乌骨鸡磷脂侧链脂肪酸的GC-MS分析

用氯仿:甲醇(2:1)超声提取乌骨鸡总磷脂,丙酮脱油精制后,经皂化、甲酯化处理,应用GC-MS联用技术对其侧链脂肪酸组成进行分析,并以面积归一法,计算各脂肪酸的相对百分含量。结果显示,乌骨鸡总磷脂中含有硬脂酸27.46%、花生四烯酸21.39%、油酸18.22%、亚油酸16.67%、棕榈酸12.13%、二十二碳六烯酸(DHA)2.26%、二十碳三烯酸1.71%、棕榈油酸0.16%。不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的含量分别为60.41%和42.03%。乌骨鸡磷脂侧链脂肪酸中高比例的多不饱和脂肪酸和花生四烯酸含量是乌骨鸡磷脂的显著特征。

泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶诱导HSF细胞损伤的保护作用

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤细胞DNA的保护作用。方法:传代培养人皮肤成纤维细胞(HSF),随机分为正常对照组,5-FU组,5-FU+泰和乌骨鸡活性肽组。应用MTT法检测细胞存活率,单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测5-FU引起HSF细胞DNA损伤程度,羟脯氨酸试剂盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量。结果:与正常对照组比较:5-FU组HSF细胞DNA的损伤程度较严重,且尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量显著增加(p<0.001),细胞培养液中羟脯氨酸含量显著性减少(p<0.05)。与5-FU组比较,泰和乌骨鸡活性肽组细胞的尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量均显著性减少(p<0.001),而细胞培养液上清中羟脯氨酸含量升高(p<0.01)。结论:泰和乌骨鸡活性肽对HSF细胞DNA损伤具有保护作用,泰和乌骨鸡活性肽可以剂量依赖性地降低5-FU诱导的HSF细胞DNA的断裂损伤。

HPLC-PAD法优化乌骨鸡活性肽分离纯化

乌骨鸡是一种具有药用价值的鸡种,乌骨鸡的鸡肉蛋白通过酶促水解后可获得多肽产物乌骨鸡活性肽,营养价值高,分离纯化活性肽是研究乌骨鸡应用价值的基础。利用装置C18反相色谱柱或TSKgel凝胶色谱柱的高效液相色谱仪进行乌骨鸡活性肽的分离优化,针对流动相、流速进行优化的同时,参考波长、进样量,以出峰数为主,结合分离度等考察分离效果。结果表明:C18柱的出峰数随甲醇含量及流速的降低而增加;三氟乙酸或磷酸盐作缓冲液时出峰数基本一致,但分离度不同;综合因素得pH 6.0磷酸盐/6%甲醇/水体系的流动相、0.2 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。TSKgel柱的乙腈分离效果优于甲醇,梯度洗脱效果较好;综合因素得出0.1%三氟乙酸/(10%~25%)乙腈/水体系的流动相、0.5 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。

超高效液相色谱-串联质谱法测定乌骨鸡中23种磺胺类药物残留

目的:建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定乌骨鸡中23种磺胺类药物的方法。方法:样品采用1%(体积分数)乙酸的乙腈溶液提取,提取液经C18、PSA和多壁碳纳米管净化,以甲醇和乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,通过BEH C18柱分离,电喷雾正离子扫描,在多反应监测模式下,外标法定量。结果:23种磺胺类药物在1.0~50 ng/mL的浓度范围内,线性关系良好,相关系数(r)大于0.995;方法的检出限在0.02~0.58μg/kg,定量限为0.07~1.91μg/kg;平均加标回收率在74.8%~106.0%之间,相对标准偏差(RSD)为3.1%~9.8%。结论:该方法前处理简单快速、灵敏度高,适用于乌骨鸡中23种磺胺类药物的快速筛查。

