生物钟相关基因CLOCK及褪黑素受体MT1和MT2基因与2型糖尿病患者肠道菌群及炎症因子相关性分析

目的:探讨生物钟基因CLOCK及褪黑素受体MT1和MT2基因与2型糖尿病(T2DM)患者肠道菌群及炎症因子的相关性。方法:选择T2DM患者80例为观察组,选择同期进行健康体检者80例为对照组。检测两组血清CLOCK、MT1和MT2基因水平,以及超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-18水平。检测两组粪便中肠杆菌、双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、双歧杆菌/肠杆菌丰度。分析观察组血清CLOCK、MT1和MT2基因水平与T2DM患者肠道菌群及炎症因子的相关性。结果:观察组血清CLOCK、MT1、MT2基因水平明显较对照组低(均P<0.05)。观察组肠杆菌水平明显较对照组高,双歧杆菌、乳杆菌、双歧杆菌/肠杆菌水平明显较对照组低(均P<0.05)。观察组hs-CRP、IL-6、TNF-α、IL-18水平明显较对照组高(均P<0.05)。观察组血清CLOCK、MT1、MT2基因水平与肠杆菌、hs-CRP、IL-6、TNF-α、IL-18水平呈负相关,与双歧杆菌、乳杆菌、双歧杆菌/肠杆菌水平呈正相关(均P<0.05)。结论:血清生物钟相关基因CLOCK、MT1和MT2基因与T2DM患者肠道菌群及炎症因子均有一定相关性,可作为潜在的诊断指标及治疗靶点。

2型猪链球菌pnp基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性的研究

为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同温度(28℃、37℃、42℃)培养后测定OD_(600nm)值,绘制各菌株的生长曲线;利用革兰氏染色后经镜检及透射电镜观察各菌株的形态结构;通过滴定微孔平板结晶紫法检测各菌株的生物被膜形成能力;采用接触法分析各菌株的溶血特性;于含不同抗生素的THB平板上培养各菌株,分析各菌株的药物敏感性;于氧化条件与酸性条件下培养各菌株,通过统计存活率评价各菌株的氧化耐受与酸耐受能力。结果显示,缺失株的生长速率明显低于野生株和回补株,且在冷应激条件下的生存能力下降;与野生株和回补株相比,缺失株细胞壁肽聚糖层的结构更加松散、溶血能力下降、生物被膜形成能力下降、对不同类型抗生素的敏感性增强、抗氧化与抗酸能力均下降。上述结果表明pnp基因是SS2的一个重要调节因子,参与调节细菌对外界环境变化的适应能力。本研究为科学防控猪链球菌病以及研发新型抗菌药物奠定基础。

生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的机制研究

目的:探讨生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制的作用机制。方法:采用卵巢癌SKVO3细胞株构建裸鼠卵巢癌移植瘤,利用基因转染技术外源性导入重组基因质粒Period2。采用Real-time PCR法和Western bolt法检测移植瘤中Period2表达,治疗期间测量移植瘤体积。治疗后2周处死裸鼠,称取瘤重,采用Real-time PCR和Western blot法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax基因的表达。结果:外源性导入Period2基因在裸鼠移植瘤肿瘤组织中成功稳定表达。与对照组比较,Period2基因过表达组的肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和重量降低,抑瘤率升高,凋亡基因Bax表达明显升高,凋亡抑制基因Bcl-2表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Period2可能通过下调肿瘤凋亡抑制基因Bcl-2,促进凋亡基因Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制卵巢癌的生长转移,发挥抑瘤作用。

CLOCK基因rs4580704多态性位点与2型糖尿病和睡眠质量的相关性

目的研究CLOCK基因rs4580704位点多态性对睡眠质量的影响、对2型糖尿病发生发展的影响、以及两者之间可能的联系。方法使用飞行时间质谱方法检测CLOCK基因rs4580704多态性,对2型糖尿病组和健康对照组的基因型、睡眠质量等指标分别进行比较。结果病例组CLOCK基因rs4580704位点的GC型、GG型比例高于对照组(P<0.05);GG基因型睡眠质量明显降低(P<0.05)。结论CLOCK基因rs4580704位点G等位基因可能与睡眠质量降低和2型糖尿病的发生发展有关,而C等位基因则可能是保护性因素。

