PCR-DGGE分析啤酒废水生物处理工艺的微生物区系

应用基于16S rDNA的PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术对啤酒废水'水解酸化+SBR'工艺的微生物多样性进行研究.分别取水解酸化池与SBR池中不同深度以及不同处理时段的活性污泥,提取样品总DNA,通过PCR扩增、变性梯度凝胶电泳,将16SrDNA(V3区)的PCR扩增片段割胶克隆测序确定样品中的微生物群落,与筛选出的高效菌株进行对比分析.结果表明,水解酸化池中的微生物群落随深度的改变,在结构组成和种群数量上均有较大差异,2m深处微生物群落相对丰富,优势条带突出;SBR池不同深度微生物种群结构一致,沉淀期、进水期和曝气期不同处理时段的微生物种类一致,但优势菌群不同;所测序列y2、23、25、31、h5和15号分别与菌株uncultured Thermotogales sp.、Comamonas sp.WTOTU1、Agrobacterium tumefaciens、Bacillus subtilis、Bdellovibrio bacteriovorus、Comamonas testosteroni有高度同源性,活性污泥样品中的优势条带与高效菌株的序列不同,表明筛选出的高效菌并非为实际处理过程中的优势菌.

Rep-PCR应用于快速鉴定啤酒污染菌的研究

为评价rep-PCR在快速鉴定啤酒污染菌中的应用,首先比较了DNA提取方法,确定CTAB法作为制备rep-PCR的DNA模板的方法。并通过PCR产物直接测序的方法,从分离菌中鉴定得到11种常见的啤酒污染菌。用BOXA1R和(GTG)_5引物扩增分离菌,采用Gel ComparⅡ软件处理电泳图,构建污染菌的标准指纹图库。经过聚类分析表明,BOXA1R和(GTG)5对Lactobacillusbrevis、L.buchneri、L.casei/paracasei、L.plantarum和L.fermentum的聚类效果具有互补性,并首次提出指纹比对快速鉴定的相似系数阈值的概念。对来自三个不同来源的9株乳酸菌的快速鉴定结果表明,rep-PCR鉴定技术简单、快速、可靠,在快速鉴定方面将具有重要的应用价值。

PCR法快速鉴定啤酒中分离的乳酸杆菌

目的:建立一种灵敏、快速的PCR法检测啤酒中的乳酸杆菌。方法:设计一对属特异性引物扩增乳酸杆菌的16Sr DNA基因,对7株乳酸杆菌进行检测,扩增片断长度为223 bp,金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、李斯特菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、铜绿假单孢菌5种菌作为阴性对照菌。结果:该引物能扩增7株乳酸杆菌,结果为阳性;阴性对照菌结果为阴性。结论:该方法快速、灵敏、特异,为啤酒中乳酸杆菌的快速检测提供了有效的途径。

PCR技术检测啤酒中腐败菌的研究进展

对传统方法和PCR技术检测啤酒中腐败菌的原理进行了分析和比较,对传统检测方法更有优势的PCR检测技术进行了综述。综合分析了目前国内外PCR技术检测的最新研究,重点讨论了标志性基因(抗酒花基因)和引物设计在PCR检测技术中应用,并对PCR技术检测啤酒中腐败菌的应用前景进行了分析。

生物芯片、PCR在啤酒工厂的应用分析

本文介绍了生物芯片及PCR检测方法，通过试验比较了生物芯片、PCR及常规微生物检测结果的吻合率，并比较了三者的固定设备投入及检测成本。为啤酒工厂采用生物芯片及PCR检测提供技术支持。

PCR技术在酿酒中的应用

PCR技术即利用聚合酶链反应,进行DNA片段的体外扩增,可用于发酵过程的特定菌的检验和鉴定,该法快速、准确。PCR技术有特异引物PCR技术、RAPD-PCR技术和Nested-PCR几种。PCR技术在酿酒中可用于啤酒中的腐败菌的鉴定、对葡萄酒中苹果酸-乳酸发酵(MLF)的检测和控制以及对葡萄酒中生物胺的检测。(孙悟)

