血清学检测和基因分型在ABO疑难血型鉴定中的性能评价

目的分析血清学检测和基因分型在ABO疑难血型鉴定中的应用。方法对106例ABO疑难血型实施血清学检测(吸收放散试验)等,同时对其实施基因分型检测(荧光定量PCR试验),以基因测序结果为金标准,评估血清学检测和基因分型所得结果与基因测序一致性,比较两种检查方式灵敏度、特异度。结果以基因测序为金标准,血清学检测所得结果一致性为中度,基因分型检测所得结果一致性很好。通过比较血清学检测和基因分型灵敏度、特异度可知,两种检查方式所得特异度、灵敏度差异有统计学意义,基因分型灵敏度、特异度更高(P<0.05)。结论基因分型检测和血清学检测有各自的优缺点,但总体上来说,基因分型检测具有更高的准确性和可靠性,更快速、高效。

芜湖地区初筛RhD阴性献血人群RHD基因分型特征

目的:了解芜湖地区献血者初筛RhD^(-)汉族人群的RHD基因分型的分子机制及分布特征。方法:收集2021年8月-2022年8月芜湖市中心血站无偿献血人群初筛RhD^(-)样本共210例,对样本的RHD基因第1、10号外显子进行PCR扩增,确定样本是否存在RHD基因。对含有D基因的82例样本RHD基因1-10号外显子进行PCR扩增及合子型分析,对55例含全部RHD外显子样本进行Sanger测序以确定基因型。结果:在210例RhD^(-)标本中,128例(60.38%)为RHD基因缺失;27例存在部分RHD外显子,包括2例RHD*DVI.3/RHD*01N.01,24例RHD*01N.04/RHD*01N.01和1例RHD-CE(2-10)/RHD*01N.01;55例含有全部RHD外显子,包括4例RHD*01/RHD*01N.01,6例RHD*15/RHD*01N.01,1例RHD*01 W.72/RHD*01N.01,1例RHD*15/RHD*01EL.01,39例RHD*01EL.01/RHD*01N.01,余下4例样本根据合子型分析确定不存在RHD基因缺失、测序显示存在1227G>A突变。结论:芜湖地区献血人群RhD^(-)D基因的分子机制存在多态性,其中RHD*01EL.01和RHD*15为本地区主要D变异型,本研究结果为本地区RhD血型鉴定和临床输血提供理论基础。

二黄祛脂颗粒联合水飞蓟宾胶囊对非酒精性脂肪肝患者脂肪肝指数、炎症因子及自噬相关基因水平的影响

【目的】探讨二黄祛脂颗粒联合水飞蓟宾胶囊对非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者脂肪肝指数、炎症因子及自噬相关基因水平的影响。【方法】将126例痰瘀互结型NAFLD患者随机分为对照组和观察组,每组各63例。对照组给予水飞蓟宾胶囊口服治疗,观察组在对照组的基础上给予二黄祛脂颗粒口服治疗,疗程为3个月。观察2组患者治疗前后脂肪肝指数、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、肝功能及血脂指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、自噬相关基因[自噬相关基因7(ATG7)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin 1)]水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和安全性。【结果】(1)疗效方面,治疗3个月后,观察组的总有效率为90.48%(57/63),对照组为71.43%(45/63),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)脂肪肝指数方面,治疗后,2组患者的脂肪肝指数均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对脂肪肝指数的降低幅度明显优于对照组(P<0.01)。(3)炎症因子方面,治疗后,2组患者血清IL-6、TNF-α水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对血清IL-6、TNF-α水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(4)肝功能方面,治疗后,2组患者血清ALT、AST、GGT水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对血清ALT、AST、GGT水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(5)血脂方面,治疗后,2组患者血清TG、TC、LDL-C水平均较治疗前明显降低(P<0.05),血清HDL-C水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对血清TG、TC、LDL-C水平的降低幅度及对血清HDL-C水平的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(6)自噬相关基因方面,治疗后,2组患者的血清ATG7、Beclin 1水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对血清ATG7、Beclin 1水平的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(7)安全性方面,用药过程中2组患者均未见肝、肾功能损害或严重不良反应。【结论】二黄祛脂颗粒联合水飞蓟宾胶囊治疗痰瘀互结型NAFLD患者疗效确切,有助于缓解脂肪肝症状,降低炎症因子水平,改善肝功能及血脂水平,调节自噬相关基因表达。

新疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型抗原及基因频率调查

目的:通过调查新疆地区Kell血型系统K抗原、Rh血型系统D抗原表型及基因频率,了解新疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型分布情况。方法:收集2019年1月1日-2019年12月31日在新疆地区18家医疗机构体检及就诊符合入选标准的样本12 840例,进行Kell血型系统K抗原及Rh血型系统D抗原鉴定,并收集相关资料对不同地区、性别、民族间K及D血型分布进行调查统计分析。结果:样本中K阳性占比1.39%,南疆地区占比最高为1.91%,北疆地区最低为1.03%(P<0.01);Rh(D)-占比2.75%,基因频率为16.64%,其中南疆地区Rh(D)-样本占比相对较高,为4.03%,基因频率为20.10%;东疆地区次之,北疆地区最低(P<0.01)。维吾尔族K抗原频率最高,达到2.16%,柯尔克孜族为1.54%,D/d抗原分布趋势与K抗原相似。女性中哈萨克族K+频率略高于蒙古族;维吾尔族女性K+占比最高为2.38%且高于维吾尔族男性的1.86%,哈萨克族女性d表型频率为3.15%,高于柯尔克孜族的2.89%(P<0.01)。结论:新疆南北疆及东疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型分布有各自的特点且存在差异,不同民族及性别人群间血型分布差异明显,今后可纳入k抗原检测,进一步完善本地区Kell血型系统分布情况调研。

高效价抗-D抗体导致新生儿RhD抗原遮蔽的处理方法及输血策略

目的分析1例RhD阴性母亲产生高效价免疫球蛋白G(IgG)抗-D抗体致新生儿RhD抗原遮蔽的血清学特点,讨论溶血病患儿的救治及输血对策。方法采用盐水法、微柱凝胶卡法、热放散及酸放散试验和基因测序等方法检测患儿血型;对患儿血液样本进行溶血病三项试验;采用试管法对母亲和患儿进行抗体鉴定和抗体效价检测;采用IgG分型试剂鉴定致病抗体IgG类型。结果患儿直接抗球蛋白试验阳性,血型初次鉴定为O、dccEe,采用酸放散试剂处理红细胞后与抗-D试剂发生凝集。患儿RhD基因检测结果为RhD^(+)/RhD^(-)杂合型(阳性),确诊母亲和患儿的血型分别为O、dccee和O、DccEe。母亲及患儿血清中均存在IgG1和IgG3抗-D抗体,抗体效价均高达2048。患儿于24 h内及时接受换血治疗,病情得到有效控制。结论高效价的IgG抗-D抗体能完全遮蔽新生儿D抗原,可采用酸放散试剂处理红细胞鉴定抗原,通过血型基因检测进行验证,避免误判血型。因此对RhD阴性孕产妇早期进行血型鉴定,纳入高危妊娠管理,并提高实验室的检测水平,对可能发生新生儿溶血病胎儿的救治具有非常重要的临床意义。

B(A)血型的鉴定及其输血策略分析

目的探讨B(A)血型患者的血清学及其基因型鉴定分析方法。方法应用试管法(血清学)对3名患者的临床疑难ABO血型标本做ABO血型正反定型;应用实时荧光定量PCR技术对3例标本做ABO血型基因分型,并采用基因测序方法对其ABO基因1-7外显子测序确定基因型。结果3名患者血清学ABO血型正反定型均表现为“B(A)血型”的格局;3例ABO基因分型均为B/O2,测序均在第7外显子B等位基因基础上发生c.640A>G突变,符合ABO*BA.04基因型特点。结论对于ABO血型亚型等疑难血型的鉴定,采用血清学和基因检测相结合的方法可以准确鉴定血型,保证临床用血安全。

