杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用

双特异性单克隆抗体(bispecific monoclonal antibody,BsMAb)是指具有两个不同特异性抗原结合位点的单克隆抗体分子。杂交-杂交瘤技术因其简便易行、制备周期短,在制备Bs MAb方面有较大优势。基于杂交-杂交瘤技术能制备出可以特异性识别两种或者两类小分子药物的Bs MAb,在食品安全多残留免疫分析检测中具有较好的应用价值。本文综述了杂交-杂交瘤技术制备Bs MAb的进展,探讨了基于该技术的Bs MAb生成机制,讨论分析了杂交-杂交瘤及Bs MAb筛选制备的关键技术要点,并归纳了Bs MAb在检测食品中小分子污染物方面的应用进展,旨在为食品安全多残留免疫分析技术的发展应用提供参考。

微型双功能抗体抗CD3/抗CD20的构建和表达

目的 :构建和表达抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法 :采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果 :DNA序列测定结果表明 :抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 1mg/ml以上 ,纯化产物中二聚体的比例达 90 % ,具有与Jurkat(CD3+ )和Daudi细胞 (CD2 0 + )结合的活性 ,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论 :利用Diabody形式 ,首次成功地构建了抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并获得较高表达 ,表达产物具有与相应

单克隆抗体药物研发进展

目的:对单克隆抗体药物研发进展进行综述,为行业提供参考。方法:通过查阅文献和相关数据库,对经典的单克隆抗体药物,以及由此衍生的抗体偶联药物、双特异性抗体药物的研究进行汇总、梳理。结果与结论:自1986年第一个单克隆抗体药物上市以来,全球已有超过100种单抗药物获批上市。国内已获批的进口单抗药物达42个,国产单抗药物达31个。经过30多年的研究和发展,单抗药物以其高度特异性和疗效确切的特点,在肿瘤、自身免疫、代谢、病毒感染等疾病领域显示出独特的优势和广阔的应用前景。

以EGFR家族受体酪氨酸激酶为靶点的抗肿瘤治疗研究进展

表皮生长因子受体 (EGFR)家族的受体酪氨酸激酶与多种恶性肿瘤的发生、发展及预后等密切相关。近年来 ,许多以此为靶点的新的抗肿瘤药物和治疗方法陆续被开发 ,主要有单克隆抗体、双特异性抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂和基因治疗等。它们有的已进入临床试验 ,耐受性良好 。

导向性纤溶酶原激活剂的研究

溶栓疗法是血栓治疗中的一种重要措施．研制具有高选择性的导向性纤溶酶原激活剂有着重大的理论意义和实用价值．采用血栓特异的单克隆抗体及其片段来介导溶栓剂已展示出较好的应用前景．双功能抗体以及同时具有抗栓，抗凝活性的小肽正逐渐拓宽人们有关导向分子研制的视野．

双功能抗体抗CD3/抗CyclinD1的制备及对子宫内膜癌细胞的杀伤作用

目的 :制备抗CD3/抗CyclinD1双功能抗体 ,探讨子宫内膜癌主动免疫治疗的可行性 .方法 :以化学交联方法将抗CD3单克隆抗体与抗CyclinD1单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对子宫内膜癌细胞的杀伤作用 .结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率为 6 1.2 3% ,高于单抗CD3(4 2 .15 % )的介导作用 (P <0 .0 1) ,并随着效靶比的提高杀伤率也升高 (78.96 % ) .结论 :采用化学交联法制备的抗CD3/抗CyclinD1双功能抗体具有主动免疫治疗宫颈癌的临床可行性 .

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的制备人 Ig G检测用双特异性单克隆抗体诊断试剂。方法用人 Ig G免疫 BAL B/c小鼠脾细胞与抗HRPMc Ab杂交瘤细胞 HAT敏感株进行第 2次融合。结果获得 5株能稳定分泌抗人 Ig-抗 HRP的双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤细胞 ,分泌的抗体亚类其中 1株为 Ig G2 a/Ig G1,余为 Ig G1 /Ig G1 。培养上清与腹水效价分别为 2 - 7,10 - 5以上 ,经 HRP亲和层析有 2个蛋白吸收峰 ,Bs Mc Ab存在于第 2峰。用 EL ISA法及免疫印迹试验证明 :Bs Mc Ab只与人 Ig G有特异性反应。杂交 -杂交瘤细胞连续 3月培养和反复冻存 ,复苏后仍能稳定保持分泌 Bs Mc Ab的能力。结论该方法制备简单 ,灵敏高度 。

