鳖甲煎丸含药血清通过miR-140调控肝癌干细胞增殖能力及干性的机制研究

目的 研究miR-140在肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)中的生物学功能,以及鳖甲煎丸含药血清抑制肝癌干细胞特性的干预效应。方法 以人肝癌细胞株(Huh7)为研究对象,无血清培养基分选法分选LCSCs,用流式细胞仪鉴定富集的LCSCs,并转染miR-140慢病毒。分为Cin组、Control组、BJJP组、miR-140 mimics NC组、miR-140 mimics组、BJJP+miR-140 inhibitor组。用CCK-8法测定细胞增殖能力,RTPCR检测miR-140、CD133、CD24、EpCAM、AFP表达,Western blot法检测CD133、CD144、EpCAM、AFP蛋白表达。结果 检测显示Con组与Control组细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的蛋白及RNA表达无统计学意义(P>0.05);与miR-140 mimics NC组相比,miR-140 mimics组的肝癌干细胞的增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平均明显减少(P<0.01),但miR-140表达明显增强(P<0.05);与Control组相比,BJJP组和BJJP+miR-140 inhibitor组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),且BJJP组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平低于BJJP+miR-140inhibitor组(均P<0.05)。结论 鳖甲煎丸能抑制LCSCs的增殖能力及干性,其机制可能通过上调miR-140的表达发挥作用。

鳖甲煎丸治疗代偿期慢性乙型肝炎肝硬化的疗效观察

目的 探讨鳖甲煎丸治疗代偿期慢性乙型肝炎(CHB)肝硬化患者的疗效。方法 以2018年1月—2020年1月该院收治的代偿期CHB肝硬化患者130例为研究对象,采用随机数字表法分为对照组(65例)和观察组(65例)。对照组进行常规治疗联合恩替卡韦片治疗,观察组在对照组的基础上采用鳖甲煎丸进行治疗,两组均治疗24周。比较两组治疗12、24周后肝功能、病毒学指标及治疗前、治疗24周后肝硬度值及超声影像学检查指标、肝纤维化指标、血清炎性因子水平。结果 治疗24周后,观察组总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)/谷草转氨酶(AST)复常率及乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)转阴率高于对照组(P<0.05)。治疗24周后,两组脾脏长度、门静脉内径短于治疗前,观察组短于对照组,脾脏厚度、肝硬度值及血清Ⅲ型前胶原(PC-原)、Ⅳ型胶原(IV-C)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)低于治疗前,观察组低于对照组(P<0.05)。结论 鳖甲煎丸治疗代偿期CHB肝硬化患者可有效改善患者肝功能,缓解肝纤维化进程,降低机体炎症反应,改善肝脏和脾脏情况,促进病毒转阴,具有较好的治疗效果。

《金匮要略》鳖甲煎丸研究进展

鳖甲煎丸出自《金匮要略》,由23味药组成。全方寒热并用,攻补兼施,升降结合,气血津液同治,功可软坚消癥、行气活血、祛湿化痰。该方原是治疗疟母的方药,如今已被应用于以肝病为主各类疾病的临床治疗中,并取得良好疗效。同时鳖甲煎丸的药理研究也取得很大进展。该文搜集近年来鳖甲煎丸相关文献,从临床应用、药理研究及主要药物成分方面较为全面的对其进行介绍,以期为后续鳖甲煎丸的研究提供参考。

鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及其靶基因表达的影响

目的探讨鳖甲煎丸治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组和鳖甲煎丸低、中、高剂量组,每组8只。除空白对照组外其余各组大鼠腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。首次注射后第2天开始给药,鳖甲煎丸低、中、高剂量分别给予为鳖甲煎丸混悬液0.55、1.1、2.2 g/(kg·d)灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱片混悬液0.11 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予2 ml生理盐水灌胃,共8周。Masson染色观察肝脏病理形态学改变;检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标,及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平;Westernblot法检测大鼠肝组织中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达。结果与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组均不同程度纤维组织增生明显减少,血清ALT、AST含量及MDA、HYP、TGF-β1、CTGF、TNF-α、VEGF水平降低,SOD水平升高(P<0.05),肝组织中β-catenin、p-GSK-3β和p-AKT蛋白表达明显减少,且以鳖甲煎丸高剂量组效果更佳(P<0.05)。各组大鼠肝组织中GSK-3β和AKT蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲煎丸能够显著减轻CCl4致大鼠肝纤维化的程度,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化、减少其下游靶基因的表达水平有关。

鳖甲煎丸联合恩替卡韦治疗乙肝肝硬化代偿期的效果观察

目的:观察鳖甲煎丸联合恩替卡韦治疗乙肝肝硬化代偿期的效果。方法:选取我科室2014年1月至2016年5月收治疗的120乙肝肝硬化代偿期的患者,随机分为治疗组和对照组各60例,对照组给予恩替卡韦进行治疗,治疗组给予中药鳖甲煎丸剂联合恩替卡韦治疗。分析两组患者治疗前后血清肝纤维化指标、肝脏功能改善情况以及不良反应。结果:1治疗后,治疗组HA、LN、PCⅢ和IV-C水平分别为(136.1±10.8ng/ml、86.0±6.8ng/ml、120.9±10.9ng/ml、75.1±4.5μg/L),均明显优于对照组(218.4±14.2ng/ml、106.2±10.9ng/ml、155.1±15.5ng/ml、84.6±5.8μg/L)。2治疗后,治疗组ALT、TBIL和ALB水平分别为(68.4±8.7U/L、19.1±5.8umol/L、34.4±3.7g/L),均明显优于对照组(96.0±7.9U/L、27.9±5.0ng/ml、32.1±3.6g/L)。用药期间,观察组出现5例(8.33%)的患者发生不良反应,低于对照组8例(13.33%),但组间差异无统计学意义。结论:在恩替卡韦治疗肝硬化代偿期患者的基础上,加服鳖甲煎丸可降低患者肝纤维化和肝损伤程度,且不会增加副作用。