PCR在啤酒污染菌检测和鉴定中的应用

综述了PCR技术在啤酒污染菌鉴定中的应用,主要阐述了种或属的专一性PCR扩增和抗啤酒花质粒的跨种标记PCR扩增,三个抗啤酒花基因标记分别是horA、horB和horC,并介绍了论证抗啤酒花性的方法,它们分别是溴化乙锭和啤酒花的排溢试验,质粒重组试验和多个种中携带这三段基因的质粒比较试验等;还阐述了细菌抗啤酒花的主要机制,得出乳酸菌的抗啤酒花质粒可以通过基因的水平转移获得;最后通过比较两种PCR方法的优缺点,得出只有把两种方法结合起来使用才能在实际生产中产生加以应用。

啤酒有害菌的PCR检测和SYBR Green实时PCR定量

啤酒有害菌是一些能在啤酒中存活并使啤酒的外观和风味发生改变的细菌，对其进行快速检测和定量是啤酒生产急待解决的问题。我们从华润雪花啤酒（中国）有限公司各工厂提供的样品中分离到28株啤酒有害菌，16S rDNA序列的系统进化分析表明，其中26个菌株属于乳杆菌属（Lactobacillus spp．）、1个菌株为明串珠菌属（Leuconostoc spp．），1个菌株为片球菌属（Pediococcu sp．）。根据酒花（hop）抗性基因horA、horB和horC的保守序列设计了扩增这3个基因的PCR引物，用这些引物对28株啤酒有害菌进行了常规PCR检测，检出率分别为89％、79％和75％，用hor A—horC双引物进行检测，检出率为100％。用SYBR Green实时定量PCR技术，以horA基因为靶序列，建立了对啤酒有害菌的细胞数进行快速定量的新方法，用该方法测定的污染啤酒样品中有害菌的浓度与平板培养法相近。

PCR快速检测在啤酒工厂的应用

啤酒有害茵是一些能在啤酒中存活并使啤酒的外观和风味发生改变的细菌，对其进行快速、正确的检测是啤酒工厂急待解决的问题。微生物平皿培养法存在时间长及不易辨识的缺点。本文介绍了PCR用于纯生啤酒出厂检测及有害茵污染点分析两个应用实例。期望通过PCR检测技术拓展微生物检测思路，为啤酒行业同行抛砖引玉。

啤酒腐败细菌的PCR检测

啤酒腐败细菌是一类能在啤酒中存活并使啤酒的外观、风味和品质发生改变的微生物,对其进行快速检测是啤酒生产急待解决的问题.设计了针对抗酒花(hop)基因horA和horC的引物,对28株已知啤酒腐败细菌进行PCR检测,证明这些菌株至少含有horA和horC中的一种基因,这表明用horA和horC双引物对啤酒样品进行腐败细菌的快速检测是可行的.对取自啤酒厂的47个成品和半成品啤酒样品进行了horA和horC检测,其结果与常规的平板培养法相比符合率为90%.

啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系的建立与优化

为建立及优化啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系,以35个啤酒大麦品种(系)为试验材料,利用L16(44)正交试验设计研究DNA、Taq酶、dNTPs及引物浓度对啤酒大麦SSR扩增效果的影响。结果表明:模板DNA 2.0ng、10×PCR buffer 1.0μL、dNTPs 0.6μL、引物(0.25mmol·L-1)1.5μL、Taq酶(2.5U·μL-1)0.45μL的扩增效果最优,扩增结果重复性好且稳定。

聚合酶链式反应(PCR)技术鉴定啤酒腐败菌的最新进展

综述了PCR技术在啤酒腐败细菌鉴定方面的应用及最新进展 ;介绍了 3种PCR技术 ,特别讲述了利用这些技术对啤酒中乳酸菌的鉴定 ;并分析了PCR技术的局限性 ,对其应用前景进行了展望。

EMA-PCR法快速检测啤酒中腐败短乳杆菌

将叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术相结合,以酒花耐受基因hor C为靶基因,用啤酒腐败短乳杆菌基因组DNA作为模板进行扩增。结果发现,在前处理过程中加入EMA,当终质量浓度小于20μg/m L时,对活的短乳杆菌中靶基因的扩增没有明显抑制作用;而当EMA终质量浓度为1.0μg/m L时可有效抑制10~5 CFU/m L短乳杆菌死细胞的扩增。本实验建立的EMA-PCR检测方法的灵敏度为10~4活细胞/m L酒液样品。验证实验结果表明,在13株乳酸菌中,建立的hor C特异性EMA-PCR能有效检测到其中的全部5株啤酒污染菌,同时可区分这5株菌的活/死细胞混合体系,降低检测过程中的假阳性。

