HS-SPME与GC-MS联用分析不同季节艾纳香叶香气成分

采用顶空固相微萃取法和气质联用技术分别对秋季和冬季艾纳香叶香气成分进行分析。结果表明:秋季样品香气成分为49种(91.37%),其中萜类化合物为43种(81%);冬季样品香气成分为47种(95.87%),其中萜类化合物为37种(88.48%)。秋季样品相对含量前5位的依次为(E)-石竹烯(24.88%),L-龙脑(17.86%),(+)-γ-古芸烯(12.27%),花椒素(7.83%),(E)-罗勒烯(3.6%)。冬季样品相对含量前五位的依次为L-龙脑(47.3%),樟脑(13.64%),(E)-石竹烯(7.41%),(+)-γ-古芸烯(3.9%),β-石竹烯环氧化物(2.75%)。两种样品相同的香气成分有31种,因此两样品的主体香气相似,即樟脑香、胡椒香和药香,但两样品中相同组分相对含量差异很大。此外秋季样品还含有18种独有组分,冬季样品含有16种,因此不同季节生产的艾纳香精油香气不同,各有特色。

不同方法提取艾纳香叶挥发性成分的气相色谱-质谱分析

采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析水蒸汽蒸馏法(SD)、同时蒸馏萃取法(SDE)和顶空固相微萃取法(HS-SPME)3种方法提取的艾纳香叶挥发性成分。结果表明:3种方法提取艾纳香叶挥发性成分中主要是醇类和烯类化合物,其中萜类物质占较大比例。3种方法的提取物中分别鉴定出化合物50种(SD)、24种(SDE)和49种(HS-SPME)。水蒸汽蒸馏法和同时蒸馏萃取法提取的油状挥发物中主要成分相似,水蒸汽蒸馏法提取油状挥发物与顶空固相微萃取法提取挥发性成分的种类和相对含量相似,同时蒸馏萃取法提取油状挥发物中低沸点化合物较少。

镁素处理对艾纳香药材生物量和营养元素积累的影响

以一年生艾纳香种子苗为实验材料,用七水合硫酸镁提供镁素,测定生长期艾纳香生长指标和生物量,采用凯氏定氮仪测定艾纳香药材氮含量,采用钼锑抗比色法测定磷含量,以及采用原子吸收光谱法测定艾纳香药材钾、钙、镁、铁、锰、铜和锌含量,以研究镁素对艾纳香药材生物量和营养元素积累的影响。结果表明:镁素显著增加了艾纳香叶长、叶宽、株高和地径等生长指标,显著增加了艾纳香药材叶片、茎和叶茎总生物量,对叶茎生物量比影响不显著;镁素对艾纳香叶片中氮含量影响不显著,钙和铁含量显著降低,1.5 mg/mL镁素处理组磷、钾和镁含量显著高于其他处理组,15 mg/mL镁素处理组锰、锌和铜含量最低,显著低于其他处理组。在艾纳香生长期施加镁素可以促进艾纳香生长,提高药材生物量,显著促进磷、钾和镁积累,抑制钙和铁的吸收,对氮影响不显著,15 mg/mL镁素处理组锰、锌和铜含量最低。

贵州罗甸与海南儋州的艾纳香种质叶片的显微结构比较

为对海南和贵州两地的艾纳香栽培、定向选育和药材生产提供理论参考,对两地的艾纳香叶片进行石蜡切片显微观测。结果表明:艾纳香叶片为异面叶,栅栏组织、海绵组织分化明显;两种质的艾纳香叶片均为上表皮显著厚于下表皮,海南儋州的艾纳香叶片厚度、上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度和栅海比均显著高于贵州罗甸的艾纳香种质;两种质艾纳香叶片细胞结构紧密度和细胞结构疏松度均有显著性差异,儋州的艾纳香叶片细胞结构紧密度较大。海南儋州的艾纳香叶片对气温高、日照强的气候具有更好的适应性。

艾纳香叶片显微结构及其亲缘关系分析

为艾纳香的品种鉴定提供理论支持,以贵州罗甸实生艾纳香植株为研究对象,采用石蜡切片法对16株艾纳香植株叶片进行解剖,通过显微镜观察及数据测量,对艾纳香的叶脉周长、叶脉面积、分泌细胞数量、维管束数量、维管束面积、叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度、细胞结构紧密度和疏松度等11个指标进行变异系数统计和聚类分析。结果表明:艾纳香不同植株的叶脉周长等11个指标都具有显著性差异,11号、12号和13号植株具有较好的生态适应性;不同植株基因型的差异应该是造成变异系数高的根本原因;16株植株可聚为三大类。

