外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10水平与重症肺结核患者预后的相关性分析

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)Blimp1、干扰素γ(IFN-γ)、白介素10(IL-10)水平与重症肺结核患者预后的相关性。方法收集2017年8月-2019年8月本院的重症肺结核患者92例的临床资料进行回顾性分析,根据临床预后的不同将其分为存活组(n=60)与死亡组(n=32),比较两组一般资料情况,观察临床预后的相关影响因素并对其进行Logistic回归分析,采用ROC曲线分析PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10水平对重症肺结核患者预后的预测价值。结果是否合并呼吸衰竭、Blimp1、IFN-γ、IL-10水平是重症肺结核患者死亡的独立影响因素(OR=1.413、2.280、2.307、1.570,P<0.05),ROC曲线分析结果显示,Blimp1、IFN-γ、IL-10及其三者联合对重症肺结核患者临床预后均具有预测价值(P<0.05),且Blimp1、IFN-γ、IL-10三者联合的AUC大于各单一指标,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论合并呼吸衰竭、Blimp1<1.45、IFN-γ>70.74pg/mL、IL-10<69.67pg/ml是重症肺结核患者死亡的独立危险因素,Blimp1、IFN-γ、IL-10水平与重症肺结核患者临床预后密切相关,有望成为临床预测重症肺结核患者预后的新指标。

多发性骨髓瘤细胞中Blimp1、ATF4和CHOP的表达及阿司匹林对其表达的影响

目的:探究多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中Blimp1、ATF4因子和CHOP蛋白的表达及阿司匹林对其表达的影响及意义。方法:采用Ficoll分离液分离60例初诊未经治疗的多发性骨髓瘤患者和30例骨髓相对正常者骨髓液中的单个核细胞,免疫磁珠法分选CD138+的浆细胞并通过实时荧光定量PCR检测细胞中Blimp1,ATF4和CHOP mRNA表达水平。体外培养U266细胞,使用慢病毒感染细胞,采用实时荧光定量PCR检测不同分组细胞中Blimp1,ATF4和CHOP mRNA表达水平。用不同浓度的阿司匹林溶液(0、0.5、2.0和5.0mmol/L)体外分别刺激U266细胞24、48和72 h,采用CCK-8法检测阿司匹林对细胞的增殖活性的抑制作用。收集不同浓度的阿司匹林溶液刺激48 h后的U266骨髓细胞,实时荧光定量PCR检测各组细胞中Blimp1、ATF4和CHOP mRNA的表达水平。结果:与相对正常组浆细胞比较,MM患者CD138^+浆细胞中Blimp1 mRNA表达水平显著升高(8.040±1.878),ATF4和CHOP mRNA表达水平显著降低(0.735±0.089;0.837±0.062)(P<0.05)。体外培养U266细胞,相较空白对照组与阴性对照组,经LV-Blimp1-RNAi(40051-2)慢病毒表达载体感染后阳性实验组中Blimp mRNA的表达水平显著下调(0.637±0.021),ATF4和CHOP mRNA表达水平显著上调(1.452±0.027;1.721±0.038)(P<0.05)。CCK-8检测不同浓度阿司匹林刺激24、48和72 h后,U266细胞增殖活性降低,阿司匹林(0.5-5)mmol/L浓度范围内可显著抑制U266细胞的增殖活性,抑制作用随药物刺激时间的延长和刺激浓度的增加而增强(r24 h=0.986;r48 h=0.951;r72 h=0.954;r0.5=0.997;r2.5=0.997;r5.0=0.974)。不同浓度阿司匹林刺激48 h后,U266细胞中Blimp1 mRNA的表达水平随药物浓度升高而依次降低(r=-0.981),而ATF4和CHOP mRNA的表达水平随药物浓度升高而依次升高(rATF4=0.973;rCHOP=0.995)。结论:抑制多发性骨髓瘤细胞中Blimp1的表达,可促进ATF4和CHOP的表达。阿司匹林可通过下调骨髓瘤细胞中Blimp1表达和上调ATF4和CHOP的表达抑制骨髓瘤细胞的增殖活性,发挥抗肿瘤活性。

白细胞介素-21和Blimp1 mRNA在老年类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的表达及作用机制

目的探讨白细胞介素(IL)-21和Blimp1 mRNA在老年类风湿关节炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达及作用机制。方法老年类风湿关节炎患者62例,同期体检的健康老年人45名作为对照。取外周静脉血分离PBMC和血浆,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中IL-21水平,分析DAS28、抗CCP抗体与IL-21的相关性;实时荧光定量PCR检测患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达量;使用IL-21、CD40L刺激PBMCs72 h后检测Blimp1 mRNA表达量,流式细胞术检测各组CD138+细胞比例。结果类风湿关节炎患者血浆IL-21含量明显高于对照组(P<0.01)。血浆IL-21含量与类风湿关节炎患者DAS28、抗CCP抗体具有明显相关性(r=0.769、0.785,P<0.05)。类风湿关节炎患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。IL-21、CD40L体外刺激后,对照组与CD40L组Blimp1 mRNA表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05);IL-21组、IL-21+CD40L组Blimp1 mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01);IL-21+CD40L组明显高于IL-21组(P<0.05)。流式细胞术显示,IL-21+CD40L组CD138+细胞比例明显高于CD40L组和IL-21组(P<0.05)。结论 IL-21可促进老年类风湿关节炎患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达,IL-21与CD40L协同作用可通过调节Blimp1 mRNA表达促进B淋巴细胞分化并参与类风湿性关节炎的发病。

转录因子Blimp1蛋白的研究现状

Blimp1蛋白作为锌指蛋白转录抑制因子,其促进B细胞发育成浆细胞终末分化中的作用已被大家共识。最近的研究显示,此蛋白在B细胞发育中起维持作用、在T细胞发育中起诱导分化作用,及在B细胞淋巴瘤中起抑癌因子作用。在小鼠及其他动物的胚胎发育中,Blimp1蛋白在原始干细胞发育、肌肉组织的形成等方面的作用也得到了人们初步的认识。

狼疮小鼠模型中ZBTB20、Blimp1的表达变化及其意义

目的探究狼疮小鼠模型ZBTB20、Blimp1的表达变化及其意义。方法酶联免疫吸附(ELISA)法检测10只MRL/lpr、10只NZB/WF1狼疮小鼠模型和10只正常对照小鼠模型血清的抗双链-DNA抗体和免疫球蛋白(Ig)G对脾脏、胸腺和淋巴结进行免疫组化和荧光定量PCR检测,测定不同器官中ZBTB20和Blimp1的表达情况。结果试验组小鼠血清中抗双链-DNA抗体和Ig G的表达量显著高于对照组(P<0.01),试验组小鼠脾脏中ZBTB20、Blimp1mRNA相对表达量及脾脏中ZBTB20的免疫组化阳性表达率显著高于对照组(P<0.05),NZB/WF1小鼠脾脏中ZBTB20阳性表达率及ZBTB20 mRNA相对表达量均明显高MRL/lpr模型小鼠(P<0.05)。结论狼疮小鼠脾脏中Blimp1与ZBTB20高表达,可能与系统性红斑狼疮的发生、发展有关。

