人膀胱癌BIU87细胞株中低氧诱导CD_(105)表达

目的研究人膀胱癌BIU87细胞株中低氧与常氧状态下CD105表达,为膀胱癌的抗血管治疗提供理论依据。方法在人膀胱癌BIU87细胞株中用免疫组织化学检测常氧与低氧状态下CD105蛋白的表达。结果人膀胱癌BIU87细胞株CD105蛋白在低氧组和常氧组阳性表达率分别为(90.4±8.2)%和(61.0±7.5)%。结论人膀胱癌BIU87细胞株中低氧诱导CD105表达。

淫羊藿苷对人膀胱癌BIU87细胞GRP78基因表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对人膀胱癌BIU87细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抑制BIU87细胞增殖的作用及机制。方法:用不同浓度的ICA作用于体外培养的人膀胱癌BIU87细胞株,流式细胞仪Annexin/PI双染法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果:浓度为0.2 mg·L-1、0.4 mg·L-1的ICA可显著促进BIU87细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示浓度为0.2mg·L-1、0.4 mg·L-1的ICA作用于BIU87细胞48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ICA抑制BIU87细胞增殖,促进其凋亡,GRP78基因可能是其作用靶点之一。

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P<0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。

As_2O_3诱导人膀胱癌BIU-87细胞株凋亡及其对细胞周期的影响

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌BIU 87细胞株生长抑制作用 ,并探讨对细胞周期及凋亡的影响。方法 :CellTiter 96AqueousOne试剂检测BIU 87细胞株增殖活力 ;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化 ;流式细胞术分析细胞周期及凋亡。结果 :As2 O3 与BIU 87细胞株生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 (P <0 .0 1) ,IC50 为 2 8.92 μmol/L ;荧光显微镜下观察到经As2 O3 作用的BIU 87细胞核膜消失 ,核染色质呈大小不等的小圆形碎片 ;流式细胞术结果表明 30 μmol/L的As2 O3 处理BIU 87细胞株 4 8h后 ,G0 /G1期细胞比例下降 ,S期细胞比例增加 ,凋亡率为 4 7.37%。结论 :As2 O3 能显著抑制BIU 87细胞株增殖 ;使细胞阻滞在S期 ,并进一步诱导细胞凋亡。

脂质体/DNA复合物介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和生物活性

目的：探讨脂质体／ＨＳＶ—ＴＫ重组 ＤＮＡ对膀胱癌细胞的转导和在细胞内的活性表达。方法：用脂质体／ＤＮＡ复合物将 ＨＳＶ－ＴＫ基因逆转录病毒重组子（ｐＬＸＳＮ－ＴＫ）导入膀胱癌细胞株 ＢＩＵ８７。携带 ＨＳＶ一ＴＫ基因的 ＢＩＵ８７细胞（ＢＩＵ８７—ＴＫ）由 Ｇ４１８筛选获得。经过 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和细胞原位杂交检测后，观测 ＡＣＶ对 ＢＩＵ８７－ＴＫ细胞存活的影响。结果： Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实 ＨＳＶ—ＴＫ基因存在于 ＢＩＵ８７－ＴＫ细胞染色体中。细胞原位杂交检测 ＨＳＶ－ＴＫｍＲＮＡ的表达。外源ＤＮＡ的导入以及ＨＳＶ－ＴＫ和Ｎｅｏ基因表达不会改变细胞生长特性。然而，在ＡＣＶ作用下，转导ＨＳＶ－ＴＫ基因的膀胱癌细胞的存活率受到影响，ＡＣＶ可显著抑制癌细胞生长。结论：脂质体／ＴＫ重组 ＤＮＡ复合物可用于膀胱癌细胞的转基因治疗。

hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染BIU87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。

NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系Biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床病理特征的相关性;检测CP-H068、Biu87和RT-4细胞系中NPRL2的表达,CCK-8法检测沉默NPRL2后细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果NPRL2在膀胱癌组织中高表达,为53.44%,与膀胱癌临床分期、分级存在显著相关性(P<0.05);NPRL2在膀胱癌细胞系Biu87/RT-4中的表达显著高于正常膀胱上皮细胞CP-H068(P<0.05);沉默NPRL2后Biu87/RT-4细胞增殖能力下降,凋亡率上升,凋亡相关蛋白JNK、Bax、caspase-9表达量增高,Bcl-2表达受抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论膀胱癌中NPRL2表达与膀胱癌临床分期和分级相关,通过沉默膀胱癌细胞Biu87/RT-4中NPRL2的表达,可以有效抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡。