家蚕血液对BmE-SWU1细胞凋亡的抑制作用

以家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1细胞为体外模型,用不同浓度的放线菌素D处理家蚕BmE-SWU1细胞进行家蚕细胞凋亡研究。结果表明:放线菌素D诱导家蚕细胞凋亡的作用呈时间、剂量依赖性。分别用浓度为0、50、100和200ng/ml的放线菌素D处理BmE-SWU1细胞12h后,凋亡峰所占比例分别为1.82%、1.26%、8.21%和12.31%。当放线菌素D的浓度为100ng/ml时,诱导家蚕BmE-SWU1细胞凋亡的效果显著;家蚕血液对放线菌素D诱导的家蚕BmE-SWU1细胞凋亡具有明显的抑制作用。

不同浓度BME对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察含10ml/L血清的不同浓度的β一巯基乙醇(BME)对大鼠胚胎脊髓神经干细胞增殖和分化的影响.方法:从大鼠胚胎脊髓中分离神经干细胞,经过2～3次传代培养后,采用含10ml/L血清的不同浓度的BME分组对细胞进行体外诱导,选择3个时段观察细胞形态变化情况,诱导24h后采用GFAP和NSE免疫荧光染色法鉴定分化结果,同时对分化结果进行统计学分析.结果:用BME(0.5mmol/L)组和对照组血清诱导的神经元的百分率分别为49%和10%,而BME(1mmol/L)组的神经元分化率显著升高至58%.由BME(0.5mmol/L)组、BME(1mmol/L)组和对照组血清诱导的星形胶质细胞分化率分别为46%,35%和83%.结论:BME有明显诱导神经干细胞向成熟神经元分化的作用.配合血清使用可使细胞向神经原分化的趋势明显优于单纯使用血清,两者协同效应明显.

NGF和BME对小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用(英文)

目的探讨神经生长因子(NGF)β-疏基乙醇(BME)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mouse marrow mesenchymal stem cells, mMSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,用血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor, PDGF-BB)和表皮生长因子(Epidermal Growth Facotro, EGF)刺激促进mMSCs分裂增殖。以NGF和BME为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,甲苯胺蓝色法显示尼氏小体。结果免疫细胞化学显示:70%细胞表达NSE,74%细胞表达NF;实验组行尼氏染色出现尼氏小体。结论NGF和BME能诱导mMSCs 分化为神经元样细胞,而且具有较高的诱导效率。

BmOsi 9a基因在家蚕胚胎细胞周期中的功能研究

Osiris基因家族是一类昆虫特有且进化保守的基因家族。已知Osi 9亚家族基因在鳞翅目昆虫中发生特异扩增,产生高度同源的6个拷贝,且表达模式也具有同步性,但该基因家族扩增机制和生物学功能未知。为了揭示BmOsi 9a基因的生物学功能,本研究通过荧光定量分析和Western blot实验检测到BmOsi 9a在家蚕胚胎细胞(BmE)中有表达,免疫荧光分析发现BmOsi 9a主要存在于细胞质中,构建过表达及dsRNA干涉载体,结果显示过表达对细胞的表型和增殖没有显著影响,而转染干涉载体下调BmOsi 9a表达则使细胞的增殖受到显著影响。利用流式细胞技术分析发现G0/G1期细胞显著增加,S期细胞则显著减少,表明BmOsi 9a与BmE细胞的增殖相关。研究结果表明BmOsi 9a在细胞周期过程发挥作用,为进一步阐明BmOsi 9a生物学功能奠定了基础。

不同代数的成人骨髓间充质干细胞体外转化为神经细胞的实验研究

目的 探讨不同代数的成人骨髓间充质干细胞 ( h MSCs)体外向神经元细胞转化的效率 ,为骨髓间充质干细胞应用于临床提供可靠的实验数据。方法 采用 β-巯基乙醇做为诱导剂 ,选用第 2、4、6、8代 h MSCs在体外诱导 6 h后 ,用细胞化学及免疫组织化学检测神经元细胞、星形胶质细胞标记蛋白的表达。结果 第 2、4、6代h MSCs诱导后胞浆中均可见深蓝色的颗粒状尼氏体 ,第 8代 h MSCs诱导 6 h后胞浆中未见明显的深蓝色尼氏体结构。不同代数的 h MSCs经诱导 6 h后均表达 NSE、NF- M,不表达 GFAP;第 2、4、6代的阳性率无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ,第 8代与第 2、4、6代的阳性率有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 β-巯基乙醇在体外可定向诱导 h MSCs转化为神经元细胞 ,第 2、4、6代的阳性率明显高于第 8代。

