艾纳香油通过NF-κB非经典信号影响花生四烯酸代谢缓解LPS所致巨噬细胞的炎症反应

【目的】本文旨在探讨艾纳香油(BBO)通过核转录因子κB(NF-κB)非经典通路影响花生四烯酸(AA)代谢通路发挥抗炎作用。【方法】采用豚鼠离体回肠法检测BBO对慢反应物质(SRS-A)生成的影响,ELISA法检测BBO对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞前列腺素E_(2)(PGE_(2))及白三烯B_(4)(LTB_(4))产生的影响,qRT-PCR检测BBO对LPS诱导巨噬细胞COX-2、5-LOX、FLAP和RelB表达的影响,Western blot检测BBO对NF-κB非经典通路蛋白肿瘤坏死因子受体作用因子3(TRAF3)、肿瘤坏死因子受体作用因子2(TRAF2)、NF-κB诱导激酶(NIK)、p100和RelB浓度的影响。【结果】在1mg·mL^(-1)的BBO药物浓度下减弱了豚鼠回肠的收缩张力(P<0.001),对SRS-A的生成抑制率达到65.34%;与LPS模型组相比,BBO在40-80μg·mL^(-1)浓度下降低AA代谢通路中PGE_(2)(P<0.05)和LTB_(4)(P<0.05)的浓度,降低COX-2(P<0.05)、5-LOX(P<0.05)和FLAP(P<0.05)的表达;此外,40-80μg·mL^(-1)浓度下BBO还降低LPS导致的NF-κB非经典通路中TRAF3(P<0.05)、TRAF2(P<0.05)和NIK(P<0.05)的浓度,进一步抑制p100蛋白的磷酸化(P<0.05),同时抑制转录因子RelB的表达(P<0.05)和RelB蛋白的水平(P<0.05),而BBO自身不引起这些基因与蛋白的变化。【结论】BBO可能通过抑制NF-κB非经典信号中调节蛋白TRAF3和TRAF2,转录因子RelB的浓度,造成NIK蛋白的诱导激酶作用受到抑制,进一步抑制了p100蛋白的磷酸化及其与转录因子RelB的结合,从而影响到下游AA通路中重要限速酶COX-2、5-LOX和FLAP的表达与炎症介质PGE_(2)和LTB_(4)的水平发挥抗炎作用。

艾纳香油中花椒油素的分离及含量测定

建立了艾纳香油中花椒油素的中压制备分离方法,采用甲醇水为流动相,梯度洗脱;流速为8 mL/min;柱温30℃;进样量100μL;λ=254/360 nm。艾纳香油样品中花椒油素在该条件下分离度好,结合GC-MS进行验证并测定其纯度达99.335%。并通过HPLC检测方法测定了6批次艾钠香油中的花椒油素的含量,结果显示不同批次或不同产家的艾纳香油中花椒油素的含量不一致,且相差较大。该法的建立与含量测定可为艾纳香油的质量控制提供理论基础。

艾纳香油过敏性和急性毒性实验研究

艾纳香油来源于菊科植物艾纳香[Blumea balsamifera(L.)DC.]。本文考察外用艾纳香油过敏性和急性毒性,了解艾纳香油的用药安全性,为临床安全用药提供依据。采用皮肤过敏性试验和急性毒性试验的常规方法进行。在过敏性实验中,以豚鼠为实验动物,外用艾纳香油于豚鼠完整皮肤上,观察动物过敏情况;在急性毒性实验中,以大鼠为实验动物,艾纳香油分别外用于大鼠完整皮肤和破损皮肤,观察动物急性毒性情况。研究结果表明,艾纳香油外用对豚鼠完整皮肤无致敏性,对大鼠完整皮肤和破损皮肤无急性毒性。因此,艾纳香油无致敏性和急性毒性。

艾纳香油对小鼠耳肿胀的抗炎效果

为了解艾纳香油的抗炎作用机理,为其开发应用提供参考,将60只昆明种小鼠(SPF级)随机分为艾纳香油高(40%)、中(20%)、低(10%)剂量组,氢化可的松组,模型对照组和溶剂对照组,用二甲苯致炎,采用紫外可见分光光度法测定致炎耳组织中前列腺素E2(PGE2)和血清中丙二醛(MDA)的含量,并采用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测定血清SOD活性。结果表明:与模型对照组相比,艾纳香油高、中、低剂量组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有显著抑制作用(P<0.05),降低PGE2含量,其中低剂量组可极显著降低致炎耳组织中PGE2含量(P<0.01);艾纳香油高、低剂量组均显著提高血清SOD的活性(P<0.05),艾纳香油可降低血清MDA含量(P>0.05)。艾纳香油具有一定的抗炎作用,可能与降低炎症区域PGE2含量和提高机体抗氧化损伤有关。

