淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)Bo-1菌株产生抗菌物质的发酵条件优化

以淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)Bo-1菌株发酵液乙酸乙酯粗提物对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,Xoo)抑菌活性为检测指标,采用单因素试验优化Bo-1菌株产生抗菌物质培养所需的碳源、氮源、无机盐;通过正交试验优化培养基配方和摇瓶发酵条件。研究结果表明,Bo-1菌株产生抗菌物质适宜的碳源、氮源和无机盐分别为淀粉、蛋白胨、MgSO4·7H2O;优化的培养基配方为:淀粉30 g/L,蛋白胨2 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L;适宜的发酵条件为:温度30℃,转速150 r/min,装液量80 mL/250 mL,pH 6.5。

引进菌株Bionectria ochroleuca对几种植物病原真菌的拮抗效应

为了挖掘对植物病害防治有效的生防菌株,采用平板对峙培养法和生长速率法等研究了引进菌株Bionectria ochroleuca对几种植物病原真菌的拮抗效应,旨在对其推广应用奠定理论基础。引进菌株B.ochroleuca对植物病原真菌Alternaria solani、Botrytis cimerca、Fusarium oxysporum.sp cucumebrium Owen、Fusarium graminearum Sch1.f.sp vasinfectum（Atk.）Snyd＆Hans.、Colletotrichum capsici、Fusrium moniliforme、Fusarium graminearum、Cercosporidium sofinum均有不同程度的抑制作用,平均抑菌带宽度在3.5-14.4 mm范围内,且其发酵产物对病原菌菌丝的生长及孢子的萌发也具有一定的抑制效果,对F.oxysporum.sp cucumebrium Owen抑制效果最好,菌丝生长抑制率高达73.3%,孢子萌发相对抑制率高达78.2%,并使萌发孢子的芽管发生畸变。B.ochroleuca发酵产物能够显著降低病原真菌菌丝内的SOD、CAT保护酶活性（P〈0.05）,处理21 h时,F.oxysporum.sp cucumebrium菌丝体内的SOD酶活仅是对照处理的28.8%,CAT酶活是其对照处理的34.8%。引进菌株B.ochroleuca作为植物病原真菌的生防菌株具有一定的应用潜力。

一株产虫草素的冬虫夏草内生真菌Bionectria ochroleuca OS17（英文）

虫草素是一种核苷类似物,具有多种药理作用。利用虫草素产生菌发酵的方式获得虫草素,可能是产生虫草素的一种新方法。为筛选能产虫草素的内生真菌,从中国传统的中药冬虫夏草子实体中共分离得到42株真菌,经PDB液体培养后,采用高效液相色谱(HPLC)鉴定其代谢产物。结果表明:菌株OS17的代谢产物中含有虫草素,且虫草素产量为40.16 mg/L。基于形态学特征和ITS序列分析,菌株OS17被鉴定为淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)。这是首次从冬虫夏草中分离得到能产虫草素的生赤壳属,表明了内生真菌具有产生多种生物活性物质的潜力。

一株淡色生赤壳菌的生防作用分析及系统发育树构建

保护地栽培面积的增加使果蔬病害的防治难度加大,生物防治手段越来越受到青睐。采用平板对峙法、扫描电镜法、5.8S rDNA-ITS序列分析及系统发育树构建对一株从草炭土中分离的菌株进行研究。该菌对番茄灰霉病、番茄叶霉病、番茄绵疫病、番茄黄萎病、番茄枯萎病、杨树烂皮病、杨树枯萎病和黑穗醋栗叶斑病均有抑制作用。扫描电镜显示,该生防菌对番茄灰霉病具有明显抑制作用。5.8S rDNA-ITS序列分析及系统发育树构建表明该菌为淡色生赤壳菌,为果蔬病害的生物防治提供了新的选择。

抗水稻白叶枯病菌植物内生真菌的筛选、鉴定

从多种植物叶片内分离、纯化出31株植物内生真菌,活性筛选表明分离自健康水稻叶片内生真菌Bo-1菌的乙酸乙酯粗提物对水稻白叶枯病菌具有较强的抑菌活性。当供试浓度为100μg/mL时,Bo-1菌乙酸乙酯粗提物对水稻白叶枯病菌抑菌圈为22.4 mm,与同浓度的氯霉素对水稻白叶枯病菌的抑菌效果相当。通过形态学特征观察和ITS rDNA测序分析,Bo-1菌被鉴定为淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)。抗菌谱实验表明,Bo-1菌对多种细菌类病原体具有较强的拮抗能力。

一株具有杀虫活性真菌的筛选及活性物质稳定性研究

以卤虫为初筛指示虫,以蚜虫为复筛指示虫,从广西玉林土壤分离筛选出具有杀虫活性的菌株YLZ42。根据培养特征、形态特征及18S rDNA、ITS序列分析,菌株YLZ42被鉴定为淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)。生物测定结果表明,YLZ42发酵液的乙酸乙酯萃取物对小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾具有明显的毒杀活性,其校正死亡率在78.9%以上。YLZ42发酵液稳定性研究表明,其活性成分在100℃处理60 min,pH1-11条件下仍具有较强的杀虫活性。

聚丁二酸丁二醇酯高效降解菌的筛选及降解特性

从蔬菜地表微环境空气微生物中分离筛选获得了一株高效降解聚丁二酸丁二醇酯(PBS)的真菌菌株BFM-X1,通过形态学和ITS rDNA序列测定分析,确认该菌株为淡色生赤壳属真菌(Bionectria ochroleuca)。该菌株降解PBS薄膜的最适温度为25°C?30°C,培养基初始pH为4.0,以甘油、大豆油、葡萄糖及PBS乳剂分别作为唯一碳源时对PBS薄膜均具有很高的降解率;菌株对PBS薄膜的降解率随PBS乳剂含量变化的曲线呈倒"U"型,最佳PBS乳剂浓度为1 g/L,且对PBS的降解呈现诱导期、指数降解期和加速降解期等3个阶段。降解初期薄膜表面首先粗糙化,失去原有的黑色光泽,随后出现孔洞,逐渐呈现破碎化,最后薄膜被完全降解,降解部位仅残留黑色色素。