H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量

建立一种简单、准确、灵敏度高的测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的荧光分析法。黑色素不发荧光,一旦在强烈的氧化条件下(在碱性过氧化氢中加热)被氧化后就会发出强烈的荧光,通过测量其相对荧光强度来测定细胞中黑色素的含量。利用荧光分光光度计在带宽为5 nm,扫描速度为2400 nm·min^-1,扫描间距为1 nm的条件下确定乌骨鸡黑色素的激发波长和发射波长。通过单因素实验筛选浓度范围在10~100μg·mL^-1的乌骨鸡黑色素的最佳氧化条件,对该方法的线性范围、检测限、仪器精密度、重复性等结果进行分析评价。向A375细胞(无黑色素的人的黑色素瘤细胞)样品中分别加入25,40和80μg·mL^-1黑色素标准品,在最佳氧化条件下进行反应后测定细胞样品中黑色素含量。计算测定值与理论值的相对误差值,意在探究细胞中杂蛋白和脂质对黑色素定量结果的影响;向乌骨鸡黑色素细胞样品中分别加入5.00,7.50和10.00μg的黑色素标准品,按照最佳氧化条件测定其细胞样品中总黑色素含量,并计算其加标回收率。结果表明:乌骨鸡黑色素的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm;乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为:pH为8,氧化温度为55℃,过氧化氢浓度范围为24%~26%,氧化时间为2 h;黑色素浓度在10~100μg·mL^-1范围内与相对荧光强度呈良好线性关系,相关系数r=0.9974,线性回归方程为b=0.0147a+0.3138,荧光分析法的方法检出限为0.30μg·mL^-1,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg·mL^-1;精密度实验的RSD值为1.87%,重复性实验的RSD值为4.59%;在A375细胞中加入不同质量的黑色素标准品后,测量值与理论值的相对误差分别为2.78%,3.53%和0.25%;在乌骨鸡黑色素细胞中加入不同黑色素标准品后,测得的加标回收率分别为95.94%,92.14%和99.83%,RSD值为4.00%;综上所述,该方法简单、准确、稳定、检测限低,且测定结果不受细胞内杂蛋白以及脂质的干扰,更适用于测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的含量。

H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡中黑色素含量的研究

本研究首次建立了简单、快速地测定乌骨鸡黑色素含量的荧光分析方法。乌骨鸡黑色素在碱性条件下经过氧化氢氧化后产生强烈的荧光。本研究优化了样品前处理条件以及氧化反应条件,对线性范围、检测限以及加标回收率进行了评价。结果表明,最佳氧化条件:氧化温度为55℃,过氧化氢溶液工作浓度范围为20%~25%,氧化反应时间为2 h;最佳样品前处理的条件:NaOH浓度为0.1~0.2 M,超声时间为40 min,超声温度为70℃。黑色素浓度在50~600μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9986。与传统检测方法相比,荧光分析法无需从样品中提取黑色素,极大地加快了分析速度,简化了分析操作,并且该方法相对于紫外分光光度法的检测限降低了至少10倍。样品添加不同浓度的黑色素工作标准品的平均回收率为102.87%,RSD值为4.51%。采用该方法测定了乌骨鸡鸡皮、腿肌、胸肌中的黑色素含量,结果显示乌骨鸡肉中的黑色素含量:鸡皮>腿肌>胸肌,分别占鲜重的1.08%、0.44%、0.34%。以上结果表明该方法较快速、准确、检测限低,适用于乌骨鸡中黑色素含量的测定。

L-酪氨酸对泰和乌骨鸡胸腺肥大细胞数量的影响

黑色素是反映乌骨鸡肉质的重要标志,也是影响市场价格的重要因素,但乌骨鸡黑色素生成的机理仍未完全阐明。该试验在饲料中添加不同浓度的L-酪氨酸,通过甲苯胺蓝组织化学染色法检测和分析胸腺肥大细胞的数量变化,探究外源性L-酪氨酸和乌骨鸡胸腺肥大细胞之间的相关性。胸腺石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色结果表明,在泰和乌骨鸡胸腺中有黑色素分布。甲苯胺蓝组织化学染色表明胸腺中有大量的肥大细胞,多呈卵圆形,胞质呈紫红色,多分布于胸腺髓质血管和胸腺小体周围,肥大细胞数量为14.1±2.8个/视野。随着饲料中L-酪氨酸浓度增加,胸腺肥大细胞数量也增加。在饲料L-酪氨酸浓度为0.8%时,胸腺肥大细胞数量达到峰值28.8±6.5个/视野;L-酪氨酸浓度为1.0%时,胸腺肥大细胞下降为16.5±2.4个/视野。因此,在浓度为0~0.8%范围内,外源性L-酪氨酸可显著促进胸腺肥大细胞的数量增加(P<0.05),L-酪氨酸浓度与肥大细胞数量呈正相关。该试验结果有助于理解禽类黑色素生成的细胞学机理。

氟苯尼考在泰和乌鸡可食性组织中残留消除规律研究

为研究氟苯尼考可溶性粉在泰和乌鸡体内可食性组织的残留变化规律,试验选择64只110日龄健康泰和乌鸡(公母各半),按推荐剂量0.5 g可溶性氟苯尼考粉/L饮用水连续给药5 d。在停药后第0.16、1、3、5、7、9、12、15天随机屠宰4只公鸡和4只母鸡,分别采集肌肉、肝脏、肾脏、皮脂样本,采用超高效液相色谱-串联质谱联用法测定组织中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量,并利用WT1.4软件计算氟苯尼考在泰和乌鸡体内的休药期。结果显示,氟苯尼考和氟苯尼考胺在泰和乌鸡肌肉、肝脏、肾脏组织内残留消除较为迅速,而在皮脂组织消除相对缓慢;氟苯尼考可溶性粉在泰和乌鸡肌肉、肝脏、肾脏、皮脂中的休药时间分别为4.36 d、0.00 d、0.00 d、9.81 d。研究表明,为保证泰和乌鸡产品质量安全,氟苯尼考在泰和乌鸡体内的推荐休药期应大于10 d。

