鳗弧菌油乳化二价口服疫苗免疫养殖大菱鲆的免疫应答及免疫效果的研究

以鳗弧菌M3和SMP1为细菌抗原制备了油乳化二价疫苗,用饵料包埋后连续7天口服免疫大菱鲆鱼,评价鱼的免疫应答和疫苗的保护效果.结果显示,乳化疫苗在鱼后肠刺激产生的溶菌酶和抗蛋白酶活性以及抗体水平均高于未乳化疫苗（P＜0.05）;并且在乳化疫苗免疫的鱼血清检测到明显升高的M3抗体效价（P＜0.05）.原位杂交结果显示,乳化疫苗免疫鱼的后肠IgM的产生水平高于未乳化疫苗免疫鱼.攻毒实验显示,乳化疫苗免疫的鱼对M3和SMP1的感染分别获得100%和50%的免疫保护率,而未乳化疫苗获得的免疫保护率分别为57.9%和0%.结果表明,鳗弧菌油乳化二价口服疫苗能引起大菱鲆后肠的非特异性和特异性免疫应答并有效地抵抗鳗弧菌的感染,适合用作水产口服鱼用疫苗.

霍乱弧菌毒力表达调控基因及霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株的研究

目的研究霍乱弧菌毒力表达调控基因与霍乱弧菌毒力之间的关系 ,构建霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株。方法首先采用PCR扩增、Southern印迹杂交及原位杂交对我国不同群型霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR、toxS、toxT的分布进行研究 ;然后采用自杀性质粒和接合转移技术构建霍乱弧菌toxR基因缺失株 ,并与原出发菌株比较 ,确定toxR基因对霍乱弧菌毒力表达调控机制 ;再用基因定向置换技术构建霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株。结果霍乱弧菌毒力表达调控基因与霍乱弧菌毒力表达有关 ;霍乱弧菌toxR蛋白是霍乱肠毒素的正调控因子 ,是霍乱弧菌主要外膜蛋白 (4 0kDa、4 3kDa)编码基因的负调控因子。结论初步构建霍乱。

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性，将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因，与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后，诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后，诱发了高水平的ＣＤ８＋ Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示，ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答，而活菌苗口服可能是理想的免疫途径，为ＨＣＶ／ＨＢＶ 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．

2021年北京市石景山区口服二价脊髓灰质炎减毒活疫苗损耗系数分析

目的 了解北京市石景山区口服二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)接种现况,通过分析计算bOPV的损耗系数,了解其损耗程度,为制定科学的疫苗使用计划,提高疫苗使用效率提供依据。方法 利用北京市疾控系统疫苗采购进销存管理系统及北京市石景山区生物制品报表,收集石景山区辖区内2021年各预防接种门诊bOPV的接种数据,采用SPSS21.0软件进行分析,率的比较采用χ^(2)检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 北京市石景山区2021年18家预防接种门诊bOPV共使用5 280剂次,接种2 085剂次,耗损系数为2.53,接种门诊最低耗损系数为1.59,最高为10.00。卫健委直属门诊(2.18)、企事业单位直属(2.61)、军队自管门诊(3.20)和学校直属门诊(3.87),bOPV接种情况差异有统计学意义(P=0.020);A级规范化门诊(4.80)、AA级规范化门诊(2.27)和AAA级规范化门诊(3.55),bOPV接种情况差异有统计学意义(P=0.002);接种周期1次/周(3.27)、2次/周(4.01)、3次/周(3.40)和4次/周(2.03),bOPV接种情况差异有统计学意义(P=0.002);接种量不同门诊、滴管使用情况不同门诊、bOPV废弃时间不同门诊bOPV接种情况差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 北京市石景山区bOPV损耗较高,建议各接种门诊安排bOPV固定接种日,增加bOPV的日接种量,提高bOPV使用效率,同时建议引入小包装剂次疫苗,减少不必要浪费。