艾纳香油对大鼠深Ⅱ度烫伤的治疗研究

目的:研究艾纳香油对大鼠深Ⅱ度烫伤创面组织的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,随机分成模型空白对照组,阳性药物对照组(美宝湿润烧伤膏)和艾纳香油组,每天给药1次,连续给药21天;观察确定各组大鼠烫伤创面表皮脱落时间,并在给药后不同的6个时间相点进行取样,测定大鼠烫伤创面愈合率,烫伤创面组织含水量,血浆中超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和创面组织中羟脯氨酸含量。结果:与模型空白组相比,艾纳香油可以明显的加快创面处表皮脱落,对创面愈合率影响较大(P<0.05,P<0.01);迅速降低烫伤创面组织处的皮肤组织的含水量(P<0.05);在烫伤初期,能明显地提高大鼠血浆中的SOD活性(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.05);升高创面组织中的羟脯氨酸的水平(P<0.05)。结论:艾纳香油对深Ⅱ度烫伤具有良好的治疗效果,在创面表皮脱落,创面愈合率,组织含水量等方面均有良好的改善作用;初步研究机制表明,可能与提高SOD活性,减少MDA,以及提升皮肤组织中羟脯氨酸水平等有关。

艾纳香挥发油化学成分的气相色谱-质谱分析

由黔产艾纳香(BlumeabalsamiferaDC.)的叶提取挥发油,分出结晶后的母液,用气相色谱 -质谱进行定性分析和峰面积相对含量的测定,鉴定出41个化学成分 ;主要成分为L_龙脑、樟脑、β_石竹烯、桉叶油醇、古芸烯、芳樟醇等。

黔产艾纳香挥发油化学成分研究

黔产艾纳香 (Bhuneabalsamifera)枝叶提取的挥发油 ,经析脑后 ,用GC/MS方法进行了定性定量分析 ,鉴定出 2 8个化学成分。主要成分为L -龙脑、β -石竹烯、樟脑、γ -桉叶油醇、1-辛烯- 3-醇、反 -罗勒烯、1,3,4,5 ,6 ,7-六氢 - 2 ,5 ,5 -三甲基 2 ,4a -亚甲基。

滇产艾纳香叶挥发油化学成分的GC-MS分析

用水蒸气蒸馏法提取滇产艾纳香叶的挥发油成分,经分离纯化后,采用GC-MS进行化学成分分析,共鉴定出有效组分56个,经鉴定其中相对含量0.11%～0.50%有44个,0.51%～1.00%有6个,大于1.01%有6个。其主要成分有樟脑17.76%、龙脑52.42%,其他主要成分为异龙脑、松油醇、石竹烯、丁子香酚、愈创木醇、库贝醇等。

艾纳香油对紫外线诱导小鼠皮肤晒伤的保护作用

目的研究艾纳香油[Blumea balsamifera(L.)DC.,BBO]对紫外线诱导小鼠皮肤晒伤的保护作用及其作用机制。方法采用急性紫外线UVB辐射小鼠皮肤建立晒伤模型,创面外用艾纳香油,HE染色观察晒伤皮肤组织的病理变化,测定超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含有量,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测表皮中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHd G)、白细胞介素6(IL-6)及核转录因子-Kappa B(NF-κB)水平,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、P53肿瘤抑制蛋白、肿瘤坏死因子(TNF-α)蛋白表达。结果与模型组比较,艾纳香油显著减少表皮厚度,使小鼠皮肤中SOD活性、GSH和MDA含有量得到恢复,显著降低8-OHd G、IL-6和NF-κB水平,同时抑制P53、PCNA表达。结论艾纳香油能够缓解UVB引起的皮肤晒伤,其机制与增强抗氧化作用,抑制NF-κB信号通路,下调IL-6释放,减少8-OHd G和PCNA水平有关。

艾纳香油质量标准初步研究

以不同批次的艾纳香油为对象,通过观察其外观性状,测定其溶解性、比旋度以及相对密度等物理特性,并采用薄层层析法(TCL)和气相(GC)指纹图谱对收集的艾纳香油成分进行定性分析,对艾纳香油的质量标准进行初步研究。结果表明:艾纳香油为澄清、棕红色的液体,有特异的芳香气,易溶于乙醇、氯仿、乙醚,几乎不溶于水,比旋度宜为-26°^-30°,相对密度宜为0.94~0.98,β-石竹烯和l-龙脑TCL斑点清晰,分离良好,GC指纹图谱得到17个共有峰,均含有有效成分β-蒎烯、芳樟醇、樟脑、l-龙脑、β-石竹烯,相似度均在0.90以上。分析检测方法简便、可靠,可为艾纳香油的质量控制提供参考依据。

