不同浓度丹皮酚影响膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的实验研究

目的:观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的影响及对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)的调控作用。方法:通过观察不同浓度丹皮酚作用于膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50),探讨不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖的影响。采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞迁移能力和侵袭能力的影响。通过酶联免疫吸附试验法测定不同浓度丹皮酚的含药培养基处理膀胱癌5637细胞24 h后对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)含量及COX-2活性的影响。结果:膀胱癌5637细胞的存活率随丹皮酚浓度的增加而逐渐下降。在72 h、200μg/mL条件下,丹皮酚对细胞增殖的抑制作用最为明显。处理24 h、48 h、72 h,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的膀胱癌5637细胞存活率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理24h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于25μg/mL组、50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。处理48 h、72 h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。丹皮酚作用膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h时的IC50分别为88.27、74.24、77.07μg/mL。细胞划痕实验表明,不同浓度的丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的迁移能力均受到抑制,且呈浓度依赖性,各用药组的划痕愈合率均低于对照组(P<0.05);50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的划痕愈合率均低于25μg/mL组,200μg/mL组的划痕愈合率低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,不同浓度丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的侵袭能力均受到抑制。随着浓度增加,细胞穿过微孔滤膜的数量递减。25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于对照组(P<0.05)。50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的穿膜细胞数均低于100μg/mL组(P<0.05)。膀胱癌5637细胞上清液中的COX-2、PGE2含量及COX-2的活性均随丹皮酚的浓度升高而降低,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。50μg/mL组的PGE2含量低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于25μg/mL组(P<0.05);100μg/mL组的PGE2含量低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。结论:丹皮酚可抑制膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的作用机制可能与降低COX-2、PGE2含量及COX-2活性有关。

CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖和凋亡的影响

目的 探究细胞周期依赖性激酶7(cyclin-dependent kinase 7,CDK7)抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖和凋亡的影响。方法 采用CCK8实验检测细胞的药物毒性情况,筛选有效药物浓度。采用平板克隆实验评估其在体外的抗肿瘤活性,研究其在一定剂量浓度内对肿瘤细胞的增殖能力的抑制作用。采用划痕实验测定药物对肿瘤细胞迁移能力的影响。采用Western blot实验检测凋亡蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖能力具有抑制作用(P<0.05)。平板克隆实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的增殖能力有抑制作用(P均<0.05)。划痕实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的迁移能力有抑制作用(P均<0.05)。Western blot实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的蛋白表达水平有抑制作用(P均<0.05)。结论 CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖有抑制作用、促进凋亡作用,该项研究结果提示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌有治疗效果。

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。

lncRNA HULC在膀胱癌组织中的表达及其对5637细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC在膀胱癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,以及沉默HULC对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法:选取2014年6月至2017年12月郑州人民医院手术切除的102例膀胱癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞株5637和人正常膀胱上皮细胞株SV-HUC-1,用qPCR法检测膀胱癌组织及细胞中HULC的表达,并分析HULC表达与膀胱癌患者临床病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线评估HULC对预后的影响。利用siRNA干扰技术将si-HULC、si-NC质粒转染进5637细胞中,分别采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验及Transwell小室法检测沉默HULC对5637细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:膀胱癌组织中HULC的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),HULC表达水平与患者肿瘤分级、肿瘤分期及淋巴结转移相关联(均P<0.05),HULC高表达患者的OS与PFS明显低于低表达者(均P<0.05)。5637细胞中HULC的表达水平明显高于SV-HUC-1细胞(P<0.01),沉默HULC后的5637细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)、细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:lncRNA HULC在膀胱癌组织及5637细胞中均高表达,沉默HULC表达可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡。

siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭

目的探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响。方法设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-q PCR和Western blot检测SNCG的表达。分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力。结果与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平最高(P<0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P<0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果最明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点。