COL1A1、MMP3基因多态性与中国青年男性力量素质相关血液指标的关联研究

目的探讨α-I型胶原(α-type I collagen,COL1A1)基因rs1107946位点、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases 3,MMP3)基因rs650108位点多态性与长期坚持运动的青年男性体能素质的关联性。方法选取374名青年男性,测量体成分,测试体能,同时,采集血样检测血常规、血液生化指标及基因位点多态性。结果COL1A1基因rs1107946位点不同遗传模式CC基因型跪推实心球成绩高于AC基因型(P=0.037)、AA基因型(P=0.028)及AC+AA基因型(P=0.013);CC基因型俯卧撑成绩高于AC基因型(P=0.046)、AC+AA基因型(P=0.034);CC基因型立定跳远成绩高于AA基因型(P=0.006),C等位基因型(AC+CC)立定跳远成绩显著高于AA基因型(P=0.011)。MMP3基因rs650108位点不同遗传模式AA基因型跪推实心球成绩高于GA基因型(P=0.023)及GA+GG基因型(P=0.024)。COL1A1基因rs1107946位点CC基因型较AA基因型和AC基因型血清TBil和DBil高水平(P=0.040,P=0.041)、ALP低水平(P=0.018)。MMP3基因rs650108位点AA基因型较GG基因型和GA基因型HCT高水平(P=0.045),PCT、HDL-C低水平(P=0.011,P=0.012)。结论COL1A1 rs1107946、MMP3 rs650108基因多态性可作为力量素质的分子遗传标记,COL1A1 rs1107946 CC基因型和MMP3 rs650108 AA基因型是力量素质的优势基因型。

疑难血型标本的基因测序分析

目的采用基因测序方法鉴定8例ABO、Rh血型不符的疑难血型。方法收集本院2019年12月至2023年4月血型正反定型不符的8例血液标本,采用基因测序方法检测基因型。结果基因测序结果显示:8例样本中1例为A102/O01、1例为Bw12/O01、1例为B(A)、1例为O01/O02、1例为Bw19/O01、2例为类孟买、1例为weak D type 25/RHD*DEL1。其中有6例标本血型基因测序结果和血清学表型一致,2例标本的血清学表型和基因测序结果均表现出一定的差异。结论基因测序技术可以很好地解决输血患者抗原或抗体减弱以及亚型所致的ABO血型正反不符的血型鉴定,并鉴定了1个罕见的RhD变异型,可提升输血安全性,保证临床用血安全。

中国拉祜族p血型个体血清学和分子生物学研究及其家系分析

目的了解拉祜族p血型个体及其家系成员的血清学及分子生物学遗传特性。方法采集之前已发现拉祜族6例p血型的家系成员血液样本,用试管法进行ABO、Rh、P1PK血型系统血型血清学鉴定、PCR测序分析A 4GALT基因编码区序列。结果6例p血型来自5个家庭中共计39例家系成员中检出12例p血型个体(含6例先证者),其中B型7例、O型2例、A型1例、AB型1例、1例未检ABO血型。11例p血型个体血浆中均检出抗-PP1Pk抗体,而1例仅采集指血,未检测意外抗体。对其中23例采集静脉血的家系成员进行A4GALT基因编码区序列测序,11例测序结果显示A4GALT第3外显子c.559G>C纯合突变(含6例已发现先证者),为p血型,5例为c.559G/C突变杂合子,7例测序与参考系列一致。结论A 4GALT基因c.559G>C突变可能是拉祜族人群形成p血型的分子基础。

