双价痢疾菌苗不同途径免疫小鼠对脾细胞及GALT中ASC影响的实验研究

目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以探讨免疫途径及侵袭蛋白表达与否对痢疾菌苗免疫效果的影响。方法： BALB／c小鼠随机分为 3组，每组 20只， FSM－2ll7或 FS-5416 4 x10^7CFU分别经滴鼻、灌胃及肠内注射3种途径免疫小鼠，间隔2w，第3次免疫后7d活杀分离脾、小肠pp及MIN淋巴细胞，采用BA－ELISASPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG分泌细胞。结果：滴鼻途径及小肠内免疫都能够诱生脾细胞特异性IgA-ASC、IgG-ASC显著升高（P＜0．01）；仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著（P＜0．01）。滴鼻和小肠内免疫同时诱生肠GALT中派伊尔小结（Payer's patch,PP)和肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node,MLN)淋巴细胞ASC显著升高（P＜0．05，P＜0．01），但株间比较无统计学差异。而同等剂量的灌胃免疫未能诱发脾细胞及GALT特异性ASC升高。结论：鼻粘膜和小肠内免疫可以有效地诱导脾脏和GALT淋巴细胞的免疫反应，且显著降低免疫原用量（本实验滴鼻剂量为常规灌胃的1/20），是一个安全有效的免疫途径。研?

双价痢疾菌苗株免疫小鼠后GALT中ASC的观测

为了观测两株菌苗ＦＳＭ－２１１７（Ｉｐａ－）、ＦＳ－５４１６（Ｉｐａ＋）免疫后所引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的免疫反应，以小鼠灌胃免疫为模型，应用ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法检测了ＧＡＬＴ中诱导部位派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）和抗原特异性抗体分泌细胞（ＡＳＣ），发现两菌苗株免疫小鼠后，ＰＰ结、ＭＬＮ中福氏、宋内氏抗原ＳＩｇＡ、ＩｇＧ抗体分泌细胞明显增加，尤以ＳＩｇＡ－ＡＳＣ为甚。株间差别无统计学意义。两株菌苗与对照组相比。

两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后GALT中CD4^+、CD8^+ T细胞亚群的反应

目的ＦＳＭ－２１１７和ＦＳ－５４１６是两株具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株，ＦＳＭ－２１１７无侵袭表型，无溶血活性，不表达侵袭蛋白抗原（Ｉｐａ－），ＦＳ－５４１６则为Ｉｐａ＋，本实验是为了观测两株菌苗（Ｉｐａ－，Ｉｐａ＋）免疫后引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的细胞免疫反应，以探明痢疾菌苗在肠粘膜的免疫保护机制。方法以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分成两组，每组２５只，灌胃免疫ＦＳＭ－２１１７及ＦＳ－５４１６，８×１０８ＣＦＵ／只，分别在１，４，７，１０，１３天随机取各组小鼠５只分离ＧＡＬＴ淋巴细胞；同时设一组ＰＢＳ对照组，以间接免疫荧光法检测ＧＡＬＴ中诱导部位〔派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）〕及效应部位〔上皮间淋巴细胞（ＩＥＬ）、粘膜固有层（ＬＰＬ）〕Ｔ细胞亚群的变化，荧光显微镜计数２００个细胞计算阳性率。结果用ＳＡＳ软件，单因素方差分析，表明两株双价菌苗株均可引起肠粘膜ＧＡＬＴ中ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞亚群改变，不同粘膜部位免疫反应不同。诱导部位（派氏小结、肠系膜淋巴结）ＣＤ４＋细胞亚群明显升高，末次免疫后第７天达峰值，而后迅速下降；在效应部位，粘膜固有层表现为ＣＤ４＋细胞亚群明显?

双价志贺菌苗灌胃免疫小鼠后肠粘膜的免疫应答

为了观察两株福氏、宋内双价志贺菌苗 (Ipa ,Ipa+ )免疫后所引起的肠粘膜诱导部位的免疫应答及为研制有效腹泻疫苗提供理论基础。应用小鼠灌胃免疫为模型 ,以间接免疫荧光法和BA ELISPOT方法 ,检测了肠粘膜相关淋巴组织 (gutasso ciatedlymphoidtissues ,GALT )中诱导部位派伊尔小结 (Payer’spatches ,PP )、肠系膜淋巴结 (mesentericlymphoidnode ,MLN )T淋巴细胞亚群和特异性抗体分泌细胞的变化 (ASC )及小肠局部和系统的特异性抗体变化。发现两株双价菌苗株均可引起肠粘膜GALT诱导部位CD4+ 淋巴细胞亚群、抗体分泌细胞明显升高 ;同时局部及血清中特异性抗体明显升高。说明双价志贺菌苗灌胃免疫小鼠后 ,诱导部位的免疫应答早期以体液免疫为主 ,灌胃不仅可诱导局部特异性抗体免疫应答也可诱导系统的抗体免疫应答。

双价痢疾工程疫苗经粘膜免疫动物的实验研究

目的 探讨不同粘膜免疫途径对 2株痢疾工程疫苗免疫效果的影响。方法 用FSM 2 1 1 7或FS 54 1 6以 4× 1 0 7CFU/只分别经滴鼻、灌胃和小肠内免疫小鼠 ,3次免疫后 7d分离小鼠脾、派伊尔结 (PP)、肠系膜中心淋巴结 (MLN)、小肠淋巴细胞固有层 (LPL)、鼻通道 (NP)及NALT淋巴细胞 ,用BA ELISASPOT法检测其特异性抗FSM 2 1 1 7或FS 54 1 6全菌抗原的IgA、IgG ASC(抗体分泌细胞 )数量。结果 2株疫苗经鼻内免疫都诱发了鼻粘膜相关淋巴组织、胃肠粘膜相关淋巴组织以及代表系统免疫反应的脾淋巴细胞全菌抗原特异性IgA、IgG ASC的显著增加 (P <0 .0 5和 0 .0 1 )。小肠内免疫后 ,可有效诱发肠粘膜局部以及脾淋巴细胞全菌抗原特异性IgA、IgG ASC的显著增加 (P <0 .0 1 ) ,但不能刺激鼻粘膜局部淋巴细胞的特异性ASC反应。结论 2株疫苗经鼻粘膜免疫均可诱导NALT和GALT及系统免疫反应的发生 ,是一个可行的免疫途径。