CTHRC1通过活化FAK-ERK1/2信号通路促进膀胱癌5637细胞迁移和侵袭

目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重庆医科大学附属第一医院手术切除的144例膀胱癌组织和25例全膀胱切除的癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞RT4、5637、T24、UMUC-3、TCCSUP和输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1。采用免疫组织化学染色法、qPCR法和WB法检测膀胱癌组织和细胞中CTHRC1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线分析CTHRC1表达对总生存期(OS)的影响。运用RNAi技术,敲降5637细胞CTHRC1表达后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测CTHRC1表达下调对5637细胞迁移和侵袭的影响。利用基因集富集分析(GSEA)预测CTHRC1相关的潜在信号通路,WB法检测敲降CTHRC1表达对FAK-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响。结果:CTHRC1的转录和翻译水平在肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织和细胞中表达显著上调(均P<0.05),CTHRC1高表达组患者5年OS较低表达患者缩短(P<0.05)。干扰CTHRC1表达后,膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。GSEA预测显示,CTHRC1高表达组主要富集在黏着斑激酶(FAK)、肌动蛋白细胞骨架调节、FAK和ERK1/2信号通路。WB法实验结果表明,重组CTHRC1蛋白促进膀胱癌5637细胞FAK-ERK1/2信号通路活化(P<0.05或P<0.01)。结论:CTHRC1在MIBC中表达上调,且与膀胱癌患者不良预后密切相关;CTHRC1促进膀胱癌细胞迁移和侵袭,该过程可能与FAK-ERK1/2信号通路的激活有关。

miR-128-3p过表达靶向MAPK1抑制膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-128-3p过表达对膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化影响。方法 基因预测软件TargetScan筛选出miR-128-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证;RT-PCR检测miR-128-3p和MAPK1的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ecadherin、N-cadherin、ERK1/2、c-Myc和c-fos的表达,免疫荧光检测Vimentin的表达;裸鼠皮下注射建立移植瘤模型,30 d后检测瘤重量,绘制存活曲线,检测移植瘤中Vimentin、miR-128-3p、MAPK1、ERK1/2、cMyc和c-fos的量。结果 miR-128-3p靶向抑制MAPK1表达;miR-128-3p过表达后,侵袭细胞数目、伤口愈合率降低,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。经miR-128-3p干预,裸鼠体内移植瘤重量减轻,存活率增加,miR-128-3p表达上调,MAPK1的表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。结论 过表达miR-128-3p通过靶向抑制MAPK1表达来抑制膀胱癌细胞5637的侵袭能力、迁移能力、上皮-间充质转化和ERK1/2、cMyc和c-fos通路。

丹参素对膀胱癌5637细胞Src/FAK信号通路及上皮间质转化的影响

目的:探讨丹参素(Dss)对膀胱癌5637细胞类固醇受体共激活因子/黏着斑激酶(Src/FAK)信号通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:用不同浓度的Dss(0、40、60和80μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,分别命名为Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测膀胱癌5637细胞中EMT标志基因[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的信使核糖核酸(mRNA)]表达水平,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞中Src/FAK信号通路相关蛋白表达水平,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测膀胱癌5637细胞增殖情况,采用划痕实验检测膀胱癌5637细胞的迁移能力。结果:Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组膀胱癌5637细胞E-cadherin mRNA表达水平依次升高,N-cadherin mRNA、Vimentin mRNA、磷酸化Src(p-Src)/Src蛋白、磷酸化FAK(p-FAK)/FAK蛋白表达水平以及吸光度、迁移率依次降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:Dss可能通过抑制Src/FAK信号通路来阻碍膀胱癌5637细胞EMT过程,进而抑制膀胱癌5637细胞增殖和迁移。