DA-6对冬季迟缓期的艾纳香生长和有效成分含量的影响

目的:研究DA-6对冬季迟缓期艾纳香生长和有效成分含量的影响。方法:以一年生艾纳香种子苗为实验材料,在冬季艾纳香生长迟缓期进行3次喷施DA-6。测定艾纳香的株高、地径、叶长和叶宽等生长指标以及叶干重。分别采用紫外可见分光光度法和GC法测定艾纳香叶片总黄酮和l-龙脑的相对含量,并计算绝对含量。结果:DA-6显著促进艾纳香生长,增加叶干重,其中10 mg·L-1DA-6作用的效果最显著。DA-6抑制了艾纳香叶片中总黄酮和l-龙脑相对含量的积累。CK处理组总黄酮和l-龙脑相对含量最高,显著高于100 mg·L-1DA-6处理组77.78%和96.49%。DA-6显著提高了总黄酮和l-龙脑的绝对含量。10 mg·L-1DA-6处理组艾纳香叶片中总黄酮和l-龙脑含量最高,显著高于其他处理组,是CK处理组的2.33倍和3.33倍。结论:因此,在冬季艾纳香生长迟缓期施加DA-6可以促进艾纳香生长和叶干重的增加,提高总黄酮和l-龙脑的绝对含量。

利用冰冻切片法观察艾纳香叶显微结构

应用冰冻切片法观察艾纳香成熟叶的显微结构。结果显示,优化的冰冻切片方法为：取新鲜叶片,不经预处理,直接切取4 mm×4 mm小块,用冷凝胶包埋,冷凝箱温度和样品夹温度-18°C,冷凝时间10 min,修片后取出并置于室温20℃条件下回温30 s,移回样品夹后30 s内切片,切片厚度20μm,用洁净载玻片吸片,于光镜下观察。成熟艾纳香叶为异面叶,厚度约110μm;栅栏组织和海绵组织分化明显,栅栏组织由1层排列紧密的柱状细胞组成,海绵组织有发达的细胞间隙,两者之比为0.82～1.22;叶中脉发达,主脉散生,外韧维管束6～10个,由厚壁细胞组成维管束鞘,导管为螺纹;叶上、下表皮均有大量非腺毛和腺毛分布,叶表皮的腺毛为双列多细胞组成的头状腺毛。本研究结果确定了利用冰冻切片研究艾纳香叶显微结构简便可行,为艾纳香属植物分类鉴定、品种整理等提供参考,并为进一步研究艾纳香的结构和发育积累经验。

HPLC-RID同时测定艾纳香叶中左旋樟脑、左旋龙脑及异龙脑含量

目的:建立HPLC-RID同时测定艾纳香叶中左旋樟脑、左旋龙脑及异龙脑含量的方法。方法:采用甲醇加热提取,酸性氧化铝柱层析处理,测定7种不同干燥方法对艾纳香叶中左旋樟脑、左旋龙脑及异龙脑含量的影响;HPLC色谱条件:依利特C_(18)柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:65%-0.4%磷酸甲醇溶液,流速:1.0m L/min,柱温:40℃,示差检测器。结果:左旋樟脑、左旋龙脑及异龙脑分别在0.102-1.535、0.103-1.554、0.107-1.607mg/m L内呈良好的线性关系,回归方程分别为Y=79 284X+4 796.6(r=0.9993)、Y=79 415X+2756.0(r=0.9991)、Y=77 727X+2 635.7(r=0.9990),平均加样回收率(n=6)分别为101.06%(RSD=1.42%)、98.14%(RSD=0.78%)、95.28%(RSD=1.21%);酸性氧化铝柱层析法前处理能有效的去除杂质对测定的干扰;不同干燥方法左旋龙脑含量由高至低为室内阴干>30℃烘干>冷冻干燥>室外晒干>微波干燥>50℃烘干>70℃烘干。结论:采用酸性氧化铝柱层析前处理,HPLC-RID同时测定左旋樟脑、左旋龙脑及异龙脑含量的方法准确、快捷、可靠,为艾纳香等样品质量控制提供另一种测定方法;不同干燥方法中室内阴干样左旋龙脑含量较高。