骨髓瘤U266细胞中Blimp1与内质网应激ATF4/CHOP信号通路的关联性研究

目的:探讨Blimp1是否通过干扰内质网应激诱导的ATF4/CHOP细胞凋亡通路在骨髓瘤中发挥抗凋亡作用,以及探讨阿司匹林是否通过抑制Blimp1表达发挥抗肿瘤作用。方法:收集初诊骨髓瘤患者(40例)和增生骨髓象者(30例)的骨髓液,流式细胞术分选表型异常及正常的浆细胞,LV-Blimp1-RNAi(40051-2)重组慢病毒下调U266细胞株的Blimp1表达,并检测ATF4和CHOP基因表达的变化。不同浓度的阿司匹林溶液体外刺激U266细胞株,CCK-8检测细胞的增殖活性,real-time PCR检测Blimp1,ATF4和CHOP表达水平。结果:表型异常的浆细胞Blimp1表达水平较正常浆细胞显著升高,ATF4和CHOP表达水平显著降低,差异均有统计学意义。在MOI=100的条件下,慢病毒表达载体感染U266细胞,荧光显微镜下观察显示转染效率>80%。阳性实验组与空白对照组和阴性对照组比较,Blimp1表达水平显著下调,ATF4和CHOP表达水平显著升高,差异均有统计学意义。CCK-8结果显示,阿司匹林可显著抑制U266骨髓瘤细胞的增殖活性,抑制作用随药物刺激时间的延长和刺激浓度的增加而增强,同时,U266细胞中Blimp1的表达水平随阿司匹林浓度升高而降低,而ATF4和CHOP的表达水平随药物浓度升高而升高。结论:U266骨髓瘤细胞中Blimp1可能通过干扰ATF4/CHOP信号通路发挥抗凋亡作用。小剂量阿司匹林可能通过抑制骨髓瘤细胞中Blimp1表达发挥抗肿瘤活性。

RNA干扰BLIMP1表达对NCI-H929细胞增殖凋亡的影响及可能机制

目的 探讨RNA干扰B淋巴细胞诱导成熟蛋白（B lymphocyte induced maturationprotein,BLIMP1）表达对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株NCI-H929生物学功能的影响及其可能机制.方法 用慢病毒干扰载体及阴性对照载体转染NCI-H929细胞后采用RT-PCR及Western blot方法观察BLIMP1 mRNA及蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖作用,Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR及Western blot检测未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）信号通路中X盒结合蛋白1（X-box binding protein 1,XBP1）、肌醇必需酶（inositol-requiring enzyme,IRE）1α及凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）的变化.结果 BLIMP1 shRNA转染NCI-H929细胞后,BLIMP1 mRNA、蛋白表达均下调（P〈0.05）;shRNA/BLIMP1组24、48及72 h细胞增殖率低于转染空载体（shRNA/con）组和对照组（P〈0.05）,shRNA/BLIMP1组细胞凋亡率〔（10.87±1.79）%〕高于shRNA/con组〔（5.57±0.87）%〕和对照组〔（4.90±0.57）%〕（P〈0.01）;凋亡蛋白CHOP表达上调,XBP1、IRE1α表达下调.结论 沉默BLIMP1可以下调XBP1的表达而抑制UPR反应,发挥其抑制NCI-H929细胞增殖及促进凋亡作用.

S100A2、Blimp1在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中的表达水平及意义

目的研究S100钙结合蛋白(S100A2)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(Blimp1)在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNCS)中的表达水平及意义。方法选取2018年3月至2020年5月于河南省中医院治疗的MM患者82例作为观察组(采用VAD治疗方案),同时选取同期贫血患者(常规贫血治疗)35例作为对照组。分别采用酶联免疫吸附法与反转录聚合酶链式反应法检测MM患者BMMNC中SS100A2、Blimp1的水平。观察比较两组一般资料及S100A2、Blimp1表达水平;采用Pearson相关性检验分析MM患者Blimp1、S100A2表达水平的相关性;建立受试者工作特征(ROC)曲线分析MM发生的预测价值。结果观察组S100A2表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Blimp1表达水平显著高于对照,组差异有统计学意义(P<0.05)。S100A2、Blimp1表达水平均为MM发生的独立危险因素(P<0.05)。S100A2与Blimp1呈显著负相关(P<0.05)。S100A2、Blimp1及联合指标预测MM发生的曲线下面积(AUC)分别为0.881、0.836、0.945,联合指标预测价值更高,敏感度和特异度分别为97.1%与78.0%。结论S100A2、Blimp1表达水平均可作为MM发生的独立危险因素,且S100A2、Blimp1表达水平均可作为MM发生的预测因子,其中联合指标预测价值更高。

