过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧诱导的脑微血管内皮细胞活性及VEGF表达的影响

目的探讨过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用,并分析其可能的机制。方法将小鼠源性脑微血管内皮细胞,根据不同干预方式分为正常对照组(细胞正常培养)、细胞损伤组(细胞正常培养24 h,随后OGD3h/R3h损伤细胞)、BIRC5干预组(细胞预先转染腺病毒-BIRC5质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)和阴性对照组(细胞预先转染腺病毒空质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)。采用激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态学变化;用MTT法和流式细胞仪分别检测各组细胞存活率和凋亡率;用RT-PCR和免疫印迹法分别检测各组细胞BIRC5和VEGF mRNA及蛋白表达。结果正常对照组的细胞骨架微丝彼此连接,分布规则,丝网状有序排列;细胞损伤组和阴性对照组的细胞微丝断裂,收缩变短或移向周边,微丝网状排列紊乱,可见细胞外形皱缩,间隙加大,少部分微丝缺失出现空隙;BIRC5干预组的细胞微丝连接,形态成长梭形,排列较规则,可见细胞间隙缩小,显示过表达BIRC5基因能够减轻损伤细胞的骨架微丝紊乱。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组及阴性对照组细胞存活率降低,而细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组的细胞存活率增高,而细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组和阴性对照组的BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组细胞BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达BIRC5基因对OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,机制可能与上调VEGF表达有关,提示BIRC5调控VEGF表达促进血管新生可能是脑侧支循环建立和形成的重要机制之一。

miR-181c-5p调控BIRC5对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-181c-5p对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过TCGA数据库中前列腺癌数据分析BIRC5、miR-181c-5p与前列腺癌病理关系,采用miRNA靶基因预测数据库分析miR-181c-5p与BIRC5靶结合位点并使用双色荧光素酶活性实验验证,Western blot检测miR-181c-5p过表达细胞中BIRC5蛋白表达。以前列腺癌细胞PC3、DU145为研究背景,构建miR-181c-5p过表达细胞系(miR-181c-5p组)及其阴性对照(miR-NC组)并用qRT-PCR验证,CCK-8法检测细胞增殖情况[450 nm处光密度值(OD_(450 nm)值)],流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot检测细胞增殖、凋亡相关蛋白表达。建立miR-181c-5p/BIRC5双过表达调细胞系(miR-181c-5p+BIRC5组),用上述相同方法检测细胞生长、细胞周期分布、细胞凋亡率及相关蛋白表达。结果BIRC5在前列腺癌组织表达升高且在肿瘤高侵犯程度、淋巴结转移和复发患者呈现更高表达趋势,BIRC5高表达患者生存情况较差;miR-181c-5p在前列腺癌癌组织表达降低,miR-181c-5p水平与BIRC5水平呈负相关,miR-181c-5p靶向抑制BIRC5表达。在PC3、DU145细胞中,miR-181c-5p组细胞miR-181c-5p水平高于miR-NC组(P<0.05),OD_(450 nm)值和S期细胞百分比低于miR-NC组(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞百分比、细胞凋亡率和BAX、caspase-3、PARP蛋白表达高于miR-NC组(P<0.05),CDK2、CCNB1、BCL-2蛋白表达弱于miR-NC组(P<0.05)。miR-181c-5p+BIRC5组细胞的BIRC5蛋白表达和OD_(450 nm)值高于miR-181c-5p组(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞百分比低于miR-181c-5p组(P<0.05),S期细胞百分比高于miR-181c-5p组(P<0.05),细胞凋亡率低于miR-181c-5p组(P<0.05),CDK2、CCNB1和BCL-2蛋白表达高于miR-181c-5p组,BAX、caspase-3、PARP蛋白表达低于miR-181c-5p组。结论miR-181-5p可以靶作用BIRC5抑制人前列腺癌细胞增殖,使细胞周期在G_(0)/G_(1)期阻滞,促进细胞凋亡。

