水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。

siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭

目的探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响。方法设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-q PCR和Western blot检测SNCG的表达。分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力。结果与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平最高(P<0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P<0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果最明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点。

miR-128-3p过表达靶向MAPK1抑制膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-128-3p过表达对膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化影响。方法 基因预测软件TargetScan筛选出miR-128-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证;RT-PCR检测miR-128-3p和MAPK1的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ecadherin、N-cadherin、ERK1/2、c-Myc和c-fos的表达,免疫荧光检测Vimentin的表达;裸鼠皮下注射建立移植瘤模型,30 d后检测瘤重量,绘制存活曲线,检测移植瘤中Vimentin、miR-128-3p、MAPK1、ERK1/2、cMyc和c-fos的量。结果 miR-128-3p靶向抑制MAPK1表达;miR-128-3p过表达后,侵袭细胞数目、伤口愈合率降低,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。经miR-128-3p干预,裸鼠体内移植瘤重量减轻,存活率增加,miR-128-3p表达上调,MAPK1的表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。结论 过表达miR-128-3p通过靶向抑制MAPK1表达来抑制膀胱癌细胞5637的侵袭能力、迁移能力、上皮-间充质转化和ERK1/2、cMyc和c-fos通路。

二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响

目的探讨二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响。方法选用膀胱癌5637细胞,分为对照组、二甲双胍2 mM组、5 mM组、10 mM组、20 mM组,各组分别处理膀胱癌5637细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期变化,采用平板克隆形成试验检测细胞克隆形成率,采用Western blot法检测细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平。结果与对照组比较,二甲双胍各浓度组在24、48、72 h对膀胱癌5637细胞增殖抑制率较高（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞克隆形成率较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组G1期细胞比例较高,S期细胞比例较低（P〈0.05）,二甲双胍2 mM组、5 mM组G2期细胞比例较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平较低（P〈0.05）。结论二甲双胍对膀胱癌5637细胞系HSP-70、HSP-90α及VEGF表达有明显抑制作用,能够抑制细胞增殖、克隆,促进细胞发生G1期阻滞,引起细胞凋亡,作用呈剂量依赖性。

RNA干扰MEX3A基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制MEX3A基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用GV115载体构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,转染包装细胞293T产生慢病毒颗粒,收集并滴度测定后转染5637膀胱癌细胞,实验组转染MEX3A-shRNA慢病毒,对照组转染阴性对照慢病毒;实时定量PCR(Real-time PCR)检测MEX3A基因敲减效率;慢病毒转染3 d后,使用Celigo连续细胞计数5d检测细胞生长;慢病毒转染5d后,进行膜联蛋白V(Annexin V)染色并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建MEX3AshRNA慢病毒载体以及稳定抑制MEX3A表达的细胞株,MEX3A基因敲减效率达到74%;Celigo细胞计数检测显示,与对照组相比,实验组5637细胞的增殖速率受到显著抑制;流式细胞术检测显示,实验组发生凋亡的5637细胞显著增加。结论 MEX3A基因促进膀胱癌细胞的增殖,抑制膀胱癌细胞的凋亡。

塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及机制

目的初步探讨塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及相关机制。方法将60只雄性BALB/c裸鼠随机分为3组:对照组、模型组及观察组。模型组及观察组利用注射人膀胱癌细胞系5637制备小鼠膀胱癌模型。观察组小鼠给予塞来昔布治疗,对照组及模型组小鼠给予同剂量0.9%氯化钠溶液。治疗4周后,取模型组和实验组小鼠瘤组织及对照组正常组织,检测3组小鼠组织中CD4^+、CD8^+表达量及CD4^+/CD8^+比值;利用Western blot检测COX-2、VEGF及cPLA2阳性表达;利用TUNEL法检测模型组及观察组小鼠肿瘤细胞凋亡率。结果对照组小鼠正常生长,皮下无肿瘤生成。模型组和观察组小鼠成瘤率100%。模型组和观察组小鼠的瘤体质量分别为(2.08±0.36)g和(1.18±0.21)g,与模型组相比,观察组小鼠瘤体质量显著降低(P<0.05)。观察组小鼠的肿瘤抑制率为43.33%。模型组及观察组小鼠移植瘤中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著低于对照组,CD8+水平均显著高于对照组(P<0.05)。观察组小鼠瘤组织中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平明显高于模型组,CD8+水平明显低于模型组(P<0.05)。COX-2及cPLA2蛋白在对照组小鼠组织中不表达,VEGF蛋白在3组中均有阳性表达。观察组小鼠中COX-2、VEGF及cPLA2蛋白表达水平明显低于模型组,细胞凋亡指数明显高于模型组小鼠(P<0.05)。结论塞来昔布对小鼠膀胱癌具有一定的抑制作用,其作用机制可能与提高膀胱癌小鼠免疫系统水平、减轻炎性反应、促进癌细胞凋亡有关。