啤酒污染乳酸菌PCR引物的设计与验证

根据细菌16SrDNA序列的特点,对啤酒中常见污染乳酸菌16SrDNA序列进行分析,设计合成了针对啤酒污染乳酸菌的特征引物。并用该引物对从啤酒厂分离到的7种乳酸菌进行了检测,PCR结果表明该引物能够准确检测到啤酒中常见的乳酸菌。

一种啤酒有害菌中的乳酸菌的PCR检测

本文对工厂送来的有害菌样品进行划线纯化后，分别命名为TJl、TJ2、TJ3、TJ4、TJ5、TJ6和TJ7，并制成冻存管保存于-70℃冰箱。从中挑选TJ2、TJ3采用PCR（PolymeraseChainKeac—tion）m进行了分子生物学的菌种鉴定—16srRNA菌种鉴定实验，经鉴定为乳酸菌属。使用乳酸菌特异性引物对上述有害菌进行鉴定。证明其引物LbHC一1／LbHC一2可以用于乳酸菌的检测。

PCR技术检测CMO酿造原料和啤酒的试验

利用PCR技术检测经遗传修饰的GMO啤酒原料、辅料和生产的啤酒，作为控制采购大麦、玉米、糖浆质量的手段，以监控啤酒生产的生物安全性。

啤酒微生物污染及检验技术

如今,啤酒的生产环境和卫生条件已经得到大幅改善,且啤酒中的环境不利于微生物生长,但仍有少数微生物能够在啤酒中生存和生长,对啤酒的生产和啤酒的质量安全构成威胁。其中,常见的微生物是革兰阳性菌、革兰阴性菌和野生酵母,这些微生物会对啤酒的口感及产品品质产生直接影响,且会给啤酒制造商带来严重的经济影响。为了有效控制啤酒中的微生物污染,本文介绍了啤酒中常见的有害微生物及其检验技术,为提高啤酒质量提供参考。

啤酒腐败菌的检测方法

啤酒酿造过程中,啤酒腐败菌的检测一直采用传统的培养基检测。随着啤酒工业的迅猛发展,寻求一种快速、简便的检测方法是必然的要求。目前快速检测方法的研究主要表现在三个方面:(1)ATP生物发光检测方法,该方法已经应用于一些食品行业的公共卫生检测和微生物质量控制,而在啤酒工业,它适用于清酒和成品啤酒的微生物在线检测,最大优点是快速、简单和高灵敏度。(2)免疫学的检测方法适用于啤酒酿造过程的各个阶段的样品,其专一、简便、易于自动化的特点预示其有较好的发展前景,但需要降低单克隆抗体的制备成本。(3)基于核酸的分子生物学检测方法有PCR及其衍生技术,它们的优点是专一性强,灵敏度高,适于应急生产中出现的突发事件,但缺点是检测费用高,另外不能区分死菌和活菌。

聚合酶链式反应快速鉴定啤酒有害菌研究

建立了PCR快速鉴定啤酒有害菌的新方法。用基于抗酒花基因horA部分序列的特异引物对啤酒污染乳酸菌进行PCR榆测，灵敏度可达到3个细胞（CFU），样品的预培养需12—16h。啤酒有害菌检测所需时间从传统的5d减少到24h。

可用于基因检测的啤酒发酵液DNA提取方法研究

用玻璃珠法、溶菌酶法、冻融法、氯化苄(phCH2Cl)法提取啤酒发酵液、生产用啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、K氏酵母、啤酒生产污染细菌(T)、G-细菌(E.coli.DH5α)和G+细菌(BacillusYK-1R)的基因组DNA。溶菌酶法和冻融法对细菌的裂解率为99%～100%,对酵母的裂解率只有15%～28%;玻璃珠法对酵母的裂解率为92%～94%;phCH2Cl法对细菌和酵母的裂解率均为100%。对提取的啤酒发酵液基因组DNA浓度进行测定,结果为:玻璃珠法15.4g/ml、溶菌酶法18.0g/ml、冻融法13.8g/ml、phCH2Cl法40.7g/ml。电泳检测结果表明,除冻融法外,其余3种方法得到的混合菌DNA片段均大于23kb,无拖尾、无蛋白污染。phCH2Cl法图谱更清晰,DNA得率108μg/g湿菌体,RAPD-PCR图谱重复性好。为用基因诊断技术在线检测啤酒发酵过程中微生物污染,提供了一种可靠的DNA提取方法。