内科胸腔镜联合胸腔积液BIRC5、IP-10对结核性胸腔积液及恶性胸腔积液的鉴别价值研究

目的探讨内科胸腔镜单独及联合胸腔积液Survivin(BIRC5)、γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)对结核性胸腔积液及恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法选取河北省胸科医院2020年1月~2022年5月收治的108例胸腔积液患者作为研究对象,经临床诊断确诊52例为结核性胸腔积液组、56例为恶性胸腔积液组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测胸腔积液中BIRC5、IP-10水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析胸腔积液BIRC5、IP-10水平对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的鉴别诊断价值;内科胸腔镜、胸腔积液BIRC5、IP-10单独及三者联合与临床诊断结果的一致性采用Kappa检验。结果恶性胸腔积液组胸腔积液BIRC5显著高于结核性胸腔积液组,IP-10显著低于结核性胸腔积液组,差异有统计学意义(P<0.05)。胸腔积液BIRC5、IP-10水平鉴别诊断结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的曲线下面积(AUC)分别为0.849、0.836。内科胸腔镜、胸腔积液BIRC5、IP-10单独及三者联合与临床诊断结果一致性分别为较高、中度、较高、极高,Kappa值分别为0.778、0.594、0.610、0.888(P<0.05)。恶性胸腔积液组结节样新生物、增生增厚、大小不等结节、白斑样改变比例显著高于结核性胸腔积液组,血性胸水多发大结节、纤维素样粘连、大小一致结节、干酪样坏死改变、包裹性积液、胸膜充血水肿比例显著低于结核性胸腔积液组,差异有统计学意义(P<0.05)。内科胸腔镜联合胸腔积液BIRC5、IP-10诊断结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的灵敏度、阴性预测值显著高于三者单独诊断,准确度高于胸腔积液BIRC5、IP-10单独诊断(P<0.05)。结论内科胸腔镜联合胸腔积液BIRC5、IP-10可增加鉴别诊断结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的灵敏度,有一定的临床价值。

生物信息学和网络药理学分析槲皮素靶向BIRC5抑制胶质母细胞瘤的增殖并影响预后

目的:本文旨在通过生物信息学和网络药理学方法分析影响胶质母细胞瘤预后关键基因和潜在中药靶点。方法:从基因表达数据库(GEO)获取脑胶质母细胞瘤数据集,GEO2R在线分析得到胶质瘤和正常脑组织之间差异基因。通过Venn图取三个差异基因集交集,共筛选出共有差异基因(DEGs),并进行GO和KEGG分析富集DEGs的分子功能和信号通路。将差异基因映射入STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,并利用Cytoscape软件筛选Hub基因。GEPIA2数据库分析Hub基因转录表达及预后。TCMSP数据库获取车前子、丹参、金银花、连翘四种中药的生物信息并通过设置药物动力学标准获得活性组分,再通过perl软件从差异基因中获取对应的靶点基因,Cytoscape软件构建“中药成分-DEGs靶点”蛋白质互作网络,分析节点枢纽筛选出关联度较高的靶点基因和活性成分,与Hub基因对比获取最终的潜在关键基因和中药成分,在AutoDock和PyMol软件中进行中药成分和关键基因的分子对接验证。结果:下载得到三个数据库GSE14805、GSE29796、GSE35493,进行GEO2R分析和交集后共得到193个共有的差异表达基因,其中上调基因148个,下调基因45个,并借助Cytoscape软件获取蛋白质互作网络并筛选到15个Hub基因。GO和KEGG分析提示Hub基因主要参与细胞周期、细胞外基质的生物学过程和细胞组分中的细胞粘附连接、粘着斑及胞浆。通过网络药理学分析,建立活性成分–靶点基因相互作用网络后,筛选出潜在的治疗靶点BIRC5和靶向治疗胶质母细胞瘤的中药活性成分槲皮素。分子对接结果显示BIRC5蛋白受体和中药成分配体结合较稳定且有氢键相互作用的形成。结论:通过生物信息学和网络药理学方法分析提示槲皮素有潜在通过靶点BIRC5影响胶质母细胞瘤的增殖、侵袭和迁移,进而影响胶质母细胞瘤患者预后的作用,为胶质瘤治疗和新化疗药的研发提供了新思路。