鳖甲煎丸对肝星状细胞中β-catenin及NF-κB信号通路活化的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中β-catenin的表达水平及NF-κB信号通路的活化的调控作用,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法:鳖甲煎丸(0.45 g/kg,0.9 g/kg,1.8 g/kg)和秋水仙碱(0.2 mg/kg)药物血清培养永生化HSC-T6细胞,培养24 h后采用q PCR检测HSC-T6细胞中β-catenin m RNA的表达水平,免疫荧光检测β-catenin蛋白的表达水平,Western blotting检测p65、p50的表达水平,ELISA检测下游靶基因TGF-β和TNF-α的表达水平。结果:与空白对照组相比,鳖甲煎丸(0.45g/kg、0.9g/kg、1.8g/kg)和秋水仙碱(0.2 mg/kg)药物血清组中β-catenin m RNA的表达水平显著降低,同时,鳖甲煎丸药物血清组(0.45g/kg、0.9g/kg、1.8g/kg)能够抑制p65的蛋白表达水平,但对p50的的表达无显著影响,并可显著抑制TGF-β和TNF-α的表达,且这种调控作用具有浓度依赖性。结论:鳖甲煎丸抗肝纤维化的药理作用可能与其下调HSC-T6细胞中β-catenin的表达水平,调控NF-κB信号通路的活化,并有效抑制下游靶基因TGF-β和TNF-α的表达水平密切相关,这可能是鳖甲煎丸抑制肝星状细胞增殖、活化的重要分子机制之一。

鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导的肝癌前病变模型大鼠肝组织IL-6/STAT3信号通路的影响

目的探讨鳖甲煎丸治疗肝癌前病变的可能作用机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、鳖甲煎丸组,每组10只。除正常组外其余两组注射二乙基亚硝胺(DEN)连续16周建立肝癌前病变模型。造模第8周,鳖甲煎丸组给予鳖甲煎丸药液1.1 g/kg灌胃,正常组和模型组予以10 ml/kg生理盐水灌胃,均每日1次,连续灌胃至第18周。给药结束后测量大鼠体重、肝脏重量、肝脏表面结节数量及最大结节直径,观察肝脏病理改变及肝组织甲胎蛋白(AFP)、人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)表达情况,检测肝功能指标包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)、白蛋白(ALB)、谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP),血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、趋化因子2(CCL-2)表达,肝组织IL-6、TNF-α、CCL-2 mRNA表达及IL-6、TNF-α、磷酸化转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体重明显降低,肝脏重量及肝脏体重比均明显增加,肝脏表面结节数量及结节最大直径明显增加,HE染色见肿瘤病灶内出现大片肝细胞坏死,肿瘤细胞异型性明显,不典型增生结节内GST-π呈强阳性,瘤组织中AFP染色明显,肝功能指标除ALB外均明显升高,血清IL-6、CCL-2水平,肝组织IL-6、CCL-2mRNA表达及IL-6、TNF-α、p-STAT3蛋白相对表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,鳖甲煎丸组肝脏重量、肝脏体重比均明显下降,肝脏表面结节数量及结节最大直径明显降低,癌细胞多呈高分化,肿瘤坏死区少见,GST-π、AFP染色较浅,阳性区域较少,血清AST、TBiL、GGT水平明显降低,血清IL-6、CCL-2水平,肝组织IL-6、CCL-2 mRNA表达及IL-6、p-STAT3蛋白相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论鳖甲煎丸可能通过降低炎症因子表达,抑制IL-6/STAT3通路的激活,从而抑制肝癌前病变的发生发展。

鳖甲煎丸对肝癌皮下转移瘤小鼠肿瘤新生血管及微环境的影响

目的研究鳖甲煎丸对肿瘤新生血管结构及功能、肿瘤微环境的影响。方法建立Hepa1-6小鼠肝癌皮下转移瘤模型,将造模成功小鼠随机分为鳖甲煎丸组、贝伐单抗组和对照组,每组15只。鳖甲煎丸组按6 g/(kg·d)予鳖甲煎丸混悬液灌胃,贝伐单抗组腹腔注射贝伐珠单抗注射液5 mg/(kg·d),对照组腹腔注射等量生理盐水,各组连续干预14天。14天后剥取肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度计数、周细胞覆盖率和血管基底膜面积,Evans blue法检测血管通透性,免疫荧光检测肿瘤组织的乏氧区域面积。结果与对照组比较,贝伐单抗组和鳖甲丸组微血管密度计数、Evans blue染料含量及乏氧区域面积均降低,周细胞覆盖及基底膜面积均升高(P<0.05或P<0.01)。鳖甲煎丸组Evans blue染料含量及乏氧区域面积较贝伐单抗组高(P<0.01)。贝伐单抗组和鳖甲丸组微血管密度计数、周细胞覆盖及基底膜面积差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲煎丸对Hepa1-6小鼠肝癌皮下转移瘤具有促使血管结构和功能正常化作用,能够改善肿瘤组织的乏氧状态。