基于JAK2/STAT3信号通路的乌鸡肽营养素配方治疗贫血功效研究

乌鸡是我国特有的鸡种,具有很好的补血功能,利用乌鸡开发新的补血产品具有很大优势。该研究通过对贫血小鼠灌喂添加营养素(EDTAFeNa和维生素)的乌鸡肽配方样品,测试对其造血能力的恢复功效并通过探究信号通路研究造血作用机制。实验通过使用环磷酰胺和乙酰苯肼制造小鼠贫血模型,并检测外周血象、骨髓病理学观察、间接胆红素含量、ATP酶活力、造血因子水平以及JAK2/STAT3信号通路。结果表明乌鸡肽营养素配方可以显著恢复外周血细胞和骨髓造血干细胞数量;减少间接胆红素含量,提高ATP酶活力从而保护红细胞免受破裂损伤;通过分泌促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、重组巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素-3(interleukin-3,IL-3)造血因子促进造血细胞恢复,并通过JAK2/STAT3信号通路调控造血细胞增殖分化。该研究为乌鸡肽的开发和利用提供了指导。

乌鸡肽铁(Ⅱ)螯合物的制备及红外光谱鉴定

以乌鸡低聚肽为原料,FeCl2为铁源优化乌鸡肽铁(Ⅱ)螯合物的制备工艺,通过测定铁离子螯合率和多肽铁得率衡量螯合效果,并通过傅里叶红外光谱对螯合产物进行结构分析。优化结果表明,乌鸡肽铁(Ⅱ)螯合物的最佳螯合条件为:乌鸡肽浓度,4%(g/mL);乌鸡肽与亚铁盐的质量比,5∶1,pH值,4。在此条件下乌鸡肽铁(II)螯合物的螯合率为(84.76±0.12)%,螯合物得率为(40.27±0.15)%。红外光谱分析表明,乌鸡肽铁(Ⅱ)螯合物中Fe2+与NH2+以及-COO-形成配位键,说明成功生成了一种新型肽铁螯合物。

泰和乌骨鸡黑色素的体外抗氧化作用

采用分光光度法测定磷钼酸配合物、自由基和丙二醛(MDA)的含量,用于研究酶法提取的泰和乌骨鸡黑色素的总抗氧化能力及其清除自由基和抗脂质过氧化的作用,研究过程中用合成黑色素与之进行比较。结果表明:泰和乌骨鸡黑色素清除羟基自由基的能力虽然低于合成黑色素,但其总抗氧化能力与合成黑色素相当,而清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基的能力以及抗脂质过氧化作用都优于合成黑色素,说明泰和乌骨鸡黑色素具有明显的体外抗氧化功能。

乌骨鸡活性肽组成成分及体外抗氧化活性研究

本实验对乌骨鸡活性肽的蛋白质含量、多肽含量、游离氨基酸含量和多肽的分子量分布进行了研究,并通过测定乌骨鸡活性肽对Fenton反应产生的羟自由基、邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子的清除率,考察乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力。乌骨鸡活性肽组成分析表明:活性肽中蛋白质含量为90.53%,其中主要成分为小分子多肽(51.46%)和氨基酸(36.17%)。乌骨鸡活性肽分子量分布的凝胶色谱法测定结果显示其分子量集中在1900Da以下,其中小肽所占相对比例较大。体外抗氧化实验结果表明:乌骨鸡活性肽具有较强的清除羟自由基的能力,其清除率与浓度呈剂量关系;并能明显降低邻苯三酚自氧化速率,抑制率与浓度呈正相关,但与肌肽比较,乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力相对要弱。

乌骨鸡与非药用鸡种鸡肉总脂质含量及脂肪酸组成的比较

分析比较了乌骨鸡与非药用鸡种鸡肉间的总脂质含量和脂肪酸组成的差异,为研究乌骨鸡总脂质的营养与补益功能提供基础。以相同条件养殖的非药用鸡种崇仁麻鸡、岭南黄鸡鸡肉为对照,测定3种鸡肉中的总脂质含量。采用GC-MS联用技术对3种鸡脂肪的脂肪酸组成进行定性、定量分析。结果发现:3种鸡肉中崇仁麻鸡的总脂质含量最高,乌骨鸡的含量最低。3种鸡的总饱和脂肪酸(SFA)和不饱和脂肪酸(UFA)差别不显著,乌骨鸡鸡肉中多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(EFA)和花生四烯酸质量分数分别为26.4%、23.38%、3.21%,显著高于其他两种鸡。乌骨鸡总脂质较非药用鸡种的总脂质有更好的营养价值。