基于生物信息学分析BIRC5基因在胃癌中的表达及临床价值

目的探讨含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(baculoviral inhibitor of apoptosis protein repeat-containing protein 5,BIRC5)基因在胃癌(Gastric cancer,GC)中的表达和临床价值。方法采用GEPIA、BioGPS、Kaplan-Meier Plotter数据库分析胃癌组织与癌旁组织之间BIRC5基因表达差异,预测BIRC5的表达水平与胃癌患者生存及预后的关系;基于Coexpedia数据库构建BIRC5在胃癌中的共表达基因网络,使用String数据库取得与BIRC5相关蛋白质网络图和基因本体(GO)功能注释,分析京都基因和基因组百科全书(KEGG)相关通路。采用肿瘤免疫评估资源(TIMER)数据库,预测BIRC5在免疫浸润细胞中的表达。结果GEPIA、BioGPS、TIMER分析表明:与癌旁组织相比,BIRC5在胃癌组织中的表达较高(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,BIRC5基因表达较低的胃癌患者总生存期(HR=1.28,P<0.05)及进展后生存期(HR=1.28,P<0.05)均延长。BIRC5的共表达基因主要有UBE2C、TPX2、BUB1B、PRC1、CCNB2、KIF2C、SPAG5、CKS1B、CCNB1、CDK1、CENPA、NUSAP1、ANLN、NEK2、PARP1、MAD2L1、CDC20、TCP1。通过String数据库收集BIRC5相关蛋白,参与7种信号传导通路,主要富集于86种生物学过程、5种分子功能和34种细胞学组分。TIMER数据库分析表明,在免疫微环境中,BIRC5mRNA水平较低的巨噬细胞和树突状细胞的胃癌患者生存较好。结论BIRC5基因在胃癌组织中高表达,BIRC5可能降低肿瘤免疫抑制,可作为评价胃癌患者预后的标志物。

BIRC5 mRNA及蛋白表达水平在肺腺癌组织中的临床病理意义研究

目的 探讨BIRC5在LUAD组织中的表达及其临床病理意义。方法 收集GEO、TCGA,以及GTEx等高通量数据集中的BIRC5 mRNA在LUAD和非癌肺组织中的表达数据,计算SMD及sROC的AUC;使用Kaplan-Meier曲线研究BIRC5表达和LUAD患者预后的关联;使用LUAD组织芯片进行免疫组织化学检测BIRC5蛋白表达水平。在高通量数据集中,对BIRC5相关的上调基因进行GO功能注释,GSEA,以及KEGG信号通路分析。使用CIBERCORT算法探究BIRC5表达与LUAD的免疫微环境的关系。结果 全球范围内,共纳入114个高通量数据集,分别来自22个国家或地区,包含3897例LUAD和2993非癌肺组织,最后合并为37个平台。与非癌肺组织相比,BIRC5 mRNA在LUAD组织中表达水平显著升高(SMD=1.36,AUC=0.90);高表达BIRC5的LUAD患者的总体生存期显著低于低表达者(hazard ratio=2.017,P<0.05);同时,组织芯片部分实验发现226例LUAD中BIRC5蛋白水平显著表达上调(P<0.05)。LUAD中BIRC5相关基因可能参与构成染色体等细胞成分,涉及DNA复制、细胞核分裂及染色体分离等生物学过程,并发挥ATP酶活性以及DNA解旋酶活性等分子功能。此外,BIRC5高表达组具有更高的免疫细胞浸润水平(P<0.05)。结论 高表达的BIRC5可能通过多个通路和免疫因素发挥促进LUAD的发生和进展。