秀山县3个主要民族无偿献血者ABO、RhD血型的调查

目的 为了解秀山县3个主要民族无偿献血者的ABO血型、RhD血型和基因频率,更好的制定无偿献血计划。方法 选取2012年-2019年秀山县汉族、土家族、苗族无偿献血者,剔除不符合要求的数据,利用Bernstein校正公式和赵桐茂方法计算p、q、r基因频率,|t|≤2时,P≥0.5作为无显著差异界限,检验Hardyweinberg平衡度;一般资料采用微软EXCEL 2003函数计算,组间比较采用SPSS 24.0卡方检验,P<0.05有统计学意义。结果 本次共调查9664人,汉族、土家族、苗族3个主要民族的血型表现型为O型>A型>B型>AB型,基因频率r>p>q,民族指数均>1,|t|<2,P>0.5,均满足Hardy-weinberg平衡;湘西州汉族、黔江土家族与秀山汉族、土家族比较无统计学意义(P>0.05),太原汉族、湘西州土家族、柳州苗族、湘西州苗族与秀山3个民族比较比较有统计学意义(P<0.05);RhD阴性率0.16%,不同RhD血型的ABO血型比较无统计学意义(P<0.05)。结论 秀山县汉族、土家族、苗族人群ABO血型分布和基因频率保持稳定,RhD阴性频率偏低。

河北汉族人群Duffy血型系统抗原频率调查

目的了解河北汉族人群Duffy血型系统抗原分布状况,建立河北汉族人群稀有血型抗原初步资料,解决抗-Fya等稀有血型抗体患者的用血问题。方法随机抽取无血缘关系的河北汉族健康人群血样5mL(EDTA抗凝),采用抗球蛋白检测卡法,按照说明书进行献血者Fya、Fyb抗原检测,对于检测出的Fya阴性标本,采用SSP法进一步确认抗原基因状况。结果在1 901份献血者标本中Fya+b+233例(12.26%),Fya+b-1 663例(87.48%),Fya-b+5例(0.26%),未检测出Fya-b-标本。Fya基因频率为0.936 1,Fyb基因频率为0.063 9。经Hardy-Weinberg平衡检验,观察值与预期值之间差异无统计学意义(χ2=1.123 2,P>0.05),河北汉族人群中Duffy血型系统抗原分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论在河北汉族人群中Fya阴性表型分布很低,一旦患者产生抗-Fya,通过随机筛查试验找到相合的供者非常困难,严重时会危及到患者的生命,因此,实验室有必要建立Fya阴性献血者资料库,以便及时为患者提供合适的血液成分。

A抗原减弱表型的基因分析

目的:研究A抗原减弱的分子遗传学背景。方法:用血清学的方法筛选出2015年1月至11月A抗原减弱的样本6例,对其ABO基因的第6、7外显子进行测序分析。结果:6例中基因型为A102/O01有2例,A102/O02有1例,A102/B101有2例,1例样本发现新的等位基因。结论:由于ABO基因的多态性,除了常见的第6、7外显子上的基因突变引起抗原减弱外,第6、7外显子以外的基因变异或转录结构以及调控区域的异常都有可能导致A抗原减弱。

珞巴族ABO血型系统遗传多态性分析

目的 研究中国珞巴族人群ABO血型系统遗传多态性及与其他 19个族群间的遗传关系。方法 采用玻片法检测并分析了西藏地区珞巴族 12 1人份ABO血型分布 ,应用网络生物信息资源 ,收集西藏昌都、林芝、拉萨、山南、日喀则、那曲藏族 ,青海贵南、黄南、西宁藏族 ,甘肃藏族 ,云南丽江藏族 ,内蒙古蒙古族 ,宁夏回族 ,陕西、河南、山东、福建、广东汉族 ,广西壮族等 19个族群的相应资料 ,计算他们间的遗传距离 ,并进行聚类分析。结果 珞巴族ABO血型系统中 ,有较高的基因频率r(0 .7370 ) ,p为 0 .1911,q为 0 .0 973。遗传距离分析显示 ,珞巴族与南方壮族距离较近(0 .0 5 79) ,其次为云南丽江藏族 (0 .0 6 92 )和西藏林芝藏族 (0 .0 84 4 )及西藏、青海其他地区藏族 ,最后与中国其他主要民族汉、蒙、回族聚在一起 ,聚类分析与遗传距离分析结果基本一致。