苗药艾纳香不同居群及不同部位的质量研究

目的 研究苗药艾纳香不同居群及不同部位的质量.方法 挥发油采用药典方法蒸馏提取;总黄酮采用50％乙醇回流法提取,紫外可见分光光度法测定.结果 艾纳香新鲜、阴干及烘干叶片挥发油含量分别为2.0167、1.5917、1.2751 ml/kg,且三者间差异有统计学意义.叶片挥发油含量显著高于嫩枝,分别为1.1417 ml/kg和0.6313 ml/kg.不同居群挥发油含量为0.9333～2.5667ml/kg,平均为1.6490ml/kg,居群间差异有统计学意义;不同居群总黄酮含量为13.43％～17.48％,平均为14.87％,居群间差异无统计学意义.结论 提取艾纳香挥发油时,应采用新鲜叶片,且最好即采即用;作为药材使用的艾纳香叶片应采用阴干法干燥;艾纳香嫩枝可用于提取挥发油,以充分发挥艾纳香资源价值;不同居群艾纳香叶片挥发油含量差异显著,总黄酮含量差异不显著,在选择艾纳香优良种源时,应以挥发油含量作为主要指标.

艾纳香油对晒伤小鼠皮肤氧化应激及DNA损伤的影响

观察艾纳香油对UVB照射后Blab/C小鼠晒伤皮肤氧化应激及DNA损伤的影响。通过建立4组小鼠晒伤模型,在5个不同时间相点测定小鼠皮肤晒伤组织厚度和含水量,利用可见光分光光度法测各组皮肤组织中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的含量。结果表明:艾纳香油可明显加快晒伤创面处结痂脱落,抑制晒伤皮肤组织增厚(P<0.05),减少晒伤组织皮肤含水量的丧失(P<0.05,P<0.01);在整个治疗过程,能明显提高小鼠血清SOD活性(P<0.05,P<0.01),降低皮肤MDA含量(P<0.05),升高皮肤GSH的水平(P<0.05),降低皮肤8-OHd G含量(P<0.01)。艾纳香油可抵抗UVB晒伤后小鼠表皮增厚,减少光产物表达,并通过清除氧自由基,提高抗氧化酶活性而发挥抗氧化作用。

琼产艾纳香叶精油的抗氧化和抗菌活性

采用水蒸气蒸馏法收集琼产艾纳香叶精油,经过GC-MS分析,精油中45种化合物被定性检出,主要是单萜类(48.55%)和倍半萜类(39.91%),相对含量列前五位的组分分别是(-)-龙脑(28.45%)、石竹烯(22.98%)、樟脑(9.56%)、α-荜澄茄烯(8.32%)和β-蒎烯(4.32%)。经过DPPH自由基清除试验、β-胡萝卜素漂白试验和硫代巴比妥酸法试验发现精油具有较强的抗氧化活性。琼脂扩散法和琼脂稀释法证实精油对6种受试菌都有抑制活性,对金黄色葡萄球菌、假丝酵母和黄曲霉具有较好的抑制能力(MIC:625μg/mL),对大肠杆菌、李斯特氏菌和沙门氏菌也表现出了抑制能力(MIC:2 500μg/mL)。以上结果证实琼产艾纳香叶精油具有明显的抗氧化和抗菌活性,拥有成为食品和化妆品的天然抗氧化剂及抗菌剂的潜力。

微波辅助提取艾纳香精油的工艺优化及抗菌活性的研究

以艾纳香为原料,以艾纳香精油得率为指标,采用微波辅助水蒸气蒸馏法对艾纳香精油提取工艺进行单因素及Box-Behnken响应曲面试验进行优化,并用琼脂扩散法和琼脂稀释法对其抗菌能力进行研究。结果表明:艾纳香精油微波提取的最佳工艺条件为微波功率450 W、提取时间23min、液料比为10(mL∶g),此条件下提取的艾纳香精油得率为3.45%,提取工艺稳定可行。5种受试菌均有抑制活性,对比抑菌圈直径和MIC,抑制顺序为黄曲霉>黑曲霉>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>绿脓杆菌。

