BMI-1抑制剂PTC-596对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 分析BMI-1抑制剂PTC-596对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为肿瘤细胞模型,正常培养为阴性对照组,25、50 nmol/L PTC-596处理SGC-7901细胞48 h为低、高药物浓度实验组。利用CCK8法分析细胞增殖能力;流式细胞术分别结合PI单染、DCFHDA探针、JC-1探针以及PI/FITC-Annexin V双染分析细胞周期、活性氧(reactive oxygen species, ROS)累积、线粒体膜电位和凋亡细胞比例;Western blot法检测细胞BIM-1蛋白和周期相关蛋白CyclinD1、CyclinB1、P21以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、c-PARP蛋白相对表达水平。结果 与对照组相比,PTC-596高效抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,处理48 h后IC_(50)为(49.33±7.02)nmol/L。低、高药物浓度实验组细胞中BMI-1表达显著减少(P <0.01)。实验组细胞中CyclinB1和P21相对表达增加,CyclinD1表达减少,细胞有丝分裂被抑制,出现G_2/M期周期阻滞;同时活性氧累积增多,线粒体膜电位下降,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,c-PARP增加,凋亡细胞比例从2.04%显著上升为10.56%、26.74%。与对照组相比较,以上结果差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 PTC-596高效杀伤人乳腺癌MCF-7细胞,其机制可能与抑制BMI-1、诱导细胞周期阻滞和内源性线粒体途径细胞凋亡密切相关。

Bmi-1在正常胃组织和胃癌及其癌前病变中的表达及意义

目的：检测Bmi-1在正常胃粘膜、胃癌及癌前病变中的表达，分析探讨Bmi—1与核增殖抗原ki-67和凋亡抑制基因Bcl-2之间的关系，以及Bmi-1^＋细胞与Bcl-2^＋／ki-67^-细胞分布之间的关系，探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法：采用免疫组化Envision法检测162例胃癌及配对正常胃粘膜中Bmi-1和ki-67的表达，采用免疫组化双染法观察Bcl-2^＋／ki-67^-细胞的分布。结果：胃癌组织中Bmi-1表达（52．5％）明显高于正常胃粘膜（21．6％），P〈0．05；胃癌中Bmi-1表达与Lauren分型、Borrmann分型和胃癌临床病理分期有关（P〈0．05）。胃癌中ki-67表达与Borrmann分型有关（P〈0．05）。Bcl-2在胃癌中的表达与胃癌Lauren分型有关（P〈0．05）。在胃癌组织和肠化生粘膜中，Bmi-1与Bcl-2呈正相关（P〈0．05）。结论：胃癌及其癌前病变中Bmi-1表达可能与细胞增殖、凋亡和癌变有关。在胃癌和肠化生粘膜中Bmi-1和Bcl-2表达的相关性以及Bmi-1^＋细胞和Bcl-2^＋／ki-67^-细胞分布之间的关系提示Bmi-1与胃癌的发生密切相关。

靶向miRNA干扰Bmi-1表达对人胆囊癌细胞增殖效应的影响

目的:通过体外RNAi干扰技术靶向抑制原癌基因Bmi-1表达,观察其对胆囊癌细胞增殖的效应及对细胞周期的影响。方法:针对Bmi-1不同位点构建4个miRNABmi-1重组质粒,采用RT-PCR和Western blot检测各组Bmi-1 mRNA和蛋白表达,选择干扰效果最明显组质粒转染胆囊癌GBC-SD细胞,48 h后采用BrdU及流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期变化。结果 :RT-PCR显示miRNABmi-1重组质粒1、3、4组mRNA表达明显低于对照组(P<0.05);Western blot显示miRNABmi-1重组质粒2、3、4组蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);选取第4组(mRNA及蛋白表达抑制效果最强)质粒转染GBC-SD细胞,BrdU显示mRNABmi-1-4组细胞增殖抑制明显,增殖率为46.63±5.31,明显低于对照组(P<0.05);细胞周期显示miRNABmi-1-4组G0/G1期细胞增加(72.20±1.71),G2/M和S期细胞减少(18.30±7.21,9.50±6.01),与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论:靶向沉默Bmi-1表达,能有效抑制胆囊癌细胞增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1期,Bmi-1可能成为胆囊癌基因治疗的有效靶点。

Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用

目的探讨Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的作用及机制。方法将不同浓度的Bmi-1-siRNA转染MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学技术检测转染72 h后MCF-7细胞内Bmi-1、端粒酶逆转录酶(hTERT)、细胞增殖相关核抗原Ki-67蛋白的表达。结果Bmi-1-siRNA对MCF-7细胞的生长抑制率明显升高,且随浓度增高而升高(P<0.05);MCF-7细胞中Bmi-1、hTERT、Ki-67蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论Bmi-1-siRNA可有效抑制MCF-7细胞的增殖,其机制为降低Bmi-1 mRNA及Bmi-1、hTERT蛋白的表达。

乳腺癌组织中原癌基因BMI-1及人表皮生长因子受体-2表达与外周血微转移的关系

目的观察乳腺癌患者乳腺癌组织中原癌基因BMI-1、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)阳性表达情况,探讨乳腺癌组织BMI-1、HER-2与外周血微转移的关系。方法89例乳腺癌患者,均采用实时荧光定量PCR法检测人乳腺珠蛋白mRNA相对表达量;依据检测结果,89例患者中发生外周血微转移者41例为微转移组,未发生外周血微转移者48例为无微转移组。比较2组血清缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)水平,乳腺癌组织BMI-1、HER-2阳性表达率;多因素logistic回归分析乳腺癌患者发生外周血微转移的影响因素。结果微转移组血清HIF-1α[52.32(49.61,59.12)ng/L]、MMP-9[50.12(46.95,55.74)μg/L]水平及乳腺癌组织BMI-1、HER-2阳性表达率(78.05%、85.37%)均高于无微转移组[47.89(43.12,53.41)ng/L、48.12(43.21,51.06)μg/L、43.75%、47.92%](P<0.05)。血清HIF-1α(OR=1.780,95%CI:1.695~1.876,P=0.003)、MMP-9(OR=1.611,95%CI:1.521~1.913,P=0.004)及乳腺癌组织BMI-1(OR=7.000,95%CI:2.314~21.179,P=0.001)、HER-2(OR=9.666,95%CI:3.225~28.971,P<0.001)是乳腺癌患者发生外周血微转移的影响因素。结论乳腺癌患者癌组织BMI-1、HER-2表达升高;乳腺癌组织BMI-1、HER-2与乳腺癌患者发生外周血微转移有关。

原癌基因Bmi-1在肿瘤形成中的研究进展

Bmi-1即B细胞特异的莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1基因（B-cell specific moloney murine leukemiavirus insertion site-1,Bmi-1）是一种癌基因,属于多梳基因家族（polycomb group genes Pc G）成员之一,是PRCI complex或E2F6 complex的组成成员,可调节同源盒（HOX）基因的转录[1]。

靶向miRNA干扰Bmi-1诱导胆囊癌细胞凋亡及上调Caspase-3表达的研究

目的:通过靶向抑制原癌基因Bmi-1表达,观察其诱导胆囊癌细胞凋亡及上调Caspase-3蛋白表达的效应,探讨其在胆囊癌形成中的机制。方法:通过前期成功构建miRNA-Bmi-1重组质粒转染GBC-SD细胞,然后将其分为miRNABmi-1、miRNAScramble、Lipofectamine、GBC-SD 4组,转染48h后采用RT-PCR和Western blot法检测各组Bmi-1mRNA和蛋白的表达,倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞技术检测细胞的凋亡率、细胞周期分布及Caspase-3蛋白表达水平。结果:RT-PCR和Western blot结果显示miRNABmi-1组细胞Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。倒置显微镜观察显示miRNABmi-1组细胞死亡较对照组明显;细胞周期检测显示:miRNABmi-1组细胞阻滞于G0/G1(72.20±1.71),G2/M和S期细胞减少(18.30±7.21,9.50±6.01),凋亡指数增高(49.83±5.19),Caspase-3蛋白表达量明显增加(30.37±8.10),与对照组比较,具有显著性差异(P<0.05)。结论:靶向沉默Bmi-1能有效抑制胆囊癌细胞Bmi-1mRNA及蛋白表达,诱导胆囊癌细胞凋亡,其机制可能是早期使胆囊癌细胞周期阻滞于G0/G1期,并上调了Caspase-3蛋白表达,Bmi-1可能参与调控线粒体依赖的凋亡途径。