二价脊灰疫苗疑似预防接种异常反应监测分析

目的初步评价河北省Ⅰ型Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(b OPV)预防接种的安全性。方法收集全国疑似预防接种异常反应(AEFI)监测系统数据,采用描述性流行病学方法进行分析。结果河北省2016年5—12月接种b OPV报告的AEFI估算报告发生率为155.97/100万;2015年接种脊髓灰质炎减毒活疫苗(二倍体)(t OPV)AEFI估算报告发生率为88.29/100万,反应类型均以一般反应为主,病例报告主要集中在≤1岁和第1接种剂次。经统计学分析,接种b OPV AEFI估算报告发生率高于t OPV,其单独接种时发生AEFI的构成比较高,2种疫苗发生AEFI的月龄、剂次和发生时间间隔差异无统计学意义。结论河北省所用b OPV的AEFI估算报告发生率高于国家关于脊髓灰质炎减毒活疫苗的报告发生率,应继续加强AEFI监测,不断完善b OPV的安全性数据。

北京市二价脊髓灰质炎减毒活疫苗引入前后不同基础免疫程序效果和疫苗效价分析

目的了解二价脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(b OPV)引入前后北京市2014年和2016年不同基础免疫程序免疫效果和疫苗效价。方法 2014年和2016年脊灰疫苗基础免疫程序分别为3剂三价脊灰减毒活疫苗(t OPV)全程免疫和1剂脊灰灭活疫苗(IPV)与2剂二价脊灰减毒活疫苗(b OPV)序贯免疫,分别在北京市两个区选择完成基础免疫后4-8周的婴儿,采集血标本以检测脊灰病毒中和抗体,同时采集不同疫苗储运环节的疫苗标本以检测疫苗效价。结果 2014年和2016年分别调查儿童72人和68人。2014年基础免疫后Ⅰ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体阳性率分别为98.61%和100%,抗体滴度(1∶)[中位数(四分位数间距)]分别为1 536(1 024-1 536)、1 536(512-1 536);2016年基础免疫后Ⅰ型、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体阳性率均为100%,抗体滴度(1∶)分别为1 024(512-1 536)、1 536(1 024-1 536)。2014年和2016年Ⅰ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体分布均有显著性差异(Ⅰ型:χ2=8.77,P=0.038;Ⅲ型:χ2=16.76,P=0.001)。2014年t OPV的平均效价为6.1±0.1Lg CCID50/剂,2016年b OPV的平均效价为6.9±0.2Lg CCID50/剂(t=-7.76,P<0.001)。结论新疫苗b OPV引入后,IPV-b OPV序贯免疫程序的基础免疫效果与引入前的t OPV全程和IPV-t OPV序贯免疫程序效果一样好;疫苗储运各环节疫苗效价均合格,冷链运转良好。

脊髓灰质炎灭活疫苗与二价脊髓灰质炎减毒活疫苗两种序贯基础免疫程序的免疫原性比较

目的比较脊髓灰质炎(脊灰)灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)与I+III型二价脊灰减毒活疫苗(Bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)两种序贯基础免疫程序的免疫原性。方法在河北省肥乡区招募健康婴儿,随机分成两组,按2-3-4月龄基础免疫程序分别接种IPV-bOPV-bOPV和IPV-IPV-bOPV,检测基础免疫前和免疫后28-42d血清脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体,分析中和抗体阳性率、阳转率和几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)。结果IPV-bOPV-bOPV、IPV-IPV-bOPV程序组分别招募受试者69名、68名,两组婴儿基础免疫后脊灰病毒中和抗体阳性率分别为Ⅰ型100%、100%,Ⅱ型98.55%、100%,Ⅲ型100%、100%;阳转率分别为Ⅰ型100%、100%,Ⅱ型97.06%、100%(Fisher确切概率法,P>0.05),Ⅲ型100%、100%;GMT增长倍数分别为Ⅰ型758倍、810倍(Z=-0.62,P=0.535),Ⅱ型5倍、26倍(Z=-5.15,P<0.001),Ⅲ型379倍、634倍(Z=-3.34,P=0.001)。结论两种IPV与bOPV序贯基础免疫程序均具有良好的免疫原性;IPV-IPV-bOPV程序对Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒的免疫原性优于IPV-bOPV-bOPV程序。

