30L生物反应器连续灌注培养重组CHO-C_(28)细胞表达HBsAg的研究

应用３０ Ｌ生物反应器和微载体悬浮 培养技术，通过电脑全自动控制，连续灌注培养分泌ＨＢｓＡｇ 的重组ＣＨＯ－Ｃ２８细胞。试验了培养方式、连续灌流速度，反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养６０ 天，细胞的生长形态、ＨＢｓＡｇ 分泌动态和染色体数。研究结果表明，连续培养６０ 天，细胞密度可达７．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ，平均维持在（５．０～６．０）×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ，收液的ＲＰＨＡ 滴度可达１∶５１２，ＨＢｓＡｇ 每天平均产量为３０ ｍ ｇ。

应用生物反应器连续培养基因重组CHO细胞的研究

应用5L生物反应器悬浮培养乙肝重组DNA转化的CHO细胞B_(43)株生产HBsAg。试验了细胞接种量、微载体的加入方式、培养方法(半流加培养和连续灌流培养)对细胞生长形态和HBsAg分泌的影响,初步建立了5L生物反应器的生产工艺,在5L生物反应器最适合连续灌流培养的条件是pH 7.30—7.40,DO 25—35%,T 36.5℃,微载体6—8g/L,灌流速度5.5—7.5L/24h细胞连续培养60天,细胞密度维持在5.0×10~6—1.0×10~7/ml之间,收获细胞液的RPHA效价为1:512—1:1024,HBsAg含量为3—5mg/L。