乌骨鸡黑色素的高效液相色谱法测定

建立了乌骨鸡黑色素氧化产物2,3-二羧酸吡咯(PDCA)和2,3,5-三羧酸吡咯(PTCA)的HPLC测定方法,对乌骨鸡中黑色素进行定量研究。采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,二极管阵列检测器检测,流动相为甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱,检测波长分别为282.8 nm和269.8 nm,并采用LC-MS对色谱峰进行定性。结果表明:PDCA和PTCA能得到很好的分离,经过初步分离纯化的乌骨鸡黑色素粗品中黑色素的含量为76.3279μg/mg。

乌骨鸡黑色素的提取分离及抗氧化活性研究

采用双酶水解法提取乌骨鸡黑色素,研究碱液脱除蛋白,分离乌骨鸡黑色素的工艺条件。以腹腔注射D-半乳糖法建立小鼠氧化损伤模型,灌胃给予不同剂量乌骨鸡黑色素(500、250、100mg/kgbw),观察其抗氧化活性。结果表明:碱液脱除蛋白分离乌骨鸡黑色素的最佳工艺条件为NaOH溶液(pH10),温度60℃,时间1.5h,料液比1:10,提取4次。与模型组比较,乌骨鸡黑色素组小鼠血和肝脏中GSH-Px活力显著升高,MDA水平显著降低。乌骨鸡黑色素具有较强的体内抗氧化作用。

乌鸡低聚肽体外抗氧化活性研究

在对乌鸡低聚肽的基础理化成分、分子量分布和氨基酸组成进行分析的基础上,从DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除能力以及还原能力4个方面对乌鸡低聚肽的体外抗氧化活性进行了全面的考察。结果显示:乌鸡低聚肽分子量大多为1000u以下(96.74%),含量最高的是140～500u的小肽(78.53%);乌鸡低聚肽具有较强的体外抗氧化能力,抗氧化效果与质量浓度呈正相关,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的半抑制浓度(IC50值)分别为4.5、4.5和12mg/mL,浓度为9.19mg/mL时的还原能力与0.02mg/mL的抗坏血酸相当。

泰和乌骨鸡鸡肉总磷脂含量及其侧链脂肪酸组成的特性

本文比较了相同条件养殖的泰和乌骨鸡和两种非药用鸡鸡肉的总磷脂含量,并以GC-MS联用技术对三种鸡肉中磷脂的疏水侧链脂肪酸组成进行了鉴定和分析,用面积归一法,计算各脂肪酸的相对百分含量。结果表明,泰和乌骨鸡鸡肉中总磷脂含量显著高于非药用鸡,而两种非药用鸡间无显著差异;泰和乌骨鸡鸡肉磷脂侧链脂肪酸中多不饱和脂肪酸和花生四烯酸含量显著高于非药用鸡。

乌骨鸡活性成分及其功能研究进展

乌骨鸡作为药食两用的滋补品在我国应用历史悠久,具有补肝肾、益气血、养阴清热、调经健脾、补肾固精等功效。本文介绍了国内外对乌骨鸡黑色素、活性肽和脂质等主要活性成分及其补血、抗氧化等活性功能的研究进展,为乌骨鸡的综合利用和功能食品开发提供了理论依据。

乌骨鸡活性肽对体外非酶糖基化的抑制作用

采用正交实验优化了体外非酶糖基化反应体系,体系中加入不同浓度的乌骨鸡活性肽Ⅰ、Ⅱ37℃孵育,同时以肌肽为阳性对照,观察乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的影响。通过测定预定时间体外非酶糖基化体系的吸光度和荧光值计算乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的抑制率和对非酶糖基化终产物生成的抑制率。结果表明乌骨鸡活性肽Ⅱ对体外非酶糖基化反应和非酶糖基化终产物的生成均具有较强的抑制作用。

乌骨鸡正己烷提取物补血作用研究

目的:探讨乌骨鸡正己烷提取物的补血作用。方法:口服预防给药后,用放血法制作小鼠失血性血虚证模型,乙酰苯肼和环磷酰胺联用制作小鼠化学性血虚证模型,观察给药对血虚小鼠外周血象、体温、体力、胸腺指数等指标的影响。结果:乌骨鸡正己烷提取物能升高失血性血虚模型小鼠的WBC、RBC、HB水平;升高化学性血虚模型小鼠的体温,增强体力,提高胸腺指数、WBC、RBC,HGB。结论:乌骨鸡正己烷提取物可升高血虚小鼠红细胞、白细胞、血红蛋白等水平,有补血作用。