葛花解酲方作用于CCL2、BIRC5调控自噬治疗肝细胞癌的研究

为探讨葛花解酲方(GHJCF)通过调控自噬干预肝细胞癌进展的作用机制,根据GEO数据库中GSE45267和GSE87630肝癌数据集,将自噬相关的222个基因与GHJCF靶点和数据集的差异表达基因用韦恩图取交集得出关键基因,进行靶点预测并建立蛋白质-蛋白质相互作用网络图;随后利用生物信息学的方法进行临床因素相关分析和生存预后分析。最后使用分子对接进而筛选出GHJCF通过调控自噬干预肝细胞癌进展的作用机制,获得4个GHJCF介导自噬干预肝细胞癌的靶点。与对照组(癌旁组织)相比,肝癌组中CCL2、NFE2L2、FAS和BIRC5表达均具有显著差异;THPA数据库病理切片验证NFE2L2、CCL2、BIRC5等蛋白在正常组中低表达,在癌症组织中高表达;CCL2和BIRC5与性别、癌症分期、淋巴结转移具有显著相关性;5年生存预后分析显示两者都有预后价值;最后分子对接显示BIRC5蛋白能与GHJCF中的染料木素、槲皮素、葛根素和木犀草素成分结合且对接分数较高,CCL2能与槲皮素成分结合且对接分数较高。通过以上生物信息学分析,结合临床数据相关性,GHJCF可能通过染料木素、槲皮素、葛根素和木犀草素作用于BIRC5、CCL2,调节HCC的自噬,进而对HCC有抑制作用。

BIRC5对山羊睾丸细胞周期、凋亡的影响

旨在在克隆山羊BIRC 5基因的基础上,通过过表达或者敲低BIRC 5基因表达揭示BIRC 5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用,为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础。本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板,利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC 5基因CDS区序列,并进行生物信息学分析。将克隆回收产物连接真核表达载体,从而构建pcDNA3.1(+)-BIRC 5。根据山羊BIRC 5基因序列设计并筛选有效siRNA。将pcDNA3.1(+)-BIRC 5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后,利用Western blot检测BIRC5蛋白表达,利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase 3、Caspase 7、Bcl-2、p 53、BCL 2L11和PARP 1的表达。结果,成功扩增山羊BIRC 5基因序列,长度为506 bp,包含5′UTR 28 bp,CDS区429 bp,3′UTR 49 bp,编码142个氨基酸残基,且与牛亲缘关系最近。过表达BIRC 5基因后抑制了细胞凋亡,且细胞被阻滞于G2/M+S期;同时可下调Caspase 7、p 53、BCL 2L11、Bcl-2和Bax基因mRNA的表达,但Caspase 3和PARP 1 mRNA表达无显著变化。而敲低BIRC 5基因表达后可显著促进细胞凋亡的发生,且细胞被阻滞于细胞被阻滞于G0/G1期,而Caspase 3、Caspase 7和PARP 1 mRNA表达显著上升,p 53和Bcl-2的表达显著下降,Bax和BCL 2L11表达无显著变化。BIRC 5基因可抑制山羊睾丸细胞的凋亡,并促进山羊睾丸细胞被阻滞于G2/M+S期。研究结果为进一步深入全面研究BIRC 5基因的功能提供重要的试验数据。

鸡miR-133a靶向调控BIRC5基因的表达

【目的】研究miR-133a在鸡不同组织中的表达情况,对baculoviral IAP repeat containing 5(BIRC5)进行靶基因的试验验证,探讨鸡miR-133a对BIRC5的靶向调控作用。【方法】采用生物信息学方法对miR-133a靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告系统及点突变试验对BIRC5进行靶基因验证,同时运用实时荧光定量PCR检测miR-133a在鸡不同组织中的表达量。【结果】在鸡3′UTR数据库的11 891个基因中预测到287个miR-133a的靶基因;miR-133a在鸡的组织表达谱中显示其在肌肉中的表达量较高,尤其是在骨骼肌中表达量最高;报告基因试验显示BIRC5是miR-133a的靶基因,点突变试验证实了miR-133a在BIRC5上结合的靶位点。【结论】miR-133a是与鸡骨骼肌发育高度相关的miRNA,且鸡BIRC5基因是miR-133a的靶基因。

