热灭活BBMN68常温酸奶对小鼠免疫和肠道菌群的调节功能研究

本试验研究了热灭活长双歧杆菌BBMN68酸奶对小鼠免疫功能和肠道菌群的影响。将60只8周龄SPF级Balb/C野生型雄性小鼠随机分为5组,对照组灌胃生理盐水、发酵剂组灌胃常温酸奶,低、中、高剂量组灌胃不同剂量的热灭活BBMN68常温酸奶,干预4周。检测迟发型变态反应、脾淋巴细胞转化、溶血空斑数、半数溶血值水平、NK细胞毒性变化情况以及肠道菌群的变化。结果显示,热灭活BBMN68常温酸奶可以增强小鼠的迟发型变态反应、提高脾淋巴细胞转化率、溶血空斑数以及半数溶血值水平,并调节与免疫相关的菌群,如Alistipes、Rikenella和Blautia。说明热灭活BBMN68常温酸奶对小鼠的免疫和肠道菌群具有调节作用。本研究为BBMN68相关产品的开发及应用提供了理论依据。

长双歧杆菌BBMN68微胶囊的制备及其应用性评价

长双歧杆菌BBMN68分离自广西巴马长寿老人粪便,已证明其具有双歧杆菌普遍的生理功能。为解决其不耐酸、不耐氧的缺点,本实验采用微胶囊包埋技术,以海藻酸钠、乳清蛋白以及VE为壁材,在氮气体系中采用挤压法包埋该双歧杆菌活菌体制备湿微胶囊和冻干微胶囊。结果表明:海藻酸钠、乳清蛋白和VE质量分数分别为2%、3%和10%条件下制备的湿微胶囊在酸奶中保存21 d仍能保持106 CFU/g以上的活菌数,耐胃酸实验2.0 h时活菌数仍高达3.16×107 CFU/g,肠溶实验中微胶囊在2.0 h实现完全崩解;海藻酸钠和乳清蛋白质量分数为2%和3%,氮气环境下制备的冻干微胶囊通过恒温加速实验测定可在室温条件下贮藏长达75 d。通过微胶囊包埋技术较好地解决了长双歧杆菌BBMN68不耐酸、不耐氧的缺点,同时也提供一种新型有效的补充肠道益生菌的形式。

长双歧杆菌BBMN68冷冻保护剂筛选与优化

为提高长双歧杆菌BBMN68的冷冻保藏效果,以冷冻存活率和菌株活力为评价指标,分别评价了4个类型的18种冷冻保护剂。结果表明,脱脂乳、海藻糖、果糖、甘油、维生素C、L-Glu能对BBMN68有效保护。采用二次回归正交设计,对筛选得到的6种保护剂进行复配,得到复配保护剂的最优配方（质量分数）为：甘油3%、海藻糖5%、果糖5%、脱脂乳8%、维生素C 0.05%、L-Glu 0.05%。在复配保护剂的作用下,-80℃保藏期间BBMN68菌数稳定,活菌对数值始终保持在10.51g（cfu/mL）;冷冻浓缩物作为直投发酵剂应用于酸奶中,在21 d内菌数变化不大,始终保持在10~7 cfu/mL以上。

长双歧杆菌BBMN68工业化培养基筛选

本实验以长双歧杆菌BBMN68生长状况为评价指标筛选一种低成本、易配制的工业化培养基。实验比较了菌株在四种常用双歧杆菌培养基中的生长状况,结果表明NPNL培养基生长效果最好(P<0.05);通过低成本氮源代替NPNL氮源,发现玉米浆干粉培养效果最好(P<0.05),玉米浆干粉最佳用量为55g/L;玉米浆干粉培养基中剔除磷酸盐缓冲液、无机盐溶液、L-半胱氨酸盐酸盐,对BBMN68生长状况没有显著性影响(P>0.05)。长双歧杆菌BBMN68工业化最佳培养基配方为:55g/L玉米浆干粉,10g/L葡萄糖,1g/L吐温-80,活菌数达到4.4×109cfu/mL。

活细胞在线检测器在长双歧杆菌BBMN68培养中的应用研究

活菌数检测是益生菌培养过程分析的重要环节。传统以平板稀释法检测益生菌活菌数费时费力,且无法实现实时监测。本文探索了电容型活细胞在线检测器在双歧杆菌BBMN68培养过程中的应用效果,评价其检测活细胞量的可行性。研究表明,在菌体发酵生长的对数期,活细胞在线检测器的电容值与长双歧杆菌BBMN68活细胞量之间存在良好的线性关系,其线性相关系数为0.992,比吸光值法更准确地反映发酵体系中活细胞量的情况,在稳定期与衰亡期也表现出了良好的相关性。比平板计数法更快速,可以实现实时监控。电导型活细胞检测器为益生菌培养过程在线检测提供了一种简便、精确的方法。

