一种来源于Bispora betulina的酸性木聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究

利用简并PCR和TAIL-PCR技术从嗜酸性真菌Bispora betulina中克隆得到一个酸性木聚糖酶基因xyn11BB。该基因全长1 207 bp,含有三段内含子、一段外显子和一个终止密码子,编码由297个氨基酸组成的蛋白质,推测蛋白质含有一个CBM1结构域。将不带原基因信号肽编码序列的cDNA基因以正确阅读框架克隆到表达载体pPIC9上,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中诱导表达,其表达活性达121.15 U/mL。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为4.5,在酸性条件下具有良好的活性和稳定性,可作为饲料用酶的备选。

Bispora sp. MEY-1来源嗜酸果胶甲酯酶性质分析及其应用研究

食品加工副产物富含果胶类物质,果胶酶可以将其降解为果胶低聚糖,不仅可以有效控制果胶低聚糖的聚合度及结构,还能实现食品加工副产物废弃资源的再利用,创造新的经济效益。从嗜酸真菌Bispora sp. MEY-1克隆获得一个碳水化合物第8家族的果胶甲酯酶基因Pem8A,将其连接到表达载体pPIC9上,在毕赤酵母GS115中实现高效异源表达。对纯化后的重组蛋白PME8A的酶学性质进行测定,发现其最适温度为60℃,在55~80℃可保持80%以上的酶活;最适pH为3.5,在pH 2.5~5.0范围内维持50%以上的酶活,是真菌来源中少数的嗜酸果胶甲酯酶。用PME8A处理苹果渣、橘皮果胶粗提物后,去甲基化效果明显,使得Achaetomium sp. Xz8来源的内切多聚半乳糖醛酸酶PG8fn酶活分别提高了8.5倍和1倍,表现出很好的协同效应。研究证明果胶甲酯酶PME8A可以应用于从食品加工副产物生产果胶寡糖,为果胶低聚糖的获取提供了新的方法。

嗜酸真菌Bispora sp.MEY-1酸性糖苷水解酶的产酶优化及在动物饲料中的应用

嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1可以分泌多种酸性糖苷水解酶。以不同的农业废弃物和副产品为碳源诱导该菌产酶以提高液体发酵效率并降低生产成本,结果表明0.5%的魔芋粉和9%的麦麸/玉米芯粉/豆粕混合物诱导效果最佳,木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶的产量分别为15、50、3.7、5.7、3.2、0.6、3.4、0.1、1.8U·ml-1。菌株MEY-1最适产酶pH为3,温度为30℃。与优良的商业糖苷水解酶生产菌株Trichoderma reesei RUT C30相比,菌株MEY-1分泌的糖苷水解酶偏酸,且在模拟胃肠道条件下保留了更多的木聚糖酶和葡聚糖酶活性,可降低大麦/豆粕饲料的黏度,在动物饲料工业中具有良好的应用前景。

Bispora sp. MEY-1来源的嗜酸海藻糖酶TreA酶学性质研究

酸性海藻糖酶作为生物催化剂在生物工业中广泛应用,挖掘酶学性质优良的酸性海藻糖基因具有重要意义。从Bispora sp.MEY-1中成功克隆出一个酸性海藻糖酶基因TreA,并在毕赤酵母GS115中实现高效表达。对纯化后的酸性海藻糖酶TreA进行酶学性质鉴定,其最适pH为4.0,在pH 2.2~5.0范围内,该酶能够维持60%以上的酶活力。TreA在偏酸条件下稳定效果比较好,在pH 1.0~4.0条件下处理1 h,可以剩余88%以上的酶活力。TreA的最适温度为60℃,在40~70℃之间都可以维持50%以上的酶活力,属于中高温酶。重组海藻糖酶TreA的比活为1913 U·mg^(-1),动力学参数K_m和V_(max)分别为0.67 mg·mL^(-1)和119μmol·min^(-1)·mg^(-1)。同时,还评估了不同金属离子或化学试剂对纯海藻糖酶TreA的酶活性影响及其蛋白酶抗性。极大丰富了海藻糖酶基因资源,促进了其在生物工业中的应用。

Bispora sp.MEY-1来源的新型嗜热多聚半乳糖醛酸酶的酶学性质研究及其应用评估

果胶酶作为添加剂广泛应用于食品行业的果汁澄清工艺中,发现和挖掘适用于工业应用的优质果胶酶,能够为工业应用提供更多的选择。从嗜酸的Bispora sp.MEY-1基因组中克隆得到一个多聚半乳糖醛酸酶基因Bspg28b,并在毕赤酵母GS115中实现高效异源表达。对重组蛋白纯化后进行酶学性质的测定,其最适pH 3.5,最适温度为65℃,在酸性至中性的环境中具有很好的pH稳定性,完全满足果汁澄清工艺的需求;BsPG28b在55℃下保持高度稳定,在65℃中保温10 min后仍能剩余50%的酶活,是真菌来源中少见的耐高温优质果胶酶。对BsPG28b的应用效果进行评估发现,可显著提高葡萄汁的澄清度,体现巨大的应用潜力。

吉林省担子菌补记(三)

报道了吉林省新分布担子菌 6种 ,即黄环鳞伞Descoleaflavoannulata (L Vassilieva)Horak ,刺毛暗皮伞Phaeomarasmiuserinaceellus (Peck)Sing ,二孢长根奥德蘑Oudemansiellaradicata (Relh :Fr )Sing var bispora (Redhead ,GinnsetShoemaker)Z L YangetZang ,带状盔孢菌Galerinavittaeformis (Fr )Sing ,迭生灵芝Ganodermalobatum (Schw )Akt 和环沟纹韧革菌Stereumstrigoso zonatum (Schw )Cunn 。其中 。