B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达及其临床意义

目的探讨E2F1、BIRC5、PLK1蛋白在B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义。方法收集80例B细胞淋巴瘤及30例反应性增生淋巴组织,用免疫组化SP法检测两组中E2F1、BIRC5、PLK1的表达差异。结果 B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达均明显高于反应性增生组(P<0.05),与临床分期密切相关(P<0.01),与年龄、发生部位无关(P>0.05)。E2F1、PLK1蛋白表达与组织学亚型及恶性程度相关(P<0.05),BIRC5表达与此二者无关(P>0.05)。E2F1在男性患者中的表达高于女性患者(P<0.01),BIRC5、PLK1蛋白在不同性别组中的表达差异无显著性(P>0.05)。经Spearman等级相关分析发现E2F1、BIRC5、PLK1蛋白在B细胞淋巴瘤中的表达均呈正相关(P<0.01)。结论联合检测E2F1、BIRC5、PLK1对B细胞淋巴瘤的诊断、治疗及预后判断具有一定的现实意义。

BIRC5在非小细胞肺癌中的表达及与Tp53的关系

目的:探讨凋亡信号分子BIRC5在肺癌与癌旁组织中的表达差异,并分析BIRC5与Tp53和临床病理资料之间的关系。方法:制备非小细胞肺癌患者的癌与癌旁组织石蜡标本的组织芯片。采用免疫组织化学方法检测分析BIRC5、Tp53凋亡分子在组织中的蛋白表达水平。结果:BIRC5表达水平在癌组织中(n=139)较癌旁组织(n=25)显著升高(P<0.01);BIRC5在男性患者表达水平高于女性患者,吸烟患者中表达高于非吸烟患者,鳞癌中表达高于非鳞癌(P<0.001)。BIRC5与Tp53表达水平之间存在负相关关系(r=-0.311,P=0.011)。且非参数Mann-Whiteney U检验分析显示BIRC5在Tp53高表达患者中表达高于Tp53低表达患者(P<0.05)。在I-IV期或III-IV期肺癌患者中,BIRC5高表达与低表达患者的OS均无统计学差异。结论:肺癌组织较癌旁组织BIRC5表达上调且与Tp53呈负相关关系。

BIRC5 shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:应用RNA干扰技术,以人BIRC5基因为靶基因,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,构建慢病毒干扰载体并鉴定。方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeI和EcoR I双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性克隆,采用PCR扩增和DNA测序鉴定阳性克隆。结果:PCR扩增产物经凝胶电泳阳性克隆得到335 bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含设计合成序列。结论:4对BIRC5 shRNA重组慢病毒表达载体构建成功,为研究靶向BIRC5 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础。

微小RNA-195通过靶向BIRC5调控肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:探讨微小RNA-195(miR-195)对肝癌Hep3B细胞凋亡的影响,并探索其下游靶基因。方法:采用MTT实验、流式细胞仪检测miR-195对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。构建双荧光素酶报告基因质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证靶标分子。采用RNA干扰技术检测沉默BIRC5对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。结果:与miR-ctrl组相比,miR-195过表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-195可靶向作用BIRC5,沉默BIRC5可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。结论:miR-195可通过靶向调控BIRC5抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。BIRC5可能是肝癌靶向治疗的重要靶标。