人骨髓间充质干细胞的分离培养和向神经细胞分化的研究

目的 分离骨髓后培养人骨髓间充质干细胞 (hMSCs) ,进行体外传代扩增 ,并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法。方法 抽取人骨髓血 ,percoll paque液 (1 0 73g/ml)分离 ,DMEM/2 0 %FCS培养传代 ,至第 3～ 5代时加入巯基乙醇 (BME) ,观察hMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化。结果 hMSCs在体外可以实现数目扩增 ,在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化。结论 采用少量骨髓样本 ,经培养获得充足的细胞量 ,满足定向诱导和细胞移植的需要。

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究

目的:探讨体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mouse marrow mesenchymal stem cells,mMSCs)分化为神经元样细胞的条件。方法:密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,胰蛋白酶消化传代扩增mMSCs。用最适浓度的β-疏基乙醇(BME)+神经生长因子(NGF)、NGF+全反式维甲酸(ATRA)、NGF+BME+ATRA作为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)的表达,行甲苯胺蓝染色显示尼氏小体。结果:(1)免疫细胞化学显示NGF+BME+ATRA诱导组诱导效率最高,78%细胞表达NSE,80%细胞表达NF;(2)各诱导组尼氏染色均出现尼氏小体。结论:NGF、BME、ATRA能诱导mMSCs分化为神经元样细胞,其中以NGF(10μg/L)+BME(2.5mM/L)+ATRA(2.5M/L)组效率最高。

β-巯基乙醇和发情羊血清对牛颗粒细胞体外培养的影响

为满足实验室卵母细胞体外成熟共培养和胚胎共培养的需要以及进行卵巢颗粒细胞生物学功能等研究的需要,进行牛卵巢颗粒细胞的体外培养研究。在基础培养液TCM199中分别添加12.5、25、50、100、200μmol/L的β-巯基乙醇(BME),观察颗粒细胞生长状况;在基础培养液中分别添加体积分数为10%的发情山羊第1天血清、体积分数为10%的发情山羊第11天血清和体积分数为10%的胎牛血清,观察颗粒细胞生长和增殖情况。体外培养颗粒细胞的活细胞率随着添加BME浓度的增大而增加,在25μmol/L时达到最高,此后随浓度的增大而降低;发情山羊第1天的血清组中,颗粒细胞生长和增殖情况最好。BME可以提高颗粒细胞体外培养的活率,最佳添加浓度为25μmol/L;发情山羊第1天的血清可有效促进颗粒细胞体外培养生长和增殖。

苏云金杆菌蜡螟变种制剂毒力的离体生物测定

用碱和酶相继降解苏云金杆菌蜡螟变种制剂,然后作用细胞,能使细胞发生病变直至死亡。结果显示制剂浓度和细胞死亡率成良好的线性关系,经过5次平行实验证明,离体生测与活体无显著差异,可以用离体生测代替活体生测。

人骨髓基质细胞向神经细胞分化的方法学研究

目的改进采用人骨髓体外培养人骨髓基质细胞(hBMSCs),进行体外传代扩增,并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法.方法抽取人骨髓血,淋巴细胞分离液分离,DMEM/15%人血清培养传代,至第3～5代时加入巯基乙醇(BME),观察hBMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化.结果该方法hBMSCs在体外可以实现数目扩增,在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化.结论采用少量骨髓样本,既可培养获得充足的细胞量,可以满足定向诱导和细胞移植的需要.

人骨髓基质细胞向神经元分化的两种体外诱导方法比较

目的通过体外定向诱导人骨髓基质细胞(hBMSCs)使其分化为神经元,比较两种诱导方法。方法采用Percoll-Paque液(1.073g/ml)分离hBMSCs,体外扩增培养后,分别加入丁羟茴醚(BHA)+二甲基亚砜(DMSO)和β-巯基乙醇(BME)诱导hBMSCs分化为神经元,光镜下形态学观察,及免疫组化检测特异性神经元烯醇化酶(NSE),神经丝蛋白(NF),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果hBMSCs在加入两种诱导剂后均有胞体收缩,突起伸出,NSE,NF,GFAP均有不同程度阳性率,但丁羟回醚+二甲基亚酚组的细胞存活率高,神经元阳性率(诱导成功率)高。结论丁羟茴醚+二甲基亚酚是一种较好的体外诱导hBMSCs分化为神经元的诱导剂。