COX-2、p53、PCNA和nm23异常表达与胃癌生物学行为的关系

背景及目的:分子生物学研究表明COX-2、p53、PCNA和nm23基因蛋白异常表达与胃癌发生发展密切相关,有关它们异常表达与胃癌生物学行为的关系尚不清楚。本文旨在了解它们与胃癌临床病理生物学行为的关系。方法:用免疫组化(SP)方法检测胃癌手术切除71例标本中上述基因表达。结果:(1)胃癌COX-2过表达率为70.4%(50/71例),且过表达与肿瘤大小、大体类型、组织学类型、淋巴结转移(LN)及临床病理分期密切相关(P<0.05或0.01)。(2)71例胃癌标本的p53和PCNA过表达率分别为74.6%和78.9%,其中LN(+)胃癌p53和PCNA过表达(86.7%和88.8%)分别高于LN(-)病例(53.8%和61.5%)(P<0.05),且Ⅰ+Ⅱ期胃癌的p53和PCNA过表达率分别(52.2%和60.9%)显著低于Ⅲ+Ⅳ期病例(85.4%和87.5%)(P<0.05)。(3)LN(-)病例的nm23低表达率(88.5%)显著低于LN(+)病例的62.2%(P<0.05);且Ⅰ+Ⅱ期病例的nm23低表达91.3%明显高于Ⅲ+Ⅳ期病例62.5%(P<0.05)。(4)COX-2与p53、PCNA和nm23基因2个以上表达病例与表达异常或单因素表达异常者相比,在组织学类型、癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌COX-2与p53、PCNA和nm23异常表达与胃癌淋巴结转移和疾病进展等生物学行为密切相关。

生物钟基因period的分子生物学

生物过程的昼夜节律是所有真核生物和部分原核生物的基本特征。自从ｐｅｒｉｏｄ基因被克隆以后，生物钟基因的研究已经取得长足的进展。生物钟的４个基本部件如何调控昼夜节律的分子机制已被较详细地阐明，这是遗传学和基因组学相结合的一个非凡成就。本文回顾了ｐｅｒ基因及生物钟分子机制的研究历史，旨在为人类复杂行为的研究提供一条思路。

高血压大鼠肥厚心肌和主动脉中PER 2蛋白表达的变化

目的:以Sprague-Dawley(SD)大鼠作对照,测定自发性高血压大鼠(SHR)心肌和主动脉中PER 2(period 2)蛋白的表达。方法:取SHR及正常SD大鼠,在每12 h光暗交替的环境中饲养2周后,每隔4h取心脏和胸主动脉,Western blot方法检测SHR与正常大鼠心肌和主动脉组织中PER 2蛋白的表达。结果:正常大鼠和SHR心肌和主动脉组织中PER 2蛋白表达都呈现出明显的节律性,但SHR大鼠心肌组织和主动脉组织中PER 2蛋白的表达水平高于正常大鼠。结论:高血压大鼠肥厚心肌和主动脉组织中PER 2蛋白表达与正常大鼠中的表达存在差异,高血压导致心肌肥厚和主动脉病变与时钟蛋白表达异常之间可能有着互相促进的关系。

Her-2/neu基因过表达与胃癌生物学行为的关系研究

目的:了解Her-2/neu基因过表达与胃癌生物学行为的关系。方法:应用免疫组化法检测了具有随访资料的164例胃癌标本的Her-2/neu基因的表达状态。结果:164例胃癌的Her-2/neu基因过表达率为19·51%,其过表达与患者的性别、年龄、肿瘤生长的部位、分化程度、浸润深度、脉管内癌细胞的浸润、UICC分期均无关(P>0·05);仅与胃癌的病理类型密切相关(P<0·05);且Her-2/neu基因过表达与胃癌的预后无关,胃癌的预后仅与胃癌的浸润深度和UICC分期有关。结论:胃癌Her-2/neu基因过表达似与胃癌的病理类型密切相关,预后与肿瘤的浸润深度和UICC分期有关。

猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究

目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统1094HK/1095RR的反应调节因子ciaR基因敲除突变株(ΔciaR),并研究ΔciaR的生物学功能。方法和结果基于同源重组原理筛选ciaR基因缺失株,PCR分析及Southern杂交结果均显示突变株构建成功。通过检测OD600值绘制生长曲线,发现突变株在37℃和40℃其OD600值均明显低于野生株;与40mmol/L过氧化氢共作用15min后涂板计数,突变株存活率明显低于野生株;不同pH值的培养基中培养,发现在pH5.0的酸性环境中突变株OD600值明显低于野生株;野生株与突变株对BALB/c小鼠攻毒(约1×109CFU/只),各10只,两组16h后均死亡9只。结论成功获得05ZYH33ciaR基因敲除突变株;发现删除ciaR基因会导致细菌的生长繁殖能力减弱,抗氧化应激能力下降,在酸性环境生长存活能力下降;但对小鼠毒力无差别。

