系统性红斑狼疮患者外周血BLyS表达水平变化与CD19+CD24hiCD27+ Breg细胞关系的相关性研究

目的:此文旨在研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血BLyS的表达水平与CD19+CD24hiCD27+ Breg细胞表达比例的相关性,为寻求SLE个体化免疫治疗策略提供理论依据。实验方法:选择SLE患者40例,根据SLEDAI-2k评分分为低活动度组(评分 ≤ 9);中高活动度组(评分 ≥ 10),并选取健康查体患者37例,分析受试者外周血Breg细胞比例水平、BLyS水平、临床指标等。结果:SLE患者外周血Breg表达水平低于健康人,且与疾病活动度负相关;SLE患者的BLys表达水平高于健康人,且与疾病活动度正相关;BLyS表达水平与Breg细胞比例表达水平存在负相关性。结论:系统性红斑狼疮的发病可能与Breg细胞的负性调节作用减弱有关;BlyS可能参与了系统性红斑狼疮的疾病进展,为探究此细胞在系统性红斑狼疮发病机制方面提供了一些新的思路。

NSE BLyS APRIL在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性

目的研究神经特异性烯醇化酶(NSE)、B淋巴细胞刺激因子(BLyS)、增殖诱导配体(APRIL)在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性。方法选取2015—2023年河南科技大学第一附属医院收治的118例病毒性脑炎患者,另选取同期体检、经临床生化和脑脊髓穿刺等常规检查确认健康正常的对照组48例。比较不同病情的病毒性脑炎患者血清NSE、BLyS、APRIL水平,不同预后病毒性脑炎患者的相关资料。采用多因素Logistic分析病毒性脑炎预后不良的影响因素,并采取受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NSE、BLyS、APRIL单独及联合检测在病毒性脑炎预后评价中的价值。结果重症组血清NSE、BLyS、APRIL水平均高于轻症组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组入院当天及治疗后血清NSE、BLyS、APRIL水平均低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、总住院时间、是否进行机械通气、是否存在癫痫发作以及入院当天血清NSE、BLyS、APRIL水平与病毒性脑炎预后不良有关(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,入院当天血清NSE、BLyS、APRIL联合检测预测预后不良的AUC值(0.895)高于NSE(0.801)、APRIL(0.781)、BLyS(0.776)。结论血清NSE、BLyS、APRIL在病毒性脑炎患者均呈高表达,三者联合检测可较好地预测患者预后。

一株抗人BLys单克隆抗体的制备及其生物学功能研究

研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养。将获得的克隆4F7培养细胞注射入经致敏的小鼠体内,-抽取的腹水经Protein G亲和层析柱纯化。将纯化所得的抗体作用于经BLys分子刺激的扁桃体B细胞,3H-TdR检测细胞的增殖效率。结果获得1株持续、稳定分泌鼠抗人BLys单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该细胞株所分泌的抗体能阻断膜型和可溶性BLys分子对扁桃体B细胞的促增殖作用。对这株单克隆抗体生物学功能的研究表明,这株单抗能特异性识别人BLys分子及阻断膜型和可溶性BLys发挥生物学活性。

计算机辅助设计可溶性BLyS受体,eBCMA-Fc融合蛋白及其在大肠杆菌中的表达(英文)

B细胞成熟抗原(BCMA)是B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的受体之一.它的胞外区与人IgG1Fc的融合蛋白eBCMA-Fc,又称为诱饵受体,具有拮抗BLyS的活性.为了设计新的拮抗肽,基于BCMA和Fc的晶体结构,通过计算机图形学技术、分子模拟方法,建立了eBCMA-Fc融合蛋白的三维理论结构.利用均方根位移(root mean square distance,RMSD)对eBCMA-Fc融合蛋白与单体eBCMA、Fc构象差异进行分析.融合蛋白eBCMA-Fc中的eBCMA段与单体eBCMA的主链碳原子间RMSD值为0.036nm,Fc段与单体Fc的主链碳原子间RMSD值为0.064nm.结果表明,对比单体,融合蛋白eBCMA-Fc并未因eBCMA与Fc直接连接而发生构象的变化.分子对接方法显示,融合蛋白eBCMA-Fc中的BCMA与BLyS作用,而Fc扮演着稳定BCMA构象的支架作用.为进一步验证上述理论分析,构建eBCMA-Fc融合基因,并将载有eBCMA-Fc融合基因的原核表达质粒转化BL21(DE3)菌、在细菌中表达.目的蛋白经蛋白A亲和柱纯化大约为36kD,与理论预测值34kD相近.免疫印迹表明抗人IgG抗体能够识别eBCMA-Fc融合蛋白.ELISA证实,eBCMA-Fc融合蛋白能够结合BLyS.随着eBCMA-Fc融合蛋白增加,结合BLyS的融合蛋白也相应增加.而对照人IgG,即使在高浓度条件下,也不结合BLyS.此外,eBCMA-Fc融合蛋白能够抑制BLyS对B细胞肿瘤Daudi细胞的作用.这些研究为下一步设计和筛选BLyS拮抗肽提供了实验基础.