小兴安岭凉水自然保护区枫桦红松林土壤真菌

2001年5～9月,在黑龙江省小兴安岭凉水自然保护区枫桦红松林设立临时标准地,采用'之'字形路线及土壤剖面取样法多点取土壤样品.利用稀释平板法和植物残渣法,选用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、查氏琼脂培养基(CzA)分别进行菌株的分离、培养、纯化.将纯化出的菌株转接到PDA、CzA上,观测菌落形态、生长速度、颜色变化等因子.经过显微观察菌丝体、孢子以及子实体的形态、结构等,初步鉴定出18个不同属的土壤真菌, 其中,包括 2个中国新纪录属、新记录种:桦链二孢Bispora betulina 、黄褐拟毛孢Chaetopsina fulva.

匍匐型与气生型双孢蘑菇菌株品比试验

对匍匐型与气生型5个蘑菇菌株进行粪草发酵料室内床式栽培比较试验,经菌丝生长、子实体性状观察和产量分析,结果表明气生型Ag2号、Ag3号菌株及匍匐型1号菌株品质好、产量较高,分别达11.30 kg.m-2、10.60 kg.m-2、9.80 kg.m-2,适合于甘肃中西部地区栽培生产。而Ag4号、Ag5号菌株产量低、品质差,不适合该地区栽培。

双孢奥德蘑的形态鉴定及ITS系统发育分析

报道了双孢奥德蘑(Oudemansiella bispora)的形态和分子鉴定结果。在对其子实体形态、菌丝、孢子等进行形态学观察的同时,对其ITS区序列进行了测定和系统发育分析比较,同时与其他种类真菌的亲缘关系进行了比较,将该菌株鉴定为双孢奥德蘑,且与GenBank中基因号为AF321481的Xerulafurfuracea最相近并被聚类到一起,同源相似性达99%。

双孢线虫草真菌群落结构及多样性分析

双孢线虫草Ophiocordyceps bispora是线虫草属Ophiocordyceps古老的物种.非生物因子与微生物对其生长发育和适应环境具有重要作用.基于Illumina MiSeq高通量测序技术对5组双孢线虫草样本进行ITS2(Internal Transcribed Spacer 2)区域测序,以比较不同海拔梯度和光照强度下真菌多样性、丰富度和群落结构.测序共得到445个OTUs,经鉴定共有3门、13纲、41目、69科、66属和257种真菌物种.其中子囊菌门为优势门,线虫草属为优势属.α多样性指数与海拔梯度相关性分析发现,真菌群落多样性和丰富度与海拔梯度不存在显著相关性,光照强度、植被类型和人为活动可能是影响真菌群落丰富度和多样性的主要环境因子.真菌群落和海拔梯度相关性分析表明,其中14个属与海拔梯度呈正相关.同时,Anosim分析发现双孢线虫草真菌群落组间存在显著差异.以上研究结果表明,双孢线虫草蕴藏着丰富的真菌资源,海拔对其群落结构具有一定影响,但对其丰富度和多样性影响较小,推测光照强度、人为活动和植被类型可能是影响其真菌群落结构、丰富度以及多样性的主要环境因素.该研究为双孢线虫草微生物群落中真菌资源的挖掘与利用提供参考,同时为虫草真菌群落与环境相互作用提供研究思路.

双孢线虫草内生和生境土壤细菌的分离鉴定及其抑菌活性

采用8种培养基从来自云南哀牢山的12份双孢线虫草(Ophiocordyceps bispora)的子座、菌核及其生境土壤样品中分离细菌,并对细菌进行形态学分类,进行16 S rRNA测序鉴定,同时按所获菌株来源及种类随机挑取供试菌株采用琼脂块扩散法测试对25株病原菌的抑菌活性。结果表明:从双孢线虫草子座、菌核和生境土壤中分离获得302株细菌,对其中275株进行测序,它们属于4门14目18科18属65种,其中链霉菌属(Streptomyces)、芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、诺卡氏菌属(Nocardia)和根瘤菌属(Rhizobium)为优势属;枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、N.nova、纳塔尔链霉菌(S.natalensis)、S.angustmyceticus、高原链霉菌(S.platensis)、杀黄孢链霉菌(S.xanthocidicus)、江西诺卡氏菌(N.jiangxiensis)、高山芽孢杆菌(B.altitudinis)为优势种。就所含细菌类群而言,双孢线虫草生境土壤(16科16属57种)明显高于子座(9科9属17种)和菌核(3科3属7种)。在199株细菌中,有99株对1个以上病原菌具有抑菌活性,初筛阳性率为49.75%;其中8个优势菌株对4个及以上病原菌具有广谱且高效的抑菌活性。

锈革菌属三个中国新记录种(英文)

报道了锈革菌属Hymenochaete 3个中国新记录种。双孢锈革菌Hymenochaete bispora采自吉林省,担子大多数有两个担子梗;柔软锈革菌Hymenochaete lenta采自内蒙古自治区,子实体覆瓦状叠生且担孢子呈尿囊形;暗赭色锈革菌Hymenochaete senatoumbrina采自西藏自治区,属于裸刚毛组中孢子较大的种类。文中对这3个种进行了详细的描述和显微结构绘图。