接种医生与家长对二价脊灰疫苗的知信行影响因素比较分析

目的了解河北省公众对二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(Bivalent oral poliomyelitis live vaccine,b OPV)的知晓情况和接种意愿,为预防接种宣传沟通策略的制定提供依据。方法根据人口数量、地理条件、AEFI报告发生率等综合因素选取石家庄市等6市,随机抽取其接种单位医生和儿童家长进行自填式问卷调查。对调查结果进行描述性分析。结果在线收集1 142份调查问卷,有效问卷1 090份,其中儿童家长720份(占66.06%)。1 041人(占95.50%)知晓脊髓灰质炎,1 081人(占99.17%)了解脊灰疫苗可预防脊灰/小儿麻痹,接种医生对脊灰疫苗相关知识的知晓率、对国产疫苗安全性的信任度高于儿童父母,接种门诊/疾控中心/医院是公众获取脊灰疫苗相关知识的主要途径,也是公众最相信的途径;249人(占22.84%)会犹豫给孩子接种b OPV,主要原因(162人,占65.06%)是担心其安全性。84.31%知晓接种疫苗可能会发生异常反应,69.45%认为国产疫苗非常安全或安全。结论年龄、文化程度和职业在不同程度上均影响家长对脊灰疫苗的知信行,部分接种医生和家长存在接种犹豫现象,要求继续提高公众对脊灰疫苗的认识,消除对其安全性及有效性的疑虑。

浙江省二价脊灰疫苗预防接种安全性监测分析

目的分析浙江省接种二价的Ⅰ型、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)报告疑似预防接种异常反应(AEFI)发生情况,评价bOPV预防接种的安全性。方法通过全国AEFI监测信息管理系统,收集2016年5月-2018年10月浙江省bOPV的AEFI监测数据进行描述性分析。结果浙江省2016年5月-2018年10月共报告bOPV引起的AEFI病例378例,报告发生率为7.96/10万剂,其中一般反应278例(73.54%)、报告发生率为5.86/10万剂,异常反应81例(21.43%)、报告发生率为1.71/10万剂,偶合症17例(4.50%)、待定2例(0.53%);1岁以内和4岁组分别报告260例(68.78%)和104例(27.51%),与接种程序相应年龄的接种剂次相关;接种1天及以内发生的AEFI占92.33%;报告严重异常反应血小板减少性紫癜2例、血管性水肿1例,偶合死亡2例(分别偶合窒息和急性肠坏死致中毒性休克)。结论提示浙江省bOPV预防接种安全性总体良好,但仍需关注罕见的严重异常反应病例的发生。

河北省二价脊髓灰质炎减毒活疫苗预防接种安全性监测分析

目的评价河北省二价脊髓灰质炎减毒活疫苗（bOPV）预防接种的安全性。方法通过全国疑似预防接种异常反应（AEFI）监测信息管理系统收集河北省2017年bOPV的AEFI报告数据,进行描述性分析。结果河北省2017年共报告bOPV的AEFI 590例,报告发生率为22.02/10万剂,其中一般反应、异常反应分别占95.25%（562例,20.98/10万剂）、3.39%（20例,0.75/10万剂）;≤1岁占70.34%;发生在接种疫苗后≤1d内占87.63%。结论河北省bOPV预防接种安全性良好。

北京市丰台区二价脊髓灰质炎减毒活疫苗损耗系数分析

目的通过分析北京市丰台区二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)损耗系数,了解其损耗程度,为科学制定疫苗使用计划,规范疫苗管理提供依据。方法根据统一设计的《丰台区二价脊灰疫苗接种情况日报表》,收集丰台区所有接种单位2016年5月9-27日bOPV接种情况和使用情况。结果丰台区共67家儿童预防接种门诊开展b OPV接种。5月9-27日,b OPV损耗系数为2.10。村属社区站/部队属门诊(2.27)、行业门诊(2.22)和卫生和计划生育委员会直属门诊(1.98)损耗系数之间的差异有统计学意义。达标门诊(2.24)与规范化门诊(2.04)损耗系数之间差异有统计学意义。日均接种量<10人次损耗系数(2.39)高于10~20人次(2.12)和>20人次损耗系数(1.75),差异有统计学意义。损耗系数在每人一个滴管与无污染的情况下不更换滴管之间差异有统计学意义。损耗系数在冷藏保存30 min废弃和当日持续使用之间差异有统计学意义。结论丰台区bOPV损耗率高。为降低损耗,各接种单位应规范使用滴管和剩余疫苗,安排集中接种,减少疫苗开启数量。