制备双特异性单克隆抗体的方法

双特异性抗体由于其独特的结构-2个不同抗原,引起研究机构的广泛重视。研究者将治疗药物和针对疾病部位的特异目标分别放在双特异性单克隆抗体的2个臂上。治疗药物可以是药品、毒素、酶、DNA和放射性核素等。双特异性单克隆抗体能使免疫效应细胞的细胞毒性作用于致病细胞或者诱导产生全身免疫应答。作者重点介绍了制备双特异性单克隆抗体的3种方法,分别是化学方法、生物方法和基因工程,为制备临床需要的抗体奠定坚实的理论基础。

抗肾综合征出血热病毒和抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体的建立

成功地获得了既抗肾综合症出血热病毒,又抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体(简称抗HFRSV-抗HRP BsMcAb)。方法是,先将分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤A25-1细胞用杂氮鸟嘌呤进行诱变试验,建立了分泌抗HFRSV McAb的HGPRT细胞株(即HAT敏感型细胞株)251AGD6。用此细胞与HRP免疫的Balb/c小鼠脾细胞再次融合,得到分泌抗HFRSV-抗HRP的BsMcAb杂交杂交瘤(Hybrid Hybridoma)261-HRPB10细胞株。用双抗原免疫斑点试验和双抗原ELISA试验测定251-HRPB10腹水BsMcAb,滴度均为1000;用IFA测定单向抗HFRSV抗体滴度为10000;用免疫斑点法和ELISA测定单向抗HRP抗体滴度,均为100000。杂交杂交瘤的染色体数目在150条左右,证实是三细胞两次杂交瘤。

抗尿激酶及人纤维蛋白双特异单克隆抗体体内导向溶栓作用的实验研究

用杂交杂交瘤技术制备抗尿激酶及人纤维蛋白双特异单克隆抗体—10H8;建立了稳定的家兔颈静脉溶栓模型;研究了10H8体内导向溶栓特征。研究结果显示,与单独尿激酶比较导向溶栓药(尿激酶/10H8)的体内溶栓效能及溶栓特异性均有显著提高。导向溶栓药的出现为实现临床溶栓的高效特异化带来希望。

乙肝表面抗体和抗人红细胞单克隆抗体的F(ab′)_2偶联与鉴定

制备人红细胞非凝集型单克隆抗体,形成双功能抗体试剂,用于临床诊断。用人O型红细胞膜蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,制备非凝集型单克隆抗体,通过化学偶联法将非凝集性单克隆抗体和乙肝表面抗体的F(ab′)2片段偶联,制备出双功能抗体,用直接凝集法检测乙肝表面抗原。获得5株分泌非凝集型杂交瘤细胞,利用戊二醛一步法制备出双功能抗体,形成全血凝集检测试剂,并进行了初步鉴定。

人类阴道菌丛和细菌性阴道感染──乳杆菌疗法的理论与实践

人类阴道菌丛和细菌性阴道感染──乳杆菌疗法的理论与实践陈廷祚综述（卫生部成都生物制品研究所，成都６１００６３）长久以来，乳杆菌属中某些种别的细菌一直被用于制造酸奶、发酵食品、酸菜和治疗及保健用口服活菌制剂。这些产品对人们的生活和健康十分重要，其主要功...

抗TNF和抗CALLA三体瘤的研制及其分泌抗体的初步纯化

抗CALLA一次杂交瘤79经8-杂氮鸟嘌呤诱导,成为HAT敏感型细胞系79A,79D;与TNF免疫的脾细胞融合,经筛选鉴定得到了几株分泌抗CALLA和抗TNF双特异性单克隆抗体的三体瘤。然后用羟基磷灰石柱对其中一株E6所分泌的抗体进行了初步纯化,与高压液相法相比,在普通常压色谱条件下取得了较为满意的效果。

双特异抗体介导的CD_3AK对人小细胞肺癌细胞株的细胞毒作用

目的 :研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞 (CD3单克隆性激活的杀伤细胞 )对人小细胞肺癌细胞株LTEP sm1的细胞毒作用。方法 :用51Cr Na2 CrO4 释放试验检测单抗 (2D6、UCHT1)和双特异性抗体 (WST H7)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。结果 :双特异性抗体体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺细胞株LTEP sm1的杀伤活性。结论 :与单纯CD3AK相比 。