淡色生赤壳菌Bo-1菌株拮抗物质的分离纯化、解析及活性分析

从浙江省金华市郊水稻内生菌中筛选到1株拮抗水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)P6生理小种的淡色生赤壳菌Bionectria ochroleuca Bo-1菌株。该菌株的菌体和发酵液对Xoo P6生理小种均表现出较强的拮抗能力。以P6生理小种作为指示菌进行活性跟踪,通过分步萃取、硅胶柱层析、高效液相色谱等,分离纯化获得拮抗活性物质结晶;对所获得的结晶物进行核磁共振氢谱分析和质谱分析,通过解析与比对,该物质分子量为344.0835,分子式为C_(18)H_(16)O_7,鉴定为松萝酸(usnic acil)。将纯化的松萝酸以20%叶枯唑(bismerthiazol)和3%中生菌素(zhongshengmycin)为对照,采用96孔板法测定对Xoo P6生理小种的抑菌活性,最低抑制浓度为200μg/mL,表明松萝酸具有较强的抑菌活性,但较中生菌素弱,与20%叶枯唑效果相近。

1株选择性降解茅苍术挥发油内生真菌的筛选与鉴定

目的:从茅苍术Atractylodes lancea根中分离内生真菌,筛选能选择性降解转化茅苍术挥发油的菌株,实现内生真菌对茅苍术挥发油主要成分的转化作用。方法:利用微生物体外转化方法,通过气相色谱追踪挥发油变化,筛选出能选择性利用挥发油的内生真菌。通过单因素试验研究碳源、转速、装液量、初始pH和植物组织添加对内生真菌降解的影响,并选取对降解影响较大的因素进行正交试验。结果:筛选到的内生真菌ALG-13可以选择性利用挥发油,改变了挥发油主要成分相对百分比。总体表现为苍术酮和苍术素增加,β-桉叶醇和茅术醇含量减少。经过真菌选择性降解后,挥发油组分更加接近道地茅苍术的挥发油组成。ALG-13基于形态特征、ITS序列系统学分析,确定为生赤壳属真菌Bionectria ochroleuca。最优降解条件为200 r.min-1,pH 4.5,250 mL装液量为50 mL、蔗糖为碳源。结论:内生真菌ALG-13可以选择性降解挥发油,使挥发油组分接近道地药材。

一株病原真菌的分离鉴定及对淡色库蚊幼虫的致病性测定

目的筛选对淡色库蚊幼虫具有高致病力的资源菌株。方法从土壤中分离获得对淡色库蚊幼虫有致病力的资源菌株,进行形态学和分子生物学鉴定,并检测其对淡色库蚊幼虫的最佳致病温度。结果经鉴定新分离的菌株为淡色生赤壳菌,在实验室条件下该菌株对淡色库蚊幼虫有高致病力,用浓度为1.0×106个/mL的孢子悬浮液处理淡色库蚊3龄幼虫,10 d累计死亡率为100%。该菌株对淡色库蚊幼虫的最佳致病温度范围为24℃~26℃,LT50低于3 d。不同温度条件下,淡色生赤壳菌对淡色库蚊的致病力差异显著(F=27.569,df=23,P<0.05)。结论分离的淡色生赤壳菌对淡色库蚊幼虫具有高致病力,可作为媒介蚊虫生物防制的资源菌株进一步研究。

淡色生赤壳菌YLZ42发酵液稳定性及活性物质的初步研究

从广西玉林土壤中分离获得一株淡色生赤壳菌YLZ42,其发酵产物对蜡样芽孢杆菌等具有良好的抑制作用。以蜡样芽孢杆菌为指示菌对该菌株发酵产物的活性特性进行了研究,结果表明该菌发酵液的抑菌活性在40~60℃温度范围内比较稳定,60℃加热1 h,活性损失小于7%;在p H 2~7范围内抑菌活性稳定,p H大于7时,活性损失较大,在p H 8条件下处理12 h活性损失已达到64%;发酵液适宜在酸性条件下保存,p H 4的发酵液放置15 d后活性损失小于5%;活性物质对紫外线不敏感,经紫外照射24 h后抑菌活性基本不变。然后采用萃取、薄层制备、HPLC制备等提取分离方法得到了抑菌活性物质的纯品,分子量为513,与相关文献中报道的活性代谢产物的分子量均不同。

基于卤虫致死试验分离淡色生赤壳菌YLZ42杀虫活性代谢产物

淡色生赤壳菌具有优良的生防潜力.本实验室前期从广西玉林土壤中分离到一株对小菜蛾等多种农业害虫具有毒杀作用的淡色生赤壳菌YLZ42.采用杀虫活性追踪的方法,用改进后的卤虫致死试验（Brine shrimp lethality test,BSLT）进行活性评价,通过硅胶柱层析、萃取、薄层制备、液相制备的手段进行分离纯化,并探索活性化合物的生物活性和稳定性.分离到杀虫活性化合物纯品,高分辨率质谱显示该活性化合物相对分子质量为788,其对卤虫24 h的LC50为86.89 mg/L.该化合物在温度低于30℃,pH 6-8以及光照和紫外光照条件下活性稳定.该杀虫活性化合物的氢谱与已报道过的分子量为788的化合物均不相同,有望开发为新的微生物源杀虫剂.