生物素化壳聚糖微球的体外抗癌活性

目的 研究一套有预定位及肿瘤导向作用的药物载体系统。方法 以生物素化无唾液酸胎球蛋白为分子识别系统 ,与肝癌细胞特异性结合 ,将包封有 5 Fu的壳聚糖微球生物素化 ,作为药物载体 ,通过生物素 亲和素系统将二者桥连 ,用“三步法”研究微球体外抗肿瘤作用。结果 亲和素 生物素化受体介导的生物素化壳聚糖微球能与体外培养的肝癌细胞特异结合并有显著的抗癌作用。结论 生物素化微球 亲和素 生物素化受体 (或单克隆抗体 )系统可望在体内有预定位及肿瘤靶向作用 ,有广泛的应用前景。

亲和素-生物素间接偶联的压电DNA传感器研究

采用 33′ 二巯基硫代丙酸的金电极自组装技术 ,用乙基 3 (3 二甲氨基 )碳二亚胺盐酸盐 (EDC)和N 羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS)偶联剂将亲和素固定于金电极上 ,联于生物素标记的探针 ,制备成压电DNA传感器的检测电极 ,和杂交液中的待检葡萄球菌肠毒素B的ssDNA进行杂交 ,通过频率信号检测DNA杂交的量 ,达到检测的目的 .采用不同长度的基因片段进行了研究 ,制作的传感器一致性、特异性都较好 ;杂交后的电极 ,电极再生后 。

量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定雌三醇

以生物素化羊抗兔免疫球蛋白和量子点标记链霉亲和素为荧光探针，采用竞争免疫分析模式，建立了一种灵敏度高、选择性好的检测雌三醇的荧光免疫分析方法。对几种测量参数如温育时间和温度、缓冲溶液pH、试剂浓度等进行了优化；方法的线性范围为0．01～1000ng/mL，检出限0．0029ng／mL，血清样品加标回收率在91％-117％之间。

钛种植体表面固定生物素的实验研究

目的利用生物素-亲和素系统,将生物素共价键合在钛基材表面,为钛种植体表面接枝生物活性分子提供新的实验方法。方法使用3-氨丙基膦酸(APP)对钛基材表面进行酸蚀处理并使其获得游离氨基,由碳二亚胺(EDC)介导,通过与羧基反应形成酰胺键以实现生物素-亲和素系统在钛种植体表面的固定。结果通过环境扫描电镜、傅立叶变换红外光谱、X射线光电子能谱、免疫荧光等检测方法对样品进行表征,证实钛基材表面已成功接枝生物素。结论采用生物素-亲和素系统,可以在氨基化的钛基材表面成功接枝生物素,为钛种植体表面生物化修饰的研究提供新的方法和思路。

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA+0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 。

基于生物素-亲和素系统的压电免疫传感器检测相思子毒素研究

利用生物素-亲和素系统的放大作用和纳米金质量扩增效应,建立了压电免疫传感器检测相思子毒素的新方法。首先在石英晶体的金电极上依次组装二巯基丙酸、EDC和NHS进行表面修饰,然后通过亲和素固定生物素标记相思子毒素多抗来制备敏感膜,利用纳米金的质量扩增效应设计了一种"毒素-纳米金标记单抗"复合物,成功实现了对相思子毒素的检测,提高了传感器灵敏度和重现性。本传感器对相思子毒素响应的线性范围为0.05～5mg/L;回归方程为Δf=50.81CAbrin+67.11(r=0.9903,n=10,P<0.0001);检测灵敏度为50.81Hz.L/mg。

铂电极表面生物素-亲和素固载单链脱氧核糖核酸的电化学传感器

通过直接吸附将亲和素固定在Pt电极表面,联于生物素标记的脱氧核糖核酸(DNA)探针,制备了电化学基因传感器,建立了Pt电极表面修饰单链脱氧核糖核酸(ssDNA)的方法。修饰电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)或根癌农杆菌终止子(NOS)DNA片段进行杂交,以邻菲罗林钴络合物[Co(phen)3+3]为杂交指示剂,循环伏安法测量,通过杂交前后指示剂峰电流的变化检测DNA杂交的量。研究了电极修饰、杂交反应及测量的适宜条件,在优化实验条件下,峰电流的差值与DNA杂交量之间有良好的线性关系,相关系数r=0.9996。杂交后的电极经热变性再生,可重复使用多次。

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

目的建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb)。方法用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。结果本法抗原包被量为0.083μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%～104.0%;包被板37℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P<0.01)。结论间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。

