结论:TFB对CCl4所致小鼠急、慢性肝损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧化损伤有关。

鬼针草提取物对实验性高脂血症大鼠血脂和NO及NOS的影响

目的研究鬼针草不同提取物对实验性高脂血症大鼠血脂和NO及NOS的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为5组:①正常对照组;②模型对照组;③洛伐他汀对照组,洛伐他汀2 mg/(kg.d)灌胃;④鬼针草乙酸乙酯萃取物组,5 g/(kg.d)灌胃;⑤鬼针草水提取物组,5 g/(kg.d)灌胃,正常组和模型组每日给予等体积生理盐水。除正常组喂饲普通饲料外,其余各组均喂饲高脂饲料。10周末处死动物,分离血清,检测血脂、MDA、SOD、NO、NOS。制备腹主动脉切片,HE染色观察形态学改变。结果与模型组比较,鬼针草提取物组TC、LDL-C、MDA、NO和NOS显著降低,HDL-C、SOD明显升高。鬼针草提取物组HDL-C明显高于洛伐他汀组。模型组大鼠主动脉血管内壁不光滑,血管内膜脂质沉积,鬼针草提取物组血管内膜无明显的脂质沉积。结论鬼针草提取物能够降低高脂血症大鼠血脂水平并保护血管内皮,具有较好的防治动脉粥样硬化的作用。

大孔吸附树脂纯化鬼针草总黄酮的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂分离纯化鬼针草总黄酮的工艺。方法以鬼针草总黄酮吸附量、总黄酮含量和总黄酮回收率为考察指标,从吸附分离特性对树脂进行筛选和工艺优化。结果HPD100树脂对鬼针草总黄酮有良好的吸附分离性能,其吸附分离鬼针草总黄酮的工艺条件为：原液上样浓度为1-1.5g/L,调pH为4,以2BV/h的吸附速率进行吸附,最大上样量以总黄酮计为4.99g/L树脂。吸附后先以4BV水洗去杂质,再用4BV的70%乙醇以4BV/h的速率进行洗脱。在此条件下进行吸附、洗脱,树脂可重复使用5次。结论HPD100树脂在所确定的工艺条件下,可较好的吸附分离鬼针草总黄酮。

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号传导通路的影响

目的研究外源性转移生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活作用,观察鬼针草总黄酮(total flavonoids of Bidens Bipinnata L,TFB)对HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响,以探讨TFB抗肝纤维化的作用及分子机制。方法采用Collagenase Ⅳ胶原酶原位肝灌注法分离HSC,MTT法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC增殖的作用,ELISA法检测HSC自分泌TGF-β1和产生Ⅰ型胶原的影响;RT-PCR法观察分析TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原基因表达的影响;Westernblot法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2蛋白表达的影响。结果TGF-β1明显促进HSC增殖、自分泌TGF-β1和产生胶原,促进HSCsmad2、Ⅰ型胶原mRNA及smad2蛋白的表达,明显抑制smad7mRNA表达(P<0.05),TFB作用后,TGF-β1刺激的HSC中smads2mRNA、蛋白和Ⅰ型胶原mRNA表达受到抑制,smad7mRNA表达明显上调。结论TFB抗肝纤维化作用可能与其阻断HSCTGF-β1通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。