二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响

目的探讨二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响。方法选用膀胱癌5637细胞,分为对照组、二甲双胍2 mM组、5 mM组、10 mM组、20 mM组,各组分别处理膀胱癌5637细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期变化,采用平板克隆形成试验检测细胞克隆形成率,采用Western blot法检测细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平。结果与对照组比较,二甲双胍各浓度组在24、48、72 h对膀胱癌5637细胞增殖抑制率较高（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞克隆形成率较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组G1期细胞比例较高,S期细胞比例较低（P〈0.05）,二甲双胍2 mM组、5 mM组G2期细胞比例较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平较低（P〈0.05）。结论二甲双胍对膀胱癌5637细胞系HSP-70、HSP-90α及VEGF表达有明显抑制作用,能够抑制细胞增殖、克隆,促进细胞发生G1期阻滞,引起细胞凋亡,作用呈剂量依赖性。

miR-372-3p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:检测miR-372-3p在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p对膀胱癌5637和T24细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:采集2016年3月至2017年1月武汉中心医院收治的6例膀胱癌患者癌及癌旁组织(距离肿瘤边缘>5 cm),q PCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p表达。采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics或者miRNC转入膀胱癌5637和T24细胞。用q PCR和Western blotting检测转染miR-372-3p mimics和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p和ATAD2 m RNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:膀胱癌组织miR-372-3p m RNA的表达显著低于癌旁组织(0.65±0.56 vs 1.76±0.34,P<0.01)。和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞的miR-372-3p m RNA表达显著增加,ATAD2 m RNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少。结论:miR-372-3p的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标。

RNA干扰MEX3A基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制MEX3A基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用GV115载体构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,转染包装细胞293T产生慢病毒颗粒,收集并滴度测定后转染5637膀胱癌细胞,实验组转染MEX3A-shRNA慢病毒,对照组转染阴性对照慢病毒;实时定量PCR(Real-time PCR)检测MEX3A基因敲减效率;慢病毒转染3 d后,使用Celigo连续细胞计数5d检测细胞生长;慢病毒转染5d后,进行膜联蛋白V(Annexin V)染色并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建MEX3AshRNA慢病毒载体以及稳定抑制MEX3A表达的细胞株,MEX3A基因敲减效率达到74%;Celigo细胞计数检测显示,与对照组相比,实验组5637细胞的增殖速率受到显著抑制;流式细胞术检测显示,实验组发生凋亡的5637细胞显著增加。结论 MEX3A基因促进膀胱癌细胞的增殖,抑制膀胱癌细胞的凋亡。

慢病毒介导的过表达microRNA-663a对膀胱癌细胞功能学的影响

目的探讨负载microRNA-663a(miR-663a)的慢病毒上调miR-663a对膀胱癌EJ和5637细胞系功能学的影响。方法将负载过表达miR-663a的慢病毒转染人膀胱癌EJ和5637细胞系。EJ和5637细胞系各设干扰组、阴性对照组和空白对照组,转染72h后置于荧光显微镜下观察转染效率,采用实时定量PCR法检测miR-663a的表达量,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测膀胱癌细胞增殖生长情况,通过细胞划痕实验检测膀胱癌细胞迁移能力,通过Transwell小室侵袭实验检测膀胱癌细胞侵袭能力。结果 EJ和5637细胞系中,干扰组的miR-663相对表达量均显著高于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05),空白对照组的miR-663a相对表达量与阴性对照组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。EJ细胞系转染miR-663a后第4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05);5637细胞系转染miR-663a后第3、4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组细胞培养48h时的闭合率均显著低于空白对照组和阴性对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组Transwell小室滤膜下表面细胞数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。结论 miR-663a体外可显著抑制膀胱癌EJ和5637细胞系的细胞增殖、迁移和侵袭能力,为miR-663a可能成为膀胱癌的治疗新靶点提供了实验依据。

