富硒长双歧杆菌DD98对X射线所致放射性肝损伤小鼠的保护作用

本研究旨在讨论富硒长双歧杆菌DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum DD98,Se-DD98)对X射线所致发射性肝损伤小鼠的保护作用。雄性SPF级balb/c小鼠随机分为5组:正常对照组、辐射对照组、Se-DD98高剂量组、Se-DD98低剂量、DD98对照组,连续给药28 d并监测体重。第29 d采用X射线全身照射,实验结束后进行指标检测。与辐射对照组的体重(24.44 g)和肝脏指数(4.49%)比较,Se-DD98高剂量组体重(26.96 g)及肝脏指数(5.10%)显著改善、血清肝功能指标(ALT、AST)和体内氧化压力水平(MDA、LDH)显著降低,抗氧化酶活力(CAT、SOD、GSH-Px)显著升高。实时荧光定量PCR结果表明,Se-DD98高剂量组肝脏中Sod1(3.58)和Gpx1(7.14)表达显著上调,分别上调16.41、10.19倍,促炎因子IL-1β表达(2.16)显著下调1.61倍,抑炎因子IL-10(7.09)显著上调1.40倍。此外,Se-DD98高、低剂量组均能减轻X射线所致的肝脏损伤。最后,Se-DD98高剂量组各项指标与正常对照组相比差异不大,与辐射对照组差异显著。因此,富硒长双歧杆菌DD98可以通过减少氧化压力水平、增强抗氧化酶活力及抑制组织炎症来缓解X射线所致的小鼠放射性肝损伤。

长双歧杆菌DD98冻干保护剂优化及菌粉保存稳定性研究

以长双歧杆菌DD98为研究对象,通过对冻干保护剂配方的优化,冻干菌粉的存活率提高到90%以上。通过进一步稳定性研究,采用保护剂优化配方制备的冻干菌粉在4℃保存24个月后,活菌数仍在1.0×10^10 CFU/g以上,在25℃条件下可以保存12个月,双歧杆菌的存活率在1.0×10^6CFU/g以上,符合FAO/WHO建议食品益生菌活菌数应在1.0×10^6 CFU/g^1.0×10^7CFU/g的标准。

富硒长双歧杆菌DD98菌株的黏附特性及黏附机制初步研究

利用Caco-2细胞作为体外黏附模型,通过细菌黏附率评价一株新的长双歧杆菌菌株DD98(Bifidobacterium longum DD98,DD98)富硒前后的黏附能力,测定细菌自动聚集能力与表面疏水性,采用荧光定量PCR技术检测细菌表面Tuf蛋白mRNA表达量差异。结果表明,与DD98相比,富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum DD98,Se-DD98)黏附于Caco-2细胞的数量从(39.12±17.57)CFU/100cells上升到(581.17±62.79)CFU/100cells,Se-DD98对Caco-2细胞的黏附能力极显著升高(p<0.01)。相比DD98,Se-DD98自动聚集能力略有上升,且其表面疏水性从5.12%±0.16%上升到20.25%±2.14%,极显著性升高(p<0.01);荧光定量PCR结果表明,与Caco-2细胞共孵育2h后,Se-DD98菌体表面Tuf黏附蛋白表达显著上调(p<0.05)。表明DD98经富硒培养后,黏附能力显著提升,其黏附能力的增强可能与细菌表面Tuf黏附蛋白的改变有关。

富硒长双歧杆菌DD98菌株对伊立替康所致小鼠腹泻及肠道菌群的影响

本研究建立伊立替康所致腹泻小鼠模型,通过长期灌胃富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum Se-DD98)菌株(一株新的长双歧杆菌菌株),评价其对伊立替康所致腹泻及肠道菌群的影响。正常对照组和伊立替康组小鼠每天灌胃无菌蒸馏水,实验组小鼠每天灌胃低剂量(活菌数1×108CFU/kg)、高剂量(活菌数1×109CFU/kg)Se-DD98菌液,除正常对照组外其他各组在第17 d腹腔注射伊立替康,实验周期为24 d。测定小鼠体重,小鼠腹泻等级,免疫指标,肠道菌群以及回肠组织结构。结果表明:与伊立替康组比较,Se-DD98低、高剂量组小鼠体重显著增加(P<0.05);腹泻等级显著降低(P<0.05);高剂量组白细胞数目显著增加(P<0.05),低、高剂量组脾脏指数和中性粒细胞数目均显著增加(P<0.05),说明Se-DD98具有调节免疫功能的作用。同时,低、高剂量组大肠杆菌、梭菌和拟杆菌含量均比正常组和伊立替康组显著减少(P<0.05),而双歧杆菌含量显著增加(P<0.01)。此外Se-DD98低、高剂量均能减轻伊立替康导致的肠道粘膜、细胞和腺体损伤。上述结果表明Se-DD98可能通过调节肠道菌群和保护肠道粘膜发挥缓解伊立替康导致的腹泻的作用。提示Se-DD98在辅助治疗伊立替康所致的腹泻等方面具有潜在应用前景。

长双歧杆菌DD98体内外安全性评价

长双歧杆菌DD98分离于健康的成人粪便中,具有调节肠道菌群的作用。本文通过急性毒性实验、耐药性实验及有害代谢产物实验评价DD98菌株的安全性,为其工业化应用提供安全性保障。实验发现小鼠未发生不良反应,DD98不会引起急性毒性和异位现象,不产生有害代谢产物,对大部分常见抗生素没有耐药性,表明长双歧杆菌DD98具有较好的安全。