SLE患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD86的变化

采用FACS研究了 2 2例SLE患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD86的变化。结果表明 ,SLE患者外周血BLyS+ 淋巴细胞和CD19+ CD86 + 淋巴细胞显著增加 ,但二者之间无显著相关。

TNF家族新成员BLyS和其受体TACI

众所周知,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)家族参与各种免疫和炎症反应的调控.1994年Smith等人发现TNF家族所有成员,除α-淋巴毒素外,都是II型膜蛋白.它们的生物学作用方式主要是通过细胞间接触,由膜结合形式的配体与其相应的受体结合;或者通过加工和排出可溶性配体,配体再和其受体结合的.另外,该家族的其他成员诸如CD27L,C D30L,OX40L,FasL和4-IBBL都有胞浆调控区,它们与受体结合后能进行信号传递[1 -5]

银苓消肿丸对湿热痹阻型类风湿关节炎患者血清IL-1、IL-6、BlyS表达的影响

目的:观察银苓消肿丸对湿热痹阻型类风湿关节炎的临床疗效及对外周血中白细胞介素(IL)-1、IL-6和B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的影响。方法:将100例湿热痹阻型类风湿关节炎患者随机分为治疗组和对照组,每组50例。对照组采用来氟米特和甲氨蝶呤治疗,治疗组在对照组的基础上加用银苓消肿丸治疗。2组均以16周为1个疗程。观察2组临床疗效及治疗前后晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、IL-1、IL-6、BlyS的变化。结果:治疗组显效8例,有效17例,改善22例,无效3例,总有效率为94.00%;对照组显效6例,有效14例,改善19例,无效11例,总有效率为78.00%。2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、ESR、CRP、IL-1、IL-6、BlyS含量较治疗前均有改善(P<0.01或P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05)。结论:慢作用抗风湿药联合银苓消肿丸治疗类风湿关节炎具有较好的临床疗效,对改善关节功能及降低活动期炎性指标具有较好的作用,且能明显降低外周血清中IL-1、IL-6、BlyS的表达水平。

宝钢低屈服点钢BLY225的焊接性能

本文首先介绍了宝钢开发的55mm厚的低屈服点钢BLY225,并进行了可焊性试验,接着针对上海虹桥枢纽工程中采用的屈曲约束支撑结构的制作特点,进行了BLY225钢与Q345钢的异种钢对接接头和角接接头的各种力学性能试验。最后得出如下结论:(1)宝钢低屈服点钢BLY225的化学成分和力学性能均匀,具有良好的抗层状撕裂性能和良好的可焊性;(2)异种钢对接接头和角接接头具有优良的综合力学性能;(3)采用宝钢生产的BLY225低屈服点钢生产的屈曲约束支撑结构,可以满足上海世博工程——虹桥枢纽工程所要求的低屈服点阻尼器的制作要求。

从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽

目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)研究进展

B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)是 1999年新发现的一种重要的细胞因子 ,属于肿瘤坏死因子 (TNF)超家族成员 .在体液免疫调控中起重要作用 .它能强烈地刺激B淋巴细胞的增殖和分化并分泌大量免疫球蛋白 (主要为IgM) ;在体外其过量表达能促进多种B系肿瘤细胞的生长 .BLyS转基因小鼠出现严重的红斑狼疮样症状 .对BLyS的基因和蛋白质结构、免疫调控功能。

人Blys转染细胞对B细胞功能的影响

利用RT-PCR方法从经IFN-γ激发的正常人外周血单核细胞总RNA中扩增出全长BlyscDNA,继而将BlyscDNA插入真核表达载体逆转录病毒载体pSIV1中。以脂质体转染法将重组逆转录病毒载体与两个辅病毒载体共转染包装细胞293T,将含完整病毒颗粒的上清转染小鼠成纤维细胞L929,经G418筛选获得稳定表达Blys分子的L929细胞;RT-PCR和流式细胞术检测证实Blys分子在L929的稳定和高水平表达。继而以该转染细胞与PWM驱动的人扁桃体B细胞共培养,体外实验表明Blys介导的共刺激信号能促进该培养体系B淋巴细胞增殖,与抗μ抗体信号协同能刺激B细胞分泌IgG。