羟丙基-β-环糊精包合艾纳香挥发油的制备工艺研究

为了制备艾纳香挥发油-羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合物,并考察包合物的包合效果及包合后的质量。本研究采用饱和水溶液法制备艾纳香挥发油-HP-β-CD包合物,运用正交试验法对其制备工艺进行优选,分别考察艾纳香挥发油包合物的产率、油利用率、含油率3个指标,并根据上述指标计算其综合评分,优选出最佳工艺条件,最后采用薄层色谱(TLC)和紫外扫描(UV)等方法对包合前后艾纳香挥发油的性质进行考察和分析。结果显示,HP-β-CD将艾纳香挥发油包合的最佳工艺条件为:包合温度50℃、HP-β-CD与艾纳香油的比例8∶1(g∶ml)、包合时间3 h。最佳包合工艺所制备的包合物包合率为83%,综合评分为72.33。TLC和UV等表征结果证明了包合物的生成。本实验研究表明:优选出的艾纳香挥发油-HP-β-CD包合工艺合理、可行,这为艾纳香挥发油进一步的制剂开发提供了数据参考。

不同产源艾纳香油化学成分及其抗炎活性研究

目的探讨不同产源艾纳香油的化学成分及其抗炎活性。方法利用GC-MS法对不同产源艾纳香油(B1~B5)进行分析,比较确定其主要成分,并采用峰面积归一化法计算相对百分含量。通过小鼠耳廓肿胀法从不同产源中筛选抗炎效果最佳的艾纳香油(0.6 g·kg-1)。采用脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症细胞模型;MTT法检测不同浓度艾纳香油(4.24、12.72、38.16μg·mL-1)对小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响;ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及前列腺素E2(PGE2)含量;紫外-可见分光光度法检测一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(iNOS)活力;qRT-PCR法检测iNOS、环氧合酶-2(COX-2)mRNA表达。结果不同产源的艾纳香油中左旋龙脑、反式石竹烯、樟脑、石竹烯氧化物、香树烯、花椒素、芳樟醇含量相对较高,不同产源艾纳香油主要化学成分相对含量存在差异。与吐温-80溶剂组比较,艾纳香油B1、B2、B3、B5组均能明显降低二甲苯致小鼠的耳廓肿胀度(P<0.05,P<0.01);后续选择抗炎活性最佳的B2组(抑制率为37.45%)艾纳香油进行实验。与空白组比较,LPS模型组及艾纳香油低、中、高浓度组的细胞活力无明显变化(P>0.05);LPS模型组小鼠巨噬细胞的TNF-α、IL-1β、IL-6及PGE2的分泌量均显著升高(P<0.01),细胞上清液中NO、iNOS含量显著上升(P<0.01),iNOS、COX-2 mRNA表达量明显升高(P<0.01)。与LPS模型组比较,艾纳香油各浓度组的TNF-α、IL-1β分泌量明显降低(P<0.05,P<0.01);艾纳香油低、高浓度组的IL-6分泌量明显降低(P<0.01);艾纳香油低、中浓度组的PGE2分泌量明显降低(P<0.01);艾纳香油各浓度组细胞上清液中NO、iNOS含量以及iNOS、COX-2 mRNA表达量显著降低(P<0.01)。结论不同产源艾纳香油各主要成分相对含量不同,且具有不同程度的抗炎作用,其抗炎机制可能是通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NO及PGE2的生成,降低iNOS活力,抑制iNOS及COX-2 mRNA的表达。

不同产源艾纳香油抗菌活性筛选及其对金黄色葡萄球菌抗菌作用的研究

旨在筛选抗菌效果好的艾纳香油,寻找其抗菌活性物质,分析其对金黄色葡萄球菌抗菌作用。通过对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞杆菌、无乳链球菌、白色念珠菌体外抗菌试验筛选不同产源(A1~A5)和自制的艾纳香油(B1~B9、T),采用GC-MS分析主要化学成分,并检测其部分化合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),采用金黄色葡萄球菌感染小鼠模型研究艾纳香油T对动物的保护作用,测定其对细菌生长及细菌形态的影响。结果表明,艾纳香油B9、T体外抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌对其敏感,MIC值分别为9.77、13.68μg·mL^-1,MBC值分别为19.54、27.35μg·mL^-1;从艾纳香油B5、B9、T中检测出36种共有化学成分,其中,α-葎草烯、蒎烯、芳樟醇类化合物具有一定抑菌活性;不同浓度艾纳香油T溶液均可不同程度抑制小鼠的死亡率,减轻小鼠脾肿大、肾炎性渗出,差异极显著(P<0.01);低浓度艾纳香油T溶液能延迟菌株进入对数生长期,高浓度能杀死细菌,造成菌体不规则凸出及凹陷结构,变形严重,甚至细胞破碎。筛选获得艾纳香油T抗菌活性较好,其对金黄色葡萄球菌的抑制与破坏菌体结构、抑制菌株生长有关,其中,α-葎草烯、蒎烯和芳樟醇类化合物可能是抑菌关键物质,值得进一步开发和研究。

