家蚕核型多角体病毒BmOrf99的研究

[目的]探讨家蚕核型多角体病毒Bm Orf99在杆状病毒生命周期中的功能。[方法]运用Red同源重组技术构建Bm Orf99缺失型重组病毒,研究Bm Orf99对病毒复制、BV产生和病毒形态发生的影响。[结果]病毒转染细胞1.5 h可检测到Bm Orf99表达;通过Red重组系统构建敲除型病毒Bm NPV-Bm Orf99KO-polh-GFP,转染结果显示,敲除Bm Orf99病毒仍能增殖复制,透射电镜观察显示,Bm Orf99敲除对病毒粒子装配和多角体形成无明显影响。病毒DNA转染后24-72 h,敲除型病毒转染细胞培养上清BV水平略高于对照病毒Bm NPV-Bm Orf99WT-polh-GFP;转染后72 h,前者细胞培养上清TCID50略高于后者;转染6-72 h,敲除型病毒转染细胞中病毒DNA水平高于对照病毒转染细胞;敲除型病毒感染72 h后,细胞中Bm Orf98a表达水平比对照组提高2.21倍。[结论]Bm Orf99为病毒早期基因,且复制非必需,缺失可促进病毒DNA复制,略增加BV水平,但对病毒形态发生无影响,Bm Orf-99有可能通过调节病毒其他基因的表达而发挥作用。