长双歧杆菌BBMN68治疗婴儿CMPA腹泻的效果及对EOS、IgE及白介素水平的影响

目的探讨长双歧杆菌BBMN68治疗婴儿牛奶蛋白过敏(CMPA)性腹泻的效果及对患儿嗜酸性粒细胞(EOS)、血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-6、IL-1β的影响。方法选取我院儿科收治的90例CMPA腹泻婴儿(收集时间:2015年6月—2016年6月),对照组45例患儿均停止原喂养方式,改用深度水解蛋白配方奶粉喂养方式、进行对症处理,研究组45例患儿同时给予长双歧杆菌BBMN68治疗,对比两组患儿治疗2周后的外周血EOS,血清IL-4、IL-6、IL-1β、IgE水平及临床效果。结果治疗前,研究组和对照组的外周血EOS,血清IL-4、IL-6、IL-1β、IgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组的外周血EOS,血清IL-4、IL-6、IL-1β、IgE水平均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患儿的外周血EOS,血清IL-4、IL-6、IL-1β、IgE水平较本组治疗前均显著降低(P<0.05);治疗后,研究组疗效显著优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论长双歧杆菌BBMN68治疗婴儿CMPA性腹泻效果肯定,同时显著的降低患儿血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE水平及外周血EOS水平。

氧气胁迫对长双歧杆菌葡萄糖代谢关键酶基因表达的影响

双歧杆菌对氧气敏感,耐氧性成为其重要的性状及研究内容之一。实验采用半定量RT-PCR法对在4%氧气条件下培养的长双歧杆菌BBMN68的葡萄糖代谢中关键酶基因mRNA表达水平进行了比较和分析。结果表明,随着氧气浓度增加,长双歧杆菌BBMN68的生长逐渐受到抑制,在4%浓度胁迫条件下,葡萄糖磷酸变位酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、磷酸酮醇酶、转酮醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶在氧胁迫30min时的mRNA表达明显下降,60min及120min后,xfp和gap酶的mRNA表达量恢复到厌氧条件下的水平。研究了长双歧杆菌在氧气胁迫下菌体生长以及葡萄糖代谢中关键酶基因mRNA的变化情况,这些可能是细胞受到氧气胁迫的应激反应之一,推测葡萄糖代谢酶与长双歧杆菌耐氧性有一定关联。

长双歧杆菌BBMN68诱导的树突状细胞对小鼠牛乳β-乳球蛋白过敏的缓解作用

为研究益生菌缓解食物过敏的作用机制,本实验以牛乳β-乳球蛋白(BLG)为过敏原构建小鼠食物过敏模型,灌服长双歧杆菌BBMN68(BBMN68),采用ELISA方法检测小鼠血清及细胞培养上清中抗体和细胞因子含量,流式细胞术分析小鼠体内树突状细胞(DCs)亚型及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量的变化。结果表明,BBMN68调节了BLG小鼠体内的Th1/Th2细胞失衡,缓解了过敏反应。与过敏组小鼠相比,BBMN68显著提高了派氏淋巴结DCs中CD103表达(p<0.05),并降低了CD86和MHC-II表达(p<0.05);提高了派氏淋巴结,肠系膜淋巴结和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,分别增加41.91%、71.16%和61.25%。分离BBMN68组小鼠派氏淋巴结的DCs与BLG过敏小鼠的CD4+T细胞共培养,发现Foxp3+Treg细胞比例显著增加,调节性细胞因子TGF-β和IL-10分泌显著增多(p<0.05)。以上结果说明BBMN68缓解小鼠牛乳β-乳球蛋白过敏的机制与其调节DCs功能,促进其介导的免疫抑制有关。

长双歧杆菌BBMN68可溶性蛋白质图谱的建立

为了建立长双歧杆菌BBMN68蛋白质图谱,采用双向电泳的方法建立了2-D参考图谱,通过MALDI-TOF/MS质谱鉴定和数据库搜索,鉴定到206个蛋白质(占长双歧杆菌BBMN68基因预测总蛋白的11.4%)。通过2-D胶分析,共有800±15(对数期)和800±20(稳定期)个蛋白质,其中282个蛋白点成功鉴定,代表206个不同的蛋白质。另外,分析了实验鉴定蛋白质的等电点和分子量,蛋白功能,密码子偏好性,蛋白质疏水性以及蛋白质细胞定位的分析。研究结果为长双歧杆菌的比较蛋白质组学研究提供了参考图谱和蛋白质基础信息数据。

信号分子AI-2对长双歧杆菌BBMN68耐受胁迫能力的影响

双歧杆菌是一种广泛应用的益生菌,但是受到环境胁迫后,菌株活力大幅降低,影响菌株功能发挥,其中信号分子AI-2在益生菌耐受环境胁迫中发挥关键作用。文章研究了外源添加AI-2对双歧杆菌BBMN68耐受酸、胆盐及氧胁迫能力的影响。结果表明,外源添加AI-2可以显著提高BBMN68在p H4.0酸胁迫的存活率(P<0.05),显著降低氧气的抑制作用(P<0.05),对在0.1%浓度胆盐下的生长无显著影响(P>0.05)。该研究表明,可以通过外源干预来提高长双歧杆菌的环境耐受能力。