生物素化壳聚糖微球用于体外肿瘤靶向治疗

生物素 -亲和素介导的肿瘤靶向治疗是近几年来肿瘤早期诊断、治疗研究的热点。将包封有 TNFα的壳聚糖微球生物素化 ,以生物素化无唾液酸胎球蛋白为导向系统 ,采用“三步法”研究了微球体外抗肿瘤毒性实验。结果表明 :生物素化壳聚糖微球对体外培养的肝癌细胞 SMMC- 772 1有显著的抑制作用 (抑制率为 6 0 .8% ,P<0 .0 1)。

亲和素生物素系统^(153)Sm标记物在抗CEA单抗预定位放免显像中的实验研究

目的 探讨1 5 3Sm标记亲和素 生物素系统 (ABS)在荷人结肠癌裸鼠模型中进行抗CEA单克隆抗体 (McAb)预定位放免显像的可行性。方法 首先用1 5 3Sm标记螯合DTPA生物素 (DB2 ) ,然后利用生物素与亲和素 (AV)的高亲和力特性 ,对链霉亲和素 (SA)进行1 5 3 Sm标记 ,通过DTPA环酐法将1 5 3Sm标记到抗CEAMcAb上。应用三步法方法A(生物素化CEAMcAb AV 1 5 3 Sm标记DB2 )和方法B(链霉亲和素化CEAMcAb 生物素 1 5 3Sm标记SA)以及二步法方法A(生物素化CEAMcAb 1 5 3Sm标记SA)和方法B(链霉亲和素化CEAMcAb 1 5 3Sm标记DB2 )预定位于荷人结肠癌裸鼠 ,分别于注射放射性标记物后 4～ 72h进行γ显像和体内分布测定。以1 5 3 Sm CEAMcAb、1 5 3Sm SA、1 5 3Sm DB2 和生物素化正常鼠IgG AV 1 5 3 Sm标记DB2 作为对照组。结果 三步法 :方法A在标记物引入后 4h肿瘤即显影 ,其肿瘤 %ID g在 4和 2 4h分别为 1 78和 1 36 ,而血T NT分别为 5 76和 12 94,血T NT均显著高于各对照组 ;方法B肿瘤部位未见明显放射性摄取 ,其肿瘤 %ID g和血T NT与1 5 3 Sm SA对照组相近。二步法 :方法A在标记物引入 2 4h肿瘤即有放射性聚集 ,血T NT为 2 0 3,肿瘤的 %ID g为 2 10 ,且随预定位时间增加未见明显降低 ;

应用SPR生物传感器检测酸菜发酵液中大肠杆菌

应用SPR传感器可以快速检测酸菜发酵液中的大肠杆菌,以便检测和控制酸菜发酵液中的亚硝酸盐含量,保证发酵食品安全。采用生物素-亲和素系统增大SPR传感器折射信号,获得了传感器的折射率与大肠杆菌浓度的回归方程,实现了对酸菜发酵液中大肠杆菌浓度快速,精确检测,提高大肠杆菌检测限到104cfu·mL-1。

CD45单抗介导的淋巴瘤荷瘤裸鼠三步法预定位放免显像

【目的】评价生物素化CD45单抗介导的99mTc-生物素在人Raji细胞移植瘤裸鼠模型中三步法预定位放免显像的价值。【方法】CD45单抗及DTPA-生物素的99mTc标记采用直接标记法。取人Raji细胞移植瘤裸鼠18只,随机分为2组,每组9只。实验组为三步法预定位放免显像组,静注生物素化CD45单抗100μg,48 h后静注亲和素200μg,再过48 h静注99mTc-生物素7.4 MBq(20μg);对照组为99mTc-CD45单抗放免显像组,静注99mTc-CD45单抗100μg。上述两组裸鼠分别于注药后3、6、12 h分别进行SPECT显像,每个时间点各取3只裸鼠断颈处死后,取脏器组织及肿瘤,称重后在γ计数仪中测量放射性计数,经放射性衰变校正后计算各脏器的%ID/g及肿瘤/非肿瘤(T/NT)比值。【结果】平均每分子CD45单抗约结合12分子生物素,CD45单抗及DTPA-生物素的99mTc标记率分别>70%和>80%。三步法给药后荷瘤裸鼠SPECT显像及生物分布示:整个显像期间血池内放射性均较低,肝脾见较多放射性浓聚;注射标记物后3-6 h,肿瘤显影清晰,并持续到12 h;注药后3、6和12 h肿瘤的%ID/g分别为1.73±0.22、1.24±0.03和0.94±0.07;肿瘤/血液比值分别为3.5、4.9和7.8;肿瘤/肌肉比值分别为8.2、8.9和10.4。而静注99mTc-CD45单抗后则可见肝脾及肾脏明显放射性聚集,12 h血池内见较多放射性分布,肿瘤部位见有少量放射性集聚,12 h肿瘤的%ID/g为0.89±0.13,肿瘤/血液及肿瘤/肌肉的比值分别为1.6和2.5。【结论】与99mTc-CD45单抗相比较,99mTc-生物素三步法预定位放免显像明显改善肿瘤T/NT比值,标记物注射后3 h即可使肿瘤显影。