基于Blimp1/Bcl6通路探讨骨痛灵联合唑来膦酸治疗肺癌骨转移的实验研究

目的观察骨痛灵方对肺癌骨转移疼痛模型小鼠Blimp1/Bcl6通路的影响。方法 85只C57 BL/6小鼠随机选取17只小鼠,注射PBS溶液作为假手术组;其余68只小鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射Lewis肺癌细胞建立骨转移疼痛模型,随机分为模型组、中药组、西药组、中西药组,每组17只。中药组小鼠以骨痛灵方煎剂灌胃,西药组予以唑来膦酸腹腔注射,中西药组则两药联合运用,治疗3周。采用TRAP特殊染色法检测小鼠胫骨的破骨细胞,以RT-PCR和Western blot法检测B细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)、B细胞淋巴瘤蛋白6(Bcl6)和组织蛋白酶K(Ctsk) mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,中药组、西药组和中西药组TRAP阳性细胞数量均明显减少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达均降低,Bcl6 mRNA和蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义(P<0.05);在3个治疗组中,中西药组阳性细胞数量最少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达最低,Bcl6 mRNA和蛋白表达最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨痛灵方通过抑制Blimp1/Bcl6通路,抑制破骨细胞的活化,从而缓解肺癌骨转移疼痛。

Blimp1基因突变影响其编码蛋白转录抑制功能的体外研究

目的:探讨Blimp1基因突变在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)发病中的作用。方法:应用基因测序方法检测1例DLBCL患者Blimp1基因的突变情况;用PCR扩增其Blimp1全长编码基因,并通过定点突变获得野生型Blimp1的全长编码基因。分别将野生型、突变型Blimp1的全长编码基因亚克隆至含有Flag标签的Flag-CMV4真核表达载体中,将重组质粒分别命名为Flag-Blimp1-wt和Flag-Blimp1-mut;采用PCR扩增获得人CIITA启动子,并将扩增片段插入PGL3-Basic荧光报告基因载体中,所有重组质粒均通过酶切鉴定并测序验证序列正确;将Flag-Blimp1-wt/mut分别与PGL3-CIITA-promoter共转染293T细胞,用荧光素酶报告基因系统检测报告基因载体的活性及Blimp1基因对其表达的调控,采用蛋白印迹法检测融合蛋白Flag-Blimp1-wt与Flag-Blimp1-mut的蛋白表达差异。结果:成功构建野生型、突变型Flag-Blimp1融合蛋白表达载体及PGL3-CIITA-promoter报告基因载体;经荧光素酶报告基因检测系统证实,构建的报告基因载体具有启动子活性,野生型Blimp1蛋白对其表达具有抑制作用,且该抑制作用与Blimp1的转染剂量呈正相关,而突变型Blimp1对其抑制功能明显减弱;蛋白印迹检测结果显示,突变型Blimp1蛋白明显低于野生型。结论:该例患者中Blimp1的突变影响了其转录抑制功能,可能是由基因突变导致Blimp1蛋白表达量的减少所引起。