鼠抑铁素2蛋白的原核表达及鉴定

目的表达鼠抑铁素2(lcn2)蛋白,并检测表达产物的生物学活性。方法从小鼠RAW264.7巨噬细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增lcn2基因片段,插入原核表达质粒pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达。表达产物经His-tagin-gel stain鉴定后,采用Ni2+-NTA亲和层析纯化,并检测其生物学活性。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定,表明重组质粒pET-32a(+)-lcn2构建正确。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为21000,表达量占菌体总蛋白的35%,主要以包涵体形式存在。纯化后蛋白浓度为1.0g/L,并对大肠杆菌和乙型链球菌生长有一定的抑制作用。结论成功地在原核细胞中表达了重组lcn2蛋白,且表达的蛋白具有一定的抑菌作用。

多形性腺瘤基因锌指蛋白PLAGL2的研究进展

多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)是一类源于多形性腺瘤基因(PLAG)家族的锌指蛋白,家族成员还包括PLAG1和PLAGL1,三者在结构上高度同源,但具有不同的功能,主要与结合的DNA不同有关。近年来,对于PLAG1、PLAGL1和PLAGL2的结构、功能和作用机制等方面的研究取得了较大进展,且发现PLAGL2与细胞代谢及多种系统性疾病的发生和发展有关,而在肿瘤抑制或肿瘤促进方面存在争议。文章就PLAGL2的结构、转录机制、生物学功能及其与系统性疾病和肿瘤的关系等方面的研究进展进行综述。

新疆维吾尔族人群SLC22A1基因多态性频率分布及糖尿病家族史对其突变的影响研究

背景转运蛋白(OCT)是近年来备受关注的药物转运体,由SLC22A1基因编码。SLC22A1基因具有显著的遗传多态性,已在多个种族中发现了多个基因突变,是引起2型糖尿病(T2DM)患者二甲双胍生物利用度差异的重要原因。目的研究新疆维吾尔族青年男性SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点等位基因和基因型的频率分布,以及T2DM家族史对SLC22A1基因突变的影响,为T2DM患者基因导向性二甲双胍个体化治疗提供理论依据。方法2014年9月—2015年9月,招募新疆维吾尔族男性健康志愿者276例为研究对象。采集受试者外周血5 ml,提取DNA,采用Snapshot技术平台分析受试者SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点等位基因、基因型频率和基因突变情况。结果 SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡,具有群体代表性(χ~2=0.009,P=0.976;χ~2=0.246,P=0.620)。亚洲人群、高加索人群、非裔美国人群、新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs34059508位点等位基因及基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs34059508位点等位基因A频率低于高加索人群(P<0.001)。亚洲人群、汉族人群、新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs4646277位点等位基因及基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,新疆维吾尔族人群SLC22A1基因rs4646277位点等位基因T频率高于汉族人群(P<0.017)。19例有T2DM家族史者中12例(63.2%)发生SLC22A1基因突变,208例无T2DM家族史者SLC22A1基因突变率为77.9%(162/208),差异无统计学意义(χ~2=1.367,P=0.242)。结论新疆维吾尔族男性SLC22A1基因rs34059508、rs4646277位点突变率分别为0.4%、5.8%;未发现T2DM家族史对SLC22A1基因突变产生影响。

水貂白细胞介素-2基因的克隆与生物学信息分析

根据GenBank中狐白细胞介素-2（IL-2）基因序列（AJ621188），设计合成1对引物，以水貂脾脏组织RNA为模板，采用RT—PCR技术扩增水貂IL-2基因。序列分析表明：水貂IL-2基因长468bp，编码155个氨基酸，其中含21个氨基酸的信号肽和134个氨基酸的成熟多肽。IL-2蛋白分子质量为17．84ku，等电点为4.65，含有4个与二硫键形成有关的半胱氨酸，1个糖基化位点，成熟肽含有3个仪螺旋，5个B折叠区，9个B转角。同源性分析发现，水貂IL-2基因序列与GenBanK发表的21种IL-2基因核苷酸序列同源性为2．9％，88．5％，氨基酸序列同源性为5．2％-80．6％。水貂与GeneBank中21种动物的IL-2基因序列分析和系统进化树分析表明，IL-2基因存在种属特异性。水貂IL-2基因的成功克隆，为进一步研究水貂IL-2基因生物学活性和应用奠定基础。

鸡白细胞介素-2的研究进展及应用前景

鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,是鸡体内一类重要的细胞因子,在机体的免疫应答中起重要作用。近年来,随着鸡的IL-2基因克隆成功,使鸡的IL-2研究及应用得到了一定的发展,同时作为免疫增强剂和构建新型基因工程疫苗呈现出一定的应用前景。