脊髓灰质炎病毒受体转基因小鼠接种Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎减毒活疫苗后的排毒规律

目的通过脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒受体转基因小鼠动物模型,探讨接种Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)后的排毒规律。方法以灌胃方式给脊灰受体转基因小鼠接种3剂bOPV,间隔28 d。每剂bOPV接种后第1、3、5、7天采集当天小鼠粪便样本,实时定量PCR检测每剂bOPV接种后的排毒量,ELISA法检测脊灰特异的肠道黏膜免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)抗体水平,分析排毒与接种剂次、黏膜IgA水平的关系。将接种了bOPV后检测到排毒量高和排毒量低的两组小鼠分别与洁净小鼠共居,观察洁净小鼠接触后的排毒反应。结果随着接种bOPV剂次的增加,疫苗所引发的排毒量逐渐减少。第1剂bOPV接种后排毒量较高的个体在接种下一剂bOPV后的排毒量显著低于首剂排毒量低的个体(P<0.05)。第1剂bOPV接种后IgA呈阳性的个体在第1剂接种后的排毒量高于IgA呈阴性组,但第2剂接种后排毒量低于IgA呈阴性组。与高排毒组小鼠共居后,洁净小鼠发生排毒的机率显著高于与低排毒的小鼠共居的洁净小鼠(P<0.05),且Ⅲ型脊灰疫苗株比Ⅰ型引起洁净小鼠的排毒反应持续性更长。结论在脊灰消灭的最后阶段,预防脊灰流行的一个关键仍在于激发人群对抗脊灰病毒复制的黏膜免疫,减少排毒。增加bOPV接种剂次可减少后续个体接触脊灰病毒后的排毒概率。在b OPV接种后,需加强排毒检测和个人卫生管理,特别是首剂bOPV接种后。

口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗的制备及检定

目的制备口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,并进行全面检定。方法制备O1、O139群霍乱弧菌灭活菌体原液及重组霍乱毒素B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,r CTB)原液,按比例混合制成口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,为保护r CTB免受胃酸的破坏,制备了碳酸氢钠抗酸泡腾颗粒,并按照制定的新制品原液及成品的质控标准,对原液及成品进行全面检定。结果制备的口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗工艺稳定,各项指标均达到质控标准。结论口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗安全、有效,且制备工艺可行,符合规模化生产的要求。

双歧杆菌对Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎减毒活疫苗黏膜免疫的影响

目的探讨双歧杆菌对Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎(简称脊灰)减毒活疫苗(bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)黏膜免疫的影响。方法给脊灰受体转基因小鼠接种2剂bOPV,间隔28 d,试验组小鼠在每剂bOPV接种前7 d灌胃双歧杆菌,同时对照组小鼠喂PBS。每剂疫苗接种后第3和第7天采集当天小鼠粪便样本,测定其中脊灰特异的IgA水平和排毒水平。在bOPV接种后检测小鼠细胞因子分泌水平和肠道淋巴结的淋巴细胞分群。结果第1剂和第2剂bOPV接种后的第3天,试验组小鼠脊灰特异的黏膜IgA水平均显著高于对照组(P<0.05或<0.01),且第1剂接种第3天,试验组小鼠IgA阳转率显著高于对照组(P<0.05)。试验组小鼠接种第1剂bOPV后第3天,Ⅰ型脊灰病毒排毒量显著低于对照组(P<0.01)。试验组小鼠在bOPV免疫后能激活更多的B淋巴细胞(P<0.000 1)和Th1通路的细胞因子IL-1、TNF-α(P<0.05)。结论双歧杆菌用于bOPV接种前可提高脊灰特异的黏膜免疫IgA分泌水平,且具有一定的减缓排毒作用。