尿激酶-抗尿激酶抗纤维蛋白双特异单克隆抗体复合物在小鼠体内的药物动力学

目的 :研究尿激酶 -抗尿激酶抗纤维蛋白双特异单克隆抗体复合物 (U K- BI9E1 1 )在小鼠体内的药物动力学特征。方法 :小鼠 iv U K- BI9E1 1 后 ,用平板法测定不同时间小鼠血清中尿激酶的活性 ,并计算其药物动力学参数。结果 :本方法重现性好 ,灵敏度高 ;UK- BI9E1 1 在血中的经时变化过程符合二室模型。与注射尿激酶所得的药物动力学参数相比 ,注射 UK- BI9E1 1后的 T1 /2α、T1 /2β均延长。结论 :BI9E1 1 与 UK形成复合物后 ,可延长尿激酶在血中的 T1 /2α、T1

抗乙型肝炎病毒e抗原和核心抗原双特异性单克隆抗体的建立与应用

用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(内含高滴度的e抗原)免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,获得两株分泌高滴度既抗-HBe又抗-HBc的双特异性杂交瘤细胞系。细胞培养上清液中抗体滴度为100～1000以上;免疫腹水中的抗体滴度为8万至10万以上,均属IgG2a亚类。细胞在实验室连续传代二年多,仍保持高效分泌抗体能力。此单克隆抗体与HBeAg或HBcAg的结合可被抗-HBc或抗-HBc阳性血清所抑制,竞争抑制率在85.9％～96.8％之间。用此单克隆抗体与HBe的β型单克隆抗体和抗HBc的α型单克隆抗体配对,可组装成检测HBeAg/抗-HBe和抗-HBc的诊断试剂,具有重要的应用价值。

抗人EGFR/抗CD3双功能抗体的制备、检测及对胃癌细胞毒性作用的实验研究

目的探讨抗EGFR/抗CD3双功能抗体体外对胃癌细胞的杀伤能力,为临床应用该抗体治疗胃癌打下实验基础。方法采取化学偶联法合成抗EGFR/抗CD3双功能抗体并使用间接细胞免疫荧光法检测该抗体的功能。通过细胞结合率检测及MTT杀伤实验检测其对胃癌细胞结合及杀伤的能力并与单纯的EGFR单抗和CD3单抗比较。结果抗EGFR/抗CD3双功能抗体联合效应细胞与胃癌细胞株SGC7901结合率显著高于两组单抗对照组(P<0.05);MTT细胞杀伤实验结果提示:抗EGFR/抗CD3双功能抗体组对胃癌细胞株SGC7901杀伤率显著高两组单抗对照组(P<0.05)。结论初步的体外实验显示由化学偶联法合成的抗EG-FR/抗CD3双功能抗体可能对胃癌有一定的治疗作用,具有进一步研究的价值。

双特异性单克隆抗体在治疗中的应用

双特异性抗体由于其独特的结构——两个不同抗原,引起研究机构广泛的重视。双特异性单克隆抗体有两个臂,研究者将治疗药物和针对疾病部位的特异目标分别放在两个臂上。治疗药物可以是药品、毒素、酶、DNA和放射性核素等。此外,双特异性单克隆抗体能使免疫效应细胞的细胞毒性作用于致病细胞或者诱导产生全身免疫应答。双特异性单克隆抗体从治疗来看,有很大的发展前景,这是由于:(1)最近重组DNA技术的重大突破;(2)人类基因组图谱工程的完成,提高了疾病的鉴别水平;(3)对人类免疫系统机制有了更好的了解。

双特异抗体介导的人单核—巨噬细胞对荷人肝癌裸鼠的抑制作用

目的：观察双特异性单克隆抗体介导的人单核—巨噬细胞在裸鼠体内对肝癌生长的抑制作用。方法：用化学交联法制备双特异性单克隆抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）＿２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ’）＿２，并将其与单核—巨噬细胞一同注入荷人肝癌裸体内，观察肿瘤体积的变化，结果：ＨＡｂ１８—ＭＡｂ７及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）＿２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ’）＿２治疗组裸鼠移植瘤体积的增长速度较对照组明显减慢（Ｐ＜０．０１），尤以后者为甚（Ｐ＜０．０１）．结论：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）＿２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ’）＿２都有明确的介导人单核—巨噬细胞抑制荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用，而且后者的作用较前者强。

抗纤维蛋白和抗尿激酶双特异单克隆抗体的研制

利用分泌抗纤维蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经在８－氨鸟杂嘌呤内诱导突变，使其成为对ＨＡＴ敏感细胞株．以此突变株与用尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，经筛选获得一株分泌双特异单克隆抗体的杂交瘤细胞９Ｅｌｌ，在体外有明显的溶栓效果。经二年来检测证明，该细胞株是稳定的。