ABO血型基因编码区全长序列的研究及初步应用

【目的】研究ABO血型基因编码区全长序列及对疑难标本的初步应用。【方法】对6份已知ABO血型的血样进行DNA抽提,针对ABO基因启动子、所有外显子、部分内含子序列设计、合成一系列特异性引物,探索它的最佳PCR反应体系和扩增条件,获得的PCR产物直接进行序列测定。用建立的方法对2份ABO疑难血型的标本进行全长序列测定。【结果】得到ABO基因中A101、B、O01、O02、A102常见等位基因的ABO基因编码区全长核苷酸序列。疑难标本中:正定型为O型、反定型为B型的ABO基因定为O02/O21型;表型为O型的基因定为A102/O01型。【结论】建立起中国人群的ABO基因编码区全长标准序列信息库,并可运用于ABO疑难血型基因的研究中。

cisAB03亚型分子生物学鉴定及分子对接

目的:通过1例罕见的cisAB03亚型的研究,探讨关键氨基酸突变后糖基转移酶影响糖供体和受体结合的分子机制。方法:采用血清学方法鉴定血型表型,直接测序方法鉴定基因型,转移酶同源建模后进行UDP和H糖链的对接,分析突变后糖基转移酶结构差异对底物结合的影响,最后利用细胞体外表达实验间接验证突变后糖基转移酶合成产物的效率。结果:血清学鉴定表型为cisAB,基因测序显示患者基因型是ABO*cisAB.03/O.01.01,同源建模显示与野生型相比,cisAB03糖基转移酶p.Pro234Ser突变导致Met266结构朝向改变,分子对接后表面显示呈现催化活性中心结合凹槽结构改变,更有利于UDP-GalNAc加成到H抗原。细胞体外表达实验证实cisAB03合成的A抗原强于B抗原。结论:p.Pro234Ser突变是形成cisAB03糖基转移酶双功能活性的关键位点。

基因测序鉴定CisAB/B血型2例

目的探讨ABO血型鉴定中正反定型不一致时,采用基因测序方法鉴定血型的意义。方法对本血液中心在ABO血型鉴定时发现的无偿献血者正反定型结果不一致样本,采用试管法进行血型血清学分析和亚型鉴定;对血清学检测为ABO亚型的样本,再采用PCR-SBT方法对6、7外显子和部分内含子进行基因序列分析。结果 2例血清学鉴定为A亚型B的样本,经ABO基因测序确定基因型为Cis AB/B,分别为Cis AB01/B101和Cis AB05/B101。结论由于B基因的作用,Cis AB血型经血清学方法难以被发现并确定,基因测序有助于更准确地鉴定血型。

门巴族ABO血型系统基因频率的检测与分析

本文研究的是中国门巴族人群ABO血型系统遗传多态性与其他17个族群间的遗传关系.采用玻片法检测并分析了西藏100名门巴族人群的ABO血型分布;应用网络生物信息资源,收集了西藏昌都、林芝、拉萨、山南、日喀则、那曲藏族,青海贵南、黄南、西宁藏族,甘肃藏族,云南丽江藏族,内蒙古蒙古族,宁夏回族,陕西、河南、山东汉族等17个族群的相应资料,计算了他们间的遗传距离,并进行了聚类分析.结果表明西藏门巴族ABO血型系统的表型频率为O>B>A>AB(-A=0.2128,-B=0.2523,-O=0.4681,AB=0.0638),基因频率r>q>p(r=0.6770,q=0.1742,p=0.1488),符合我国ABO血型系统分布规律;遗传距离分析显示,门巴族与珞巴族距离较近(0.0851),其次为云南丽江藏族(0.0943)和西藏、青海其他地区藏族,最后是中国其他少数民族的汉、回、蒙古族.聚类分析与遗传距离分析结果基本一致.说明门巴族在遗传上与藏族的关系近于其他少数民族.