干性基因Nanog在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖与耐药的作用

目的探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用。方法采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达。应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MTT法检测细胞对化疗药物顺铂的敏感性。结果膀胱癌组织中Nanog的阳性率为50%,且其表达与组织的病理分级呈正相关,相关系数为0.989(P<0.05);Real-time PCR和Western blot结果表明感染慢病毒LV-Nanog的5637细胞株中Nanog mRNA和蛋白的表达明显高于感染慢病毒LV-Con的对照组细胞株。5637-C和5637-Nanog的克隆形成率分别为(4.6±0.9)%和(9.0±1.0)%,显示过表达Nanog的5637细胞克隆形成率上升(P<0.01)。以5、10、20、40μmol/L顺铂处理细胞72 h,对照组5637-C的存活率分别为(64.5±4.9)%、(53.1±4.6)%、(43.4±3.9)%和(21.0±2.7)%,5637-Nanog的存活率分别为(80.9±5.6)%、(68.5±4.2)%、(47.9±5.1)%和(25.2±4.2)%,在浓度为5μmol/L和10μmol/L时5637-Nanog对顺铂的敏感性降低。结论 Nanog的表达增高与膀胱癌病理分级相关,Nanog基因的表达升高能增强膀胱癌细胞的增殖能力,降低对顺铂化疗药物的敏感性。

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号途径调控膀胱癌细胞上皮间质转化及迁移

目的:探讨Krüppel样因子4(KLF4)调控膀胱癌细胞EMT及迁移的作用及其机制。方法:在膀胱癌5637和T24细胞中构建稳定过表达KLF4的实验组(LV-KLF4)和阴性对照组(LV-NC),用qPCR和WB实验验证KLF4 mRNA和蛋白的表达水平。用Transwell小室法检测LV-KLF4组、LV-NC组细胞的迁移能力变化,用WB检测EMT相关标志物上皮钙黏蛋白、神经钙黏蛋白、波形蛋白及Wnt信号通路相关蛋白的表达水平,用免疫荧光技术检测过表达KLF4后细胞内β-catenin的分布变化情况。结果:成功构建KLF4过表达的5637和T24细胞。与LV-NC组比较,LV-KLF4组细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平升高(均P<0.01),上皮钙黏蛋白的表达水平升高(P<0.01),神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平降低(均P<0.01),总β-catenin、核β-catenin、MMP9及c-Myc表达水平显著降低(均P<0.01),细胞的迁移能力显著下降(P<0.01),细胞内β-catenin蛋白荧光表达减弱。结论:过表达KLF4可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制EMT过程,从而抑制膀胱癌5637和T24细胞的迁移。

塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及机制

目的初步探讨塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及相关机制。方法将60只雄性BALB/c裸鼠随机分为3组:对照组、模型组及观察组。模型组及观察组利用注射人膀胱癌细胞系5637制备小鼠膀胱癌模型。观察组小鼠给予塞来昔布治疗,对照组及模型组小鼠给予同剂量0.9%氯化钠溶液。治疗4周后,取模型组和实验组小鼠瘤组织及对照组正常组织,检测3组小鼠组织中CD4^+、CD8^+表达量及CD4^+/CD8^+比值;利用Western blot检测COX-2、VEGF及cPLA2阳性表达;利用TUNEL法检测模型组及观察组小鼠肿瘤细胞凋亡率。结果对照组小鼠正常生长,皮下无肿瘤生成。模型组和观察组小鼠成瘤率100%。模型组和观察组小鼠的瘤体质量分别为(2.08±0.36)g和(1.18±0.21)g,与模型组相比,观察组小鼠瘤体质量显著降低(P<0.05)。观察组小鼠的肿瘤抑制率为43.33%。模型组及观察组小鼠移植瘤中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著低于对照组,CD8+水平均显著高于对照组(P<0.05)。观察组小鼠瘤组织中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平明显高于模型组,CD8+水平明显低于模型组(P<0.05)。COX-2及cPLA2蛋白在对照组小鼠组织中不表达,VEGF蛋白在3组中均有阳性表达。观察组小鼠中COX-2、VEGF及cPLA2蛋白表达水平明显低于模型组,细胞凋亡指数明显高于模型组小鼠(P<0.05)。结论塞来昔布对小鼠膀胱癌具有一定的抑制作用,其作用机制可能与提高膀胱癌小鼠免疫系统水平、减轻炎性反应、促进癌细胞凋亡有关。