LHRHa靶向紫杉醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的:制备促黄体激素释放激素类似物(Luteinizing hormone-releasing hormone analogues,LHRHa)靶向紫杉醇脂质体(Paclitaxel liposomes,PTX-Lipo),研究其在体外增强紫杉醇(Paclitaxel,PTX)对卵巢癌A2780/DDP细胞的抑制作用。方法:采用薄膜超声法制备PTX-Lipo与LHRHa靶向紫杉醇脂质体(LHRHa-Paclitaxel liposomes,LHRHa-PTX-Lipo),用透射电镜考察脂质体形态;高效液相色谱法测定2种PTX-Lipo的包封率;激光共聚焦法通过卵巢癌A2780/DDP细胞对4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑荧光素的摄取检测来反映细胞对NBD-Lipo与NBD-LHRHa-Lipo的摄取情况;MTT法及细胞克隆形成实验检测LHRHa-PTX-Lipo体外对卵巢癌细胞的生长抑制情况。结果:制备LHRHa-PTX-Lipo的平均粒径123.4 nm,包封率在90%以上;A2780/DDP细胞对NBD-LHRHa-Lipo组的荧光摄取明显高于NBD-Lipo组;LHRHa-PTX-Lipo对A2780/DDP细胞的生长及克隆形成抑制明显高于PTX组及PTX-Lipo组(P<0.05)。结论:采用薄膜超声法制备的LHRHa-PTX-Lipo可使药物在靶部位聚集,增强药物对卵巢癌细胞的抑制作用。

肺癌放射免疫导向手术的动物实验研究

目的 探讨放射免疫导向手术在检测小鼠肺腺癌动物模型肿瘤转移的灵敏度、特异性及可靠性。方法 应用抗人肺腺癌单克隆抗体LC 1生物素化预定位技术 ,进行肺腺癌小鼠放射免疫导向手术。结果 γ照相机体外显像和井型探测仪体内放射性分布探测的结果显示 :在注射放射性核素 2h后 ,生物素化抗体预定位的荷瘤小鼠的肿瘤即有明显放射性浓集 ,其原发肿瘤和肺部转移灶的T/NT比值均显著高于未进行生物素化抗体预定位的荷瘤小鼠 (P <0 .0 1)。应用手持型γ探测仪 (GDP)对荷瘤小鼠进行体内探测 ,判别小鼠肺部肿瘤转移的灵敏度为 96% ,特异性为 98% ,准确率为 97%。结论 采用抗肺腺癌单克隆抗体LC 1生物素化预定位技术能明显提高小鼠肿瘤的放射性浓集 。

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先,将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应,观察荧光信号的放大情况;然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式,对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化,包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后,采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明,BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附,并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限;另外,与传统的与生物素-亲和素检测技术相比,采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度,有望用于蛋白质芯片的检测。

滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

SPR生物传感器在食品安全领域的应用研究

使用集成化手持式SpreetaTM SPR传感器快速检测大肠杆菌E.Coli 0157∶H7,利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,采用亲和素—生物素系统放大检测的响应信号,并引入复合抗体作为第二抗体,整个检测过程在1 h内完成,实现病原微生物的快速检测。

亲和素-生物素系统的^(153)Sm标记及其生物学分布动力学的研究

选用１５３Ｓｍ对生物素进行放射性标记，然后利用亲和素和链霉亲和素与生物素的高亲合力特性，再对亲和素和链霉亲和素进行１５３Ｓｍ的标记，观察在大鼠和小鼠体内的血清除率和生物学分布，并与１５３ＳｍＣ１３和１５３Ｓｍ－ＤＴＰＡ的生物学分布进行比较．结果表明，１５３Ｓｍ标记的亲和素血清除迅速，肝肾放射性摄取高；１５３Ｓｍ标记的链霉亲和素血清除缓慢，肝、脾、肾等脏器和血液中滞留量高；而１５３Ｓｍ－生物素的代谢较快，其血清除主要经肾脏排泄。亲和素和链霉亲和素体内生物分布的差别为预定位放免显像和治疗研究中亲和素－生物素系统的不同组分的选择提供实验基础。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。