河北省脊髓灰质炎疫苗免疫程序转换后急性弛缓性麻痹病例监测分析

目的了解河北省脊髓灰质炎(脊灰)疫苗免疫程序转换对15岁以下儿童急性弛缓性麻痹(AFP)病例流行特征的影响,为制定科学的防控措施提供依据。方法对河北省脊灰疫苗免疫程序转换前(2015年5月至2016年4月)和转换后(2016年5月至2017年4月)AFP监测系统报告病例进行描述性分析,使用SPSS 21.0软件对数据进行统计检验,率和构成比的比较采用χ2检验和Fisher′s确切概率法。结果脊灰疫苗免疫程序转换前,河北省报告AFP 312例,转换后报告361例,报告发病率分别为2.38/10万和2.58/10万。AFP病例均在夏秋季高发,男性高于女性,集中在0～4岁组;疾病谱均以吉兰–巴雷综合征(又名"格林巴利综合征")为主,但手足口病及脊髓炎病例增多;残留麻痹率分别为11.86%、17.45%;脊灰病毒阳性分离率分别为2.56%、1.66%,优势毒株分别为Ⅰ、Ⅲ型;非脊灰肠道病毒分离率分别为19.23%、12.74%。结论脊灰疫苗免疫程序转换前后,河北省AFP病例的发病率、季节、地区及人群分布均未发生明显改变;疾病谱构成发生变化,残留麻痹增多,非脊灰肠道病毒分离率下降,脊灰病毒优势株由Ⅲ型取代Ⅰ型。

适龄儿童无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗基础免疫与脊髓灰质炎疫苗同时接种不良反应观察

目的评价儿童无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-Hib)基础免疫与脊髓灰质炎(脊灰)疫苗同时接种的不良反应。方法在北京市通州区3个接种门诊招募3-12月龄儿童,观察DTaP-Hib单独接种、与脊灰灭活疫苗(IPV)同时接种、与二价口服脊灰减毒活疫苗(bOPV)同时接种后0-14d不良反应,比较不良反应发生率。结果儿童DTaP-Hib基础免疫单独接种、与IPV同时接种、与bOPV同时接种的不良反应发生率分别为5.89‰(49/8321)、6.18‰(9/1457)、4.86‰(16/3293)(χ^(2)=0.52,P=0.770),其中局部反应分别为3.97‰、4.12‰、3.34‰,全身反应分别为1.92‰、2.06‰、1.52‰;1级不良反应发生率分别为4.33‰、4.12‰、3.04‰,2级不良反应发生率分别为1.20‰、1.37‰、1.52‰,3级不良反应发生率分别为0.36‰、0.69‰、0.30‰,无4级不良反应发生。结论儿童DTaP-Hib基础免疫单独和与脊灰疫苗同时接种的不良反应发生率均在可接受范围内;同时接种未增加不良反应的发生风险和严重程度。

兔病毒性出血症二价口服疫苗免疫抗体水平测定

为验证兔病毒性出血症二价口服疫苗(AN301,R301-1)饮水免疫的免疫效果,分别选择母兔和商品兔进行了饮水免疫1次,取免疫后7、14、21、28、42 d等时间点采集血清样品,并按照一定浓度梯度稀释后分别采用间接ELISA和阻断ELISA进行了RHDV1和RHDV2的抗体水平检测。结果显示,受试母兔免疫后14、28 d、产仔后7和14 d期间RHDV1和RHDV2抗体效价都在1∶1000~1∶8000之间,抗体水平增加并趋于稳定;商品兔免疫7、14、28、42 d期间RHDV1和RHDV2抗体水平都在1∶1000~1∶8000之间,抗体水平增加并趋于稳定。说明兔病毒性出血症二价口服疫苗(AN301,R301-1)饮水免疫后可刺激母兔和商品兔产生相对稳定的RHDV1和RHDV2的抗体水平,为该疫苗的进一步推广应用提供了科学参考。