减压液相柱层析法分离提纯C_(60)/C_(70)

目前,C60/C70的分离提纯主要依靠柱层析的方法。用柱层析法分离提纯C60/C70的固定相主要是中性氧化铝、石墨、活性碳与中性氧化铝及活性碳与硅胶的混合物等。用中性氧化铝为固定相,正己烷为流动相的方法是分离C60/C70混合物最早使用同时也是最常用的方法,但它有许多难以克服的缺点。用活性碳与硅胶的混合物作为固定相可以充分克服这些缺点。但不足的是流速缓慢,分离时间长。1994年,Scrivens等采用氮气加压的方法,使得流速大大加快,这种方法不仅分离效果好,处理量大,而且C60/C70的收率达到95％。但是,这种方法也有明显的缺点:用氮气加压,设备比较复杂;玻璃柱加压,控制不好很不安全。本文提出一种减压柱层析的方法,采用国产活性碳和硅胶做固定相,干法装柱,不仅设备简单,安全可靠,C70的分离纯度高于文献报道的水平,而且处理量可提高一倍,溶剂用量也比较节省。

Taq DNA聚合酶的制备和纯化

Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一。试验利用含Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化大肠杆菌E.coli菌株,用异丙基硫代-β-D-乳糖苷(IPTG)诱导表达耐热Taq DNA聚合酶;采用热变性沉淀杂蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,Bio-Rex 70柱层析纯化蛋白,PCR反应检测Taq DNA聚合酶的浓度和活性。结果表明:分离纯化制备的Taq DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Taq DNA聚合酶水平。