温州地区人群Duffy血型基因频率分布及供受者Duffy血型不相合情况调查

目的 了解本地人群Duffy血型基因频率的分布以及输血供受者Duffy血型不相合的情况。方法 2018年3月—2018年5月随机收集416(人)份温州献血者的血液标本(5 mL/份,EDTA-K2抗凝),采用间接抗球蛋白法测定其Duffy血型抗原;计算Duffy基因型及基因频率,根据基因频率计算本地供受(血)人群Duffy抗原不相合的机率。结果 本组温州地区献血人群的FYA和FYB基因频率分别为0.942 3和0.057 7,观察值与期望值符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律并与国内其他地区献血者人群相近(P>0.05),Duffy血型Fya和Fyb抗原供受者不相合机率分别为0.003 3和0.099 6,总不相合几率0.102 9。结论 温州地区献血人群Duffy血型基因频率符合中国汉族人群该基因频率的分布特征;供受者Fya和Fyb抗原不配合机率为建立本地献血者Duffy血型资料库、进一步保障临床用血安全提供依据。

从ABO血型系统遗传多态性探讨西藏各民族的群体遗传学关系

目的研究西藏藏族、珞巴族和门巴族人群ABO血型系统遗传多态性及其与我国其他民族间的遗传关系。方法采用玻片法检测并分析了西藏藏族1183人份、汉族938人份、珞巴族120人份和门巴族100人份ABO血型分布,应用网络生物信息资源,收集我国新疆维吾尔族、内蒙古蒙古族,宁夏回族等3个族群的相应资料,计算他们间的遗传距离,并进行聚类分析。结果西藏藏族ABO血型系统的表型频率为O>B>A>AB(A=0.171 6、B=0.379 5、O=0.358 5、AB=0.090 4),基因频率r>q>p(r=0.593 4、q=0.268 6、p=0.138 0);门巴族ABO血型系统的表型频率为O>B>A>AB(A=0.212 8、B=0.252 3、O=0.468 1、AB=0.063 8),基因频率r>q>p(r=0.677 0、q=0.174 2、p=0.148 8);珞巴族ABO血型系统中,有较高的基因频率(r=0.737 0、q=0.097 3、p=0.191 1);汉族ABO血型系统的表型频率为O>B>A>AB(A=0.280 2、B=0.291 2、O=0.324 2、AB=0.104 4),基因频率r>q>p(r=0.564 5、q=0.221 3、p=0.214 2),符合我国ABO血型系统分布规律;遗传距离分析显示,藏族、门巴族和珞巴族距离较近,其次为蒙古族、汉族,最后是新疆维吾尔族和宁夏回族。聚类分析与遗传距离分析结果基本一致。结论西藏各民族在遗传上相互关系近于其他主要民族。

部分恶性血液病患者红细胞A、H抗原表达与基因启动子CpG岛甲基化研究

目的研究急性髓系细胞性白血病(AML)与骨髓增生异常综合征(MDS)患者红细胞A、H抗原表达与基因启动子CpG岛甲基化的相关性。方法应用流式细胞技术检测红细胞表面A、H抗原表达,并应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)测定ABO基因启动子CpG岛甲基化。结果 AML与MDS组红细胞表面A抗原阳性表达率和A抗原平均荧光强度分别与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而红细胞表面H抗原阳性表达率和H抗原平均荧光强度分别与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AML组与MDS组患者红细胞表面A抗原阳性表达率、A抗原平均荧光强度、H抗原阳性表达率和H抗原平均荧光强度分别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。25例AML与MDS患者中发生ABO基因启动子CpG岛甲基化为14例(占56.0%);16例A抗原阳性表达率或(和)A抗原平均荧光强度降低患者中,有8例(占50.0%)出现ABO基因启动子CpG岛甲基化(AML 4例,MDS 4例),8例未出现ABO基因启动子CpG岛甲基化(AML 4例,MDS4例);而9例未见A抗原阳性表达率或(和)A抗原平均荧光强度降低患者中,有6例(占66.7%)出现ABO基因启动子CpG岛甲基化(AML3例,MDS 3例)。结论 AML与MDS由于红细胞表面H抗原转变为A抗原的过程阻断,导致A血型抗原表达降低,且部分患者出现ABO基因启动子CpG岛甲基化。