基于生物信息学分析法探讨BIRC5(Survivin)在肾透明细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨BIRC5在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达水平及其与临床预后之间的关系。方法首先使用Oncomine以及癌症基因组图谱数据库预测BIRC5 mRNA在肾透明细胞癌中的表达情况,并探索其表达量与生存的关系。采用生存分析和比例风险回归模型评估BIRC5表达与肾透明细胞癌患者预后的相关性,并通过基因集变异分析以及基因集富集分析探讨BIRC5所富集的相关通路。此外,探究了BIRC5在肾透明细胞癌中共表达基因的情况。结果肾透明细胞癌组织中BIRC5 mRNA的表达水平明显高于正常组织(P<0.001)。生存分析显示,BIRC5高表达患者的生存时间显著减少(P<0.001)。此外,还发现BIRC5差异表达水平与病理分级、临床TNM分期以及性别相关(P均<0.01)。单因素、多因素比例风险回归模型表明BIRC5表达是肾透明细胞癌患者生存时间的独立预后因素(P均<0.05)。结论BIRC5在肾透明细胞癌中高表达,是影响预后的重要因素。BIRC5可能是肾透明细胞癌潜在的预后生物学标志物及治疗靶标。

靶向BIRC5,Bcl-2siRNA慢病毒表达载体最佳干扰序列的筛选

目的 针对设计合成构建的BIRC5和Bcl-2小分子干扰RNA（siRNA）的慢病毒质粒表达载体进行有效靶序列筛选,探讨其对靶基因的封闭和抑制作用.方法 将BIRC5和Bcl-2 siRNA慢病毒质粒表达载体通过脂质体介导,分别转染体外培养的Tca-8113细胞.采用半定量RT-PCR检测转染细胞BIRC5和Bcl-2 mRNA表达及Western blot检测蛋白表达水平.结果 BIRC5和Bcl-2 mRNA抑制率分别为35%～76%和30%～72%,所设计的siRNA序列不同程度降低和下调其mRNA及相应的蛋白表达,实验组与对照组比较差异有统计学显著性意义（P〈0.05）,阴性对照组无此作用（P〉0.05）.结论 设计合成的siRNA干扰序列能抑制其靶基因mRNA和蛋白的表达,不同的干扰靶点其抑制效果不同,本实验成功筛选出两对最佳干扰序列作为对肿瘤细胞基因治疗的实验研究.

共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒载体构建及鉴定

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+Hspa5,酶切鉴定;将pgsiRNA-Birc5+Hspa5转染HepG2细胞48h后采用Real-time PCR检测Birc5和Hspa5的mRNA表达水平。结果经酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+Hspa5符合酶切鉴定结果;转染pgsiRNA-Birc5+Hspa5 48h后HepG2细胞Birc5和Hspa5mRNA表达均显著下降,未转染组Birc5和Hspa5mRNA的相对表达量均为1.0,pgsiRNA-Birc5+Hspa5组Birc5为0.15(P<0.05),Hspa5为0.37(P<0.05),表明双干扰载体构建成功。结论成功构建了Birc5和Hspa5双干扰siRNA质粒,为进一步同时靶向沉默肿瘤Birc5和Hspa5基因研究提供了工具和基础。

腺病毒介导的BIRC5-shRNA增强索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的研究BIRC5靶向基因治疗联合索拉非尼分子靶向治疗肝癌的协同效应以及对肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法构建BIRC5特异性小发卡RNA的腺病毒AdEGFP-shBIRC5,用免疫细胞化学染色法检测其对BIRC5的沉默作用。建立肝癌移植瘤模型验证AdEGFP-shBIRC5联合索拉非尼治疗的疗效,采用免疫组化染色法鉴定AdEGFP-shBIRC5对癌细胞BIRC5基因表达的抑制作用;TUNEL法标记AdEGFP-shBIRC5联合索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡。结果腺病毒介导的BIRC5-shRNA表达能有效沉默肝癌细胞BIRC5表达,AdEGFP-shCtrl对照组的BIRC5阳性表达率为(78.8±12.6)%,AdEG-FP-shBIRC5实验组为(20.6±8.2)%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。Hep3B裸鼠移植瘤治疗后5周,与空白对照组相比,AdEGFP-shBIRC5联合索拉非尼组、单用AdEGFP-shBIRC5组、单用索拉非尼组的抑瘤率分别为61.78%(P=0.0032)、42.36%(P=0.0059)和29.20%(P=0.0169);与此对应,AdEGFP-shBIRC5联合索拉非尼组与单用索拉非尼组相比,肝癌细胞BIRC5表达被抑制(P=0.0364),细胞凋亡比例明显升高(P=0.0296)。结论针对BIRC5的基因治疗能提高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性,显著诱导癌细胞凋亡。