隐丹参酮对人膀胱癌5637细胞增殖和凋亡的影响

目的研究隐丹参酮对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法对照组膀胱癌5637细胞用含0.1%DMSO的培养基培养,40,80,120,160μmol·L^-1隐丹参酮组膀胱癌5637细胞用0.1%DMSO配制成的40,80,120,160μmol·L^-1的隐丹参酮处理。以CCK-8检测各组细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;以蛋白质印迹(Western Blot)检测各组Bcl-2、Bax、P53、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白的表达。结果对照组和40,80,120,160μmol·L^-1隐丹参酮组72 h增殖抑制率分别为(0.00±3.76)%,(38.90±3.51)%,(76.69±3.70)%,(85.61±2.77)%,(94.88±0.38)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和20,40,80μmol·L^-1隐丹参酮组的细胞凋亡率分别为(1.83±0.31)%,(16.37±0.70)%,(25.20±1.05)%,(35.60±1.95)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和40,80μmol·L^-1隐丹参酮组的Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为1.00±0.14,2.44±0.21,2.30±0.19;cleaved Caspase-3蛋白相对表达量分别为1.00±0.12,2.05±0.23,2.23±0.19;B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白相对表达量分别为1.00±0.12,0.58±0.05,0.19±0.02,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论隐丹参酮能够抑制膀胱癌5637细胞增殖,诱导其凋亡,其发生机制可能与上调Bax、cleaved Caspase-3,下调Bcl-2有关。

miRNA-218在膀胱癌中表达及意义

目的探讨miRNA-218在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞活性与侵袭增殖能力的影响。方法采用RT-PCR法检测正常膀胱细胞与膀胱癌细胞中miRNA-218的表达情况;分别在膀胱癌5637细胞中加入miRNA-218序列模拟物(miRNA-218 mimics)与无关序列模拟物(scramble mimics)后,采用MTT法检测细胞活性、Transwell法检测细胞侵袭增殖能力。结果 miRNA-218在正常膀胱细胞中的表达明显高于低级别与高级别尿路上皮癌,差异有统计学意义(P<0.05)。与未处理的膀胱癌5637细胞比较,加入miRNA-218 mimics的膀胱癌5637细胞中,miRNA-218表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);加入scramble mimics的膀胱癌5637细胞中,miRNA-218表达差异无统计学意义(P>0.05)。加入miRNA-218mimics的膀胱癌5637细胞的活性与侵袭增殖能力明显低于未处理的膀胱癌5637细胞与加入scramble mimics的膀胱癌5637细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-218与膀胱癌的发生、侵袭转移有关,miRNA-218表达上调可抑制膀胱癌。

As2O3通过氧化应激调节膀胱癌细胞高表达Cx43蛋白造成细胞损伤

目的观察As2O3是否通过氧化应激诱导人膀胱癌细胞损伤,并讨论其可能的分子机制。方法利用As2O3刺激膀胱癌细胞,应用Calcein-AM/PI双染色和CCK-8试剂盒检测细胞损伤情况。Western blot检测As2O3作用膀胱癌细胞后Cx43蛋白表达情况,反之检测抗氧化剂处理能否逆转As2O3对Cx43表达量的影响。结果As2O3诱导人膀胱癌5637细胞损伤,Calcein-AM染色的活细胞数量下降,PI染色的死细胞数量增加。As2O3促进人膀胱癌5637细胞表面Cx43的表达;应用Cx43抑制剂Gap26可减弱As2O3导致的5637细胞的损伤作用。抗氧化剂GSH和NAC可降低As2O3引起的Cx43表达及膀胱癌细胞损伤。结论As2O3通过氧化应激诱导膀胱癌细胞Cx43高表达,造成人膀胱癌5637细胞的损伤。