艾纳香油对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路的作用研究

旨在通过研究NF-κB、Nrf2/HO-1通路来揭示艾纳香油(Blumea balsamifera(L.) DC Oil, BBO)发挥抗炎效果的作用机制。本研究利用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,试验分为空白组、LPS模型组、BBO组(低、中、高剂量)、BBO阴性对照组,每组3个重复,采用Hoechst 33342和PI双染检测BBO对细胞凋亡的影响;采用ELISA和分光光度法检测BBO对LPS诱导巨噬细胞后分泌IL-1β、TNF-α、PGE_(2)、LTB_(4)、NO含量及iNOS活力的影响;采用RT-PCR检测BBO对TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平的影响;采用Western blotting检测BBO对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白水平的影响。结果显示,BBO在80μg·mL^(-1)剂量范围内可以扭转LPS导致的巨噬细胞形态变化及细胞凋亡发生;与LPS模型组相比,BBO 60~80μg·mL^(-1)剂量下可以极显著抑制LPS诱导的细胞炎性因子和炎症介质IL-1β、TNF-α、PGE_(2)、LTB_(4)、NO的分泌及iNOS活力(P<0.01),并极显著抑制LPS导致的细胞IL-1β、TNF-α mRNA表达(P<0.01);同时,BBO 60~80μg·mL^(-1)剂量下极显著下调LPS导致的COX-2、5-LOX、p-IKKα、p-P65、p-IκB-α、胞质Nrf2蛋白表达(P<0.01),极显著促进HO-1、核Nrf2蛋白表达(P<0.01),并呈现剂量依赖性关系。结果提示,艾纳香油有良好的抑制细胞炎性和抗凋亡效果,其可能通过抑制NF-κB通路中关键蛋白磷酸化和炎症因子的产生从而促进Nrf2/HO-1通路中主要抗炎基因表达最终发挥抗炎作用。

GC法同时测定艾纳香油中6种成分的含量

目的:建立同时测定艾纳香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素含量的方法。方法:采用气相色谱法。色谱柱为RTX-1701毛细管柱,程序升温,检测器为氢离子火焰检测器,检测器温度为240℃,进样口温度为240℃,载气为高纯氮气,流速为3 mL/min,进样量为0.5μL,进样分流比为50∶1。结果:β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素的检测质量浓度线性范围分别为0.0297~0.2671 mg/mL(r=0.9999)、0.0243~0.2189 mg/mL(r=0.9999)、0.1260~1.1340 mg/mL(r=0.9999)、0.2172~1.9548 mg/mL(r=0.9999)、0.1363~1.2269 mg/mL(r=0.9999)、0.0445~0.4003 mg/mL(r=0.9995);定量限分别为0.0285、0.0087、0.0186、0.0168、0.0145、0.0421 mg/mL,检测限分别为0.0094、0.0029、0.0061、0.0055、0.0048、0.0139 mg/mL;精密度、稳定性、重复性、耐用性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为98.13%~101.30%(RSD=1.20%,n=9)、98.44%~101.81%(RSD=1.28%,n=9)、98.26%~101.05%(RSD=1.19%,n=9)、99.08%~101.58%(RSD=0.89%,n=9)、98.66%~101.66%(RSD=1.17%,n=9)、98.84%~103.60%(RSD=0.96%,n=9);样品含量分别为14.552~46.766、16.951~22.096、80.597~113.115、205.224~242.537、47.761~135.697、26.493~45.771 mg/g。结论:本方法操作简便、准确,精密度、重复性良好,可用于同时测定艾纳香油中6种成分的含量,并可为艾纳香油质量的综合评价及提取工艺研究提供参考。

艾纳香油中有效成分的定性检测及含量测定

通过化学反应鉴别方法和泡沫试验方法定性检测艾纳香油中有效成分;采用UV比色法对有效成分进行含量测定。结果表明,艾纳香油中含有黄酮、有机酸和蒽醌类成分,但无生物碱、皂苷及多糖类成分。黄酮、有机酸和蒽醌类成分质量浓度分别在3.680~18.400μg/mL(R^2=0.9996),4.190~20.950μg/mL(R^2=0.9994),2.590~12.950μg/mL(R^2=0.9987)范围内具有良好线性关系,平均回收率(n=3)分别为99.80%(RSD=1.33%),99.37%(RSD=0.56%),99.81%(RSD=0.58%)。