APRIL／BlyS表达与原发性胆汁性肝硬化的关联性研究

目的探讨APRIL／BlyS在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的mRNA表达水平以及与体液免疫水平的关联性。方法设计特异性的引物和探针，以人基因GAPDH为内参照，用实时定量PCR的方法检测42例健康人和56例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中APRIL，BlyS的mRNA表达水平，采用ELISA方法在全自动酶标仪上检测血清中IgG，IgA，IgM的浓度。结果与健康人比较，原发性胆汁性肝硬化患者外周血中APRIL，BlySmRNA的表达升高（P〈0．01），患者血清中IgM显著增高（P〈0．01），患者中BlySmRNA表达与IgM成显著正相关（r=0．763，P〈0．01），而APRIL mRNA的表达与IgM的水平无相关性。结论ARPIL，BlyS系统及其受体可能参与原发性胆汁性肝硬化的疾病进程，为监控原发性胆汁性肝硬化的病情和有效治疗提供了新的依据。

sBLyS突变体酵母表达载体的构建

目的构建人BLyS胞外区(soluble BLyS)突变体毕赤酵母分泌型表达载体,为深入探讨BLyS的功能和机制创造条件。方法以构建的人pUC19/sBLyS及其突变体重组质粒为模板,利用PCR扩增出6×his/sBLyS及其突变体的cDNA,克隆入酵母表达载体pPIC9K;行序列测定后电转化入毕赤酵母GS115,并进行表型筛选和G418抗性筛选;对高拷贝整合的重组酵母表达菌株进行PCR鉴定。结果构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K/6×his/sBLyS及其突变体;经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母表达菌株。结论成功构建了人sBLyS及其突变体的真核表达载体,为获得人sBLyS及其突变体蛋白,进一步研究BLyS的生物学功能奠定了基础。

小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子真核表达载体pSecTag2B-msBlyS的构建

目的 克隆BALB c小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)的cDNA片段并测序分析 ,为研究msBlyS诱导的抗肿瘤作用提供目的基因。方法 采用反转录聚合酶联反应 (RT_PCR)法从BALB c小鼠脾脏组织总RNA中获得 5 6 6bp的msBlyS基因cDNA。通过TA克隆测序无误 ,再将其定向连接到pSecTag2B真核表达载体上 ,转化E .coliXL1_blue。限制性内切酶筛选出阳性克隆pSecTag2B_msBlyS ,末端终止法完成msBlyScDNA的序列测定。结果 测得的msBlyScDNA序列与基因文库中报道序列完全相同 ,插入相位正确 ,未改变目的基因的阅读框架。结论 成功克隆了小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子基因 ,为研究其诱导的抗肿瘤作用奠定了基础。

碳纤维布对低屈服点钢BLY160低周疲劳性能的影响研究

采用轴向应变控制法,在电液伺服疲劳试验机MTS809上,对缠绕碳纤维增强聚合物（加固试件）和不缠碳纤维增强聚合物（母材）的低屈服点钢BLY160试样进行低周疲劳试验。研究了两种试验钢的低周疲劳性能,如循环应力响应特征、循环应力-应变关系以及低周疲劳寿命。通过拟合Hollomon公式和Manson-Coffin公式,推导出母材和加固试件的低周疲劳寿命预测公式。结果表明：母材和加固试件的裂纹源均萌生于试件表面,且加固试件表面有多处裂纹源,其疲劳断口韧窝比母材的更小、更密。缠绕碳纤维布能有效提高低屈服点钢的低周疲劳性能。

GST-hBLyS融合蛋白基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

根据hBLyS (humanBlymphocytestimulator)基因序列设计合成特异性引物 ,用RT_PCR从人外周血淋巴细胞扩增出 85 8bp的hBLyS基因 ,并将其插入到融合蛋白原核表达载体 pGEX_4T_1中 ,得到重组表达质粒pGEX_4T_1/hBLyS。把此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,经用IPTG诱导 ,表达出了GST_hBLyS融合蛋白。

人BLyS基因克隆、表达和抗人BLyS单克隆抗体的制备

【目的】研制抗人BLyS单克隆抗体 ,以进一步探讨人BLyS与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLyS基因克隆到融合蛋白原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,构建重组质粒 pGEX 4T 1/hBLyS ,用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,加IPTG诱导大肠杆菌表达GST hBLyS融合蛋白 ,用此融合蛋白免疫BALB/c鼠 ,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,用ELISA法筛选阳性克隆 ,用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA序列测定以及表达蛋白SDS PAGE电泳结果表明 ,pGEX 4T 1/hBLyS重组质粒可以正确表达GST hBLyS融合蛋白 ;ELISA、免疫印迹和流式细胞仪检测结果表明 ,1c6杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T淋巴细胞膜表面BLyS的膜外区 ,属于IgG2b亚类。【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T淋巴细胞上的BLyS特异性 。

Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。

人BLyS基因真核细胞表达载体的构建和鉴定

目的 构建人BLyS基因真核细胞表达载体。方法 采用RT PCR方法 ,从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到 876bp的人BLyScDNA片段 ,再用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中 ,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果 人BLyScDNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中。

重组pET30a/hsBLyS质粒在BL21(DE3)菌株中的稳定性观察

将构建的含有pET30a/hsBLyS重组质粒的BL21 (DE3)菌种,在含硫酸卡那霉素的平板培养基划线连续传代至 100代 100代次菌种经显微观察,为典型的革兰氏阴性大肠杆菌,生化特性没有改变 提取0、50、100代质粒DNA限制性内切酶切割检查,酶切图谱没有改变,DNA测序未见hsBLyS基因变异 传代前后菌种诱导表达hsBLyS。