猪链球菌2型中国强毒株05ZYH33 ofs基因敲除突变株构建及其生物学特性研究

目的探究猪链球菌血清浑浊因子ofs基因在强致病性2型猪链球菌致病过程中的作用。方法利用同源重组基因敲除方法构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,将构建好的质粒电转化入猪链球菌感受态,同源重组筛选ofs基因敲除突变株,通过组合PCR、Southern杂交和DNA测序对疑似突变株进行验证。生物学功能实验研究比较ofs突变株和野生株05ZYH33在革兰氏染色、菌落溶血活性、生长速率和毒力等方面的差异。结果组合PCR、Southern杂交和DNA测序结果均证实ofs基因敲除突变株05ZYH33Δofs构建成功,体外实验结果显示ofs基因缺失后菌株在革兰氏染色和菌落溶血活性及形态、生长速率等方面未发生改变,但小鼠毒力实验数据结果表明敲除突变株Δofs的毒力降低。结论猪链球菌2型ofs基因与细菌的毒力相关,本实验构建的突变株05ZYH33Δofs为进一步研究猪链球菌2型的致病机理奠定基础。

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-2(hIGF-2)

目的 :研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 -2 (rh IGF-2 )。方法 :将 14 k Dh IGF -2前体 c DNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (Bm NPV )转移载体 p Bak PAK8中 ,经与野生型病毒 DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒 Bm NPV/ IGF-2。以 Bm NPV/ IGF-2感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4,48,72 ,96,10 8,12 0 h提取家蚕血淋巴液 ,以 ELISA法测定不同时象家蚕血中 IGF-2浓度 ,采用 Western-blot分析鉴定 IGF -2免疫学活性 ,MTT法观察其对 NIH3 T3细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,Bm NPV/ IGF-2感染家蚕幼虫 96h后 IGF-2表达率最高 ,每毫升血淋巴中约含 IGF-2 14 μg,Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.0 k D成熟 h IGF-2 ,并对 NIH3 T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞生长能力明显优于来源于 E.coli的 IGF-2标准品。结论 :本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rh

青海地区乳腺癌患者B淋巴细胞瘤-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标关系研究

目的探讨青海地区乳腺癌(BC)患者B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因C(-938)A多态性(AA、AC、CC基因型)与临床生物学指标的关系。方法选取2014年1月—2015年12月青海大学附属医院乳腺甲状腺外科接受手术治疗的符合纳入标准的BC患者65例为研究对象。术中采集患者BC组织,采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测Bcl-2基因C(-938)A多态性(AA、AC、CC基因型);收集患者临床生物学指标,包括病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、人表皮生长因子2(HER2)状态、分子分型。采用列联系数χ2检验分析Bcl-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标的关系。结果 65例患者中,AA、CA、CC基因型分别为6、30、29例。由于AA基因型例数少,无法独立分析,故将AA基因型和CC基因型合并分析。Bcl-2基因C(-938)A多态性与病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、ER状态、PR状态、HER2状态、分子分型均不存在关联性(P>0.05)。结论青海地区BC患者Bcl-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、ER状态、PR状态、HER2状态、分子分型无关。

鸡IL-2和IL-4融合基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性

为提高鸡球虫病活疫苗的免疫效果并降低其副作用,本试验用合成的鸡白介素2(chIL-2)和鸡白介素4(chIL-4)基因片段构建3个融合基因真核表达质粒,并利用脂质体法将其转染至原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其表达水平,MTT法测定其表达的分泌产物活性。结果显示:成功构建的pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-4-EGFP重组真核表达质粒能在原代鸡胚盲肠上皮细胞中高效表达;3种重组真核表达质粒转染后24~96 h的鸡脾淋巴细胞活性极显著高于空载组(P<0.01),且在72 h时达峰值;而单一因子组鸡脾淋巴细胞增殖活性极显著低于pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP组(P<0.01)。由此可见,本试验成功构建了能表达分泌chIL-2和chIL-4的融合基因重组质粒;且chIL-4-chIL-2融合蛋白生物学活性显著高于单一因子。

人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测

提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性。重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1∶3.1,抑制比活性为2511U/mg。

推广的Tanh函数法与(2+1)维Burgers方程组新的精确行波解

借助于符号计算软件Maple,通过一种构造非线性偏微分方程更一般形式行波解的直接方法,即推广的Tanh-函数法,求解(2+1)维Burgers方程,得到该方程新的更一般形式的行波解,包括扭状孤波解,钟状解,孤子解和周期解等,并对部分新形式孤波解画图示意.