Blimp1与胚胎发育

Blimp1（一种甲基转移酶）是淋巴液中B-细胞分化的“总调节因子”，而B-细胞分化是成人免疫系统的重要组成部分。

小鼠iPS细胞具备诱导性原始生殖细胞分化潜能的研究

目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞IP14D-1是否具备诱导性原始生殖细胞(induced primordial germcells,iPGCs)分化潜能,以及特异基因表达变化及可能机制。方法:未分化IP14D-1培养扩增,分化形成诱导性拟胚体(induced embryoid bodies,iEBs)。RT-PCR和免疫荧光分别检测4、7、9 d的iEBs中Lin28、Blimp1、Stra8和Mvh的表达变化和蛋白定位情况。结果:未分化IP14D-1同小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)相同,Lin28表达较弱,Blimp1表达相对较强,Mvh和Stra8也在这两种细胞及其相应iEBs和EBs中表达,但均无明显差别。IP14D-1分化形成的iEBs从4 d生长到7 d时,Lin28表达逐渐增强,到9 d时表现为下降,Blimp1表达则随着iEB生长时间延长而逐渐降低。结论:建立了IP14D-1和相应拟胚体(iEBs)的完善、稳定的培养及分化体系;未分化IP14D-1与mESCs在Lin28、Blimp1、Mvh和Stra8表达方面无明显差别;iEB和EBs的Mvh和Stra8表达也无明显差别。IP14D-1及iEBs具有iPGCs分化潜能,且可能是7 d的iEBs内iPGCs分化数量较多,之后进入iPGCs分化的Lin28低表达时期。

CD99调控对H/RS细胞分化的影响

目的探究CD99基因调控cHL细胞株L428的分化。方法形态观察、免疫细胞化学和流式细胞检测上调CD99基因对L428细胞形态、免疫表型的影响,实时荧光定量RT-PCR、Western blot和免疫荧光共聚焦显微镜方法检测PRDM1的表达。结果 L428细胞过表达CD99后形态学观察显示细胞体积变小,免疫组化和流式检测显示CD15和CD30表达基本消失,CD79a、CD19和CD38表达增强,CD138无明显变化,PRDM1在mRNA和蛋白水平出现明显表达。结论 L428细胞过表达CD99后形态发生改变,在恢复了B细胞表型的基础上又进一步打开了向浆细胞分化的开关,诱导H/RS细胞向终末B细胞方向分化。

Blimpl—BCMA调控浆细胞功能在系统性红斑狼疮发病中的意义

目的探讨Blimp1在MRL／lpr狼疮鼠中的表达水平，为靶向浆细胞治疗SLE提供思路。方法用EMSA和CHIP证实Blimp1对B细胞成熟抗原（BCMA）的调控作用，并用实时定量PCR检测MRL／lpr狼疮鼠与正常鼠脾脏和淋巴结中Blimp1mRNA的表达差异。结果Blimp1能与BCMA基因启动子相结合。狼疮鼠组脾脏Blimp1mRNA的相对表达水平高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（Z=2．609，P〈0．01），狼疮鼠组淋巴结中Blimp1的相对表达水平也高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（Z=3．402，P〈0．01），差异有统计学意义。结论BCMA可能是Blimp1的靶基因，Blimp1可直接调控BCMA表达，在维持浆细胞存活及抗体分泌中发挥作用。

过敏性紫癜患儿急性期Tfh细胞改变及意义初探

探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)在儿童过敏性紫癜中的数量变化及其可能机制。过敏性紫癜(HSP)急性期患儿20例,采用流式细胞术检测外周血CD4+CXCR5+ICOS+T细胞(Tfh)的比例,采用荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测转录因子Bcl-6及其拮抗因子Blimp-1的mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测IL-21、IL-4血浆浓度。HSP急性期患儿Tfh细胞比例明显高于正常对照组(2.9±1.0%vs 1.8±0.72%,P<0.05);Tfh细胞正性转录调节因子Bcl-6mRNA表达较正常对照组明显增高(P<0.05),负性调节因子Blimp-1mRNA表达降低(P<0.05);Tfh细胞相关细胞因子IL-21血浓度明显高于正常对照组(P<0.05),抑制Blimp-1表达的IL-4血浆浓度明显高于正常对照组(P<0.05)。Tfh细胞过度活化可能参与HSP免疫发病机制,Bcl-6/Blimp-1表达失衡,IL-21、IL-4细胞因子微环境改变可能与Tfh细胞异常活化有关。