基于TCGA数据库分析BIRC5在肾透明细胞癌中的表达及预后

目的通过分析杆状病毒凋亡抑制蛋白5(BIRC5)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达,阐明BIRC5对其早期诊断及作为预后预测因子的作用。方法利用GEO、TCGA数据库和HPA分析BIRC5在ccRCC组织中mRNA和蛋白质水平的变化。运用UALCAN和LinkedOmics数据库阐述BIRC5表达与ccRCC临床病理学参数的相关性及对预后的影响。采用GEPIA、Kaplan-Meier Plotter、SurvExpress分析BIRC5表达与ccRCC预后的关系。结果BIRC5 mRNA在ccRCC中高表达,并且与ccRCC患者TNM分期相关(P<0.05),与ccRCC进展高度相关,高表达BIRC5mRNA是ccRCC患者不良预后指标。免疫组织化学结果证实,与正常肾组织相比,ccRCC中BIRC5蛋白表达量显著升高。结论在ccRCC中,BIRC5高表达是一种重要的早期诊断及不良预后指标,有望成为ccRCC早期诊断和预后预测标志物。

恶性淋巴瘤中E2F1与BIRC5蛋白表达的相关性研究

目的探讨E2F1、BIRC5在恶性淋巴瘤中的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测90例恶性淋巴瘤及15例淋巴组织反应性增生中E2F1、BIRC5蛋白的表达。结果恶性淋巴瘤中E2F1、BIRC5蛋白表达阳性率显著高于反应性增生组中的表达(P<0.05)。E2F1、BIRC5蛋白在侵袭性及高侵袭性淋巴瘤中的表达显著高于惰性淋巴瘤中的表达(P<0.01),而两者在侵袭性与高侵袭性淋巴瘤中的表达差异无显著性(P>0.05)。E2F1、BIRC5蛋白在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表达显著高于Ⅰ期和Ⅱ期中的表达(P<0.01)。此外,经统计学分析,E2F1、BIRC5蛋白在不同性别、年龄、发生部位、组织学类型组中的表达差异均无显著性(P>0.05)。经Spearman等级相关分析,E2F1与BIRC5蛋白在恶性淋巴瘤中的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论 E2F1和BIRC5的高表达可能是恶性淋巴瘤发生发展的重要生物学标志。

TLR10和BIRC5基因多态性对甲状腺乳头状癌发病风险的影响

目的:探究TLR10和BIRC5基因的易感性与甲状腺乳头状癌(PTC)的关系。方法:通过使用Agena Mass ARRAY平台对4个单核苷酸多态性(SNP)(rs11466653、rs11096956、rs11096955、rs9904341)进行检测评估,并采用卡方检验、遗传模型分析以及单体型分析等统计分析方法。结果:rs11096956位点(TLR10)的等位基因"C"与rs9904341位点(BIRC5)的等位基因"G"均与增加PTC的发病风险相关(rs11096956:OR=1.26,95%CI=1.09~1.97,P=0.031;rs9904341:OR=1.26,95%CI=1.17~2.04,P=0.019)。在遗传模型下,通过逻辑回归分析发现在共显性模型、显性模型以及加性模型中rs11096956 SNPs位点的多态性与增加PTC的发病风险相关。在共显性模型和显性模型下,rs9904341位点的多态性与PTC风险增加有关。此外,TLR10基因的SNPs位点构成的单倍体型"Trs11466653Trs11096956Crs11096955"与增加PTC的发病风险有关。分层分析显示,rs11096956(TLR10)和rs9904341(BIRC5)位点多态性可显著增加女性PTC的发病风险(P<0.05)。结论:发现表明rs11096956(TLR10)和rs9904341(BIRC5)的变异与PTC风险的增加有关,尤其是在女性人群中。