益骨汤对去势大鼠骨密度及经典BMP2信号通路的影响

目的观察益骨汤对去势大鼠骨组织中经典骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)2信号通路的影响,旨在探讨益骨汤防治骨质疏松症(osteoporosis,OP)的作用机制。方法将44只12周龄雌性Wistar大鼠随机分为四组,每组11只。正常组不进行任何处理,模型组、戊酸雌二醇组和益骨汤组大鼠进行去势手术以模拟骨质疏松。造模成功后,分别以10ml/kg双蒸水灌胃(正常组、模型组)、0.36mg/kg戊酸雌二醇水溶液灌胃及10ml/kg益骨汤灌胃,1次/d。12周后,双能X射线骨密度仪测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD),实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测BMP2经典信号通路BMP2、Smad1、Runx2、OSX基因的表达,免疫组织化学法、Western blot法检测BMP2经典信号通路BMP2、Smad1、Runx2、OSX蛋白的表达量。结果①双能X射线骨密度仪测定股骨骨密度,结果显示,与模型组比较,益骨汤组大鼠的BMD升高(P<0.01)。②实时荧光定量PCR检测,与模型组比较,益骨汤组大鼠的BMP2、Smad1、Runx2、Noggin基因表达量升高(P<0.05)。③免疫组织化学法检测:与模型组比较,益骨汤组大鼠的BMP2、Smad1、Runx2、OSX蛋白表达量升高(P<0.05)。④Western blot法检测:与模型组比较,益骨汤组大鼠的Smad1、Runx2、OSX蛋白含量升高(P<0.05)。结论益骨汤可能通过激活BMP2经典信号通路及抑制Noggin的高表达,促进骨形成和防治骨质疏松。

BMP2-PLGA/Doxy-PLGA纳米微球联合CS/β-GP复合温敏水凝胶的制备及性质检测

目的 制备BMP2-PLGA/Doxy-PLGA纳米微球混合CS/β-GP复合温敏水凝胶,并检测其性质。方法复乳法分别制备BMP2-PLGA、Doxy-PLGA纳米微球,通过扫描电镜、粒度仪、重量变化测定其表征、粒径、降解率。交联法制备CS/β-GP温敏水凝胶,通过倒置法、重量变化测定凝胶时间及降解率。所获的纳米微球与水凝胶混合获得复合水凝胶,分8组:BMP2-PLGA与Doxy-PLGA比例各为3:1、2:1、1:1、1:2、1:3的复合水凝胶、BMP2-PLGA水凝胶、Doxy-PLGA水凝胶、PLGA水凝胶。Elisa和紫外分光法测定释药曲线。各组分别与MC3T3细胞共培养后CCK8法检测细胞毒性。TNF-α营造炎性环境,正常营养环境与炎性环境下与MC3T3细胞共培养后,qRT-PCR检测成骨基因ALP和OCN的表达。结果 空白PLGA、BMP2-PLGA、Doxy-PLGA均无细胞毒性,平均粒径无统计学差异。BMP2-PLGA/Doxy-PLGA复合水凝胶37℃下4 min内形成凝胶,体外缓释BMP2达49天、 Doxy达56天,无细胞毒性。炎性及非炎性环境下与MC3T3细胞共培养1天后,BMP2-PLGA与Doxy-PLGA比例为1:1的复合水凝胶组细胞ALP、OCN表达水平相比对照组明显增加,其余各组间无统计学差异,共培养3、7天后,各组表达水平相比对照组都明显增加,其中BMP2-PLGA与Doxy-PLGA比例为1:1的复合水凝胶组的表达水平最高,具有统计学差异。结论 BMP2-PLGA/Doxy-PLGA混合CS/β-GP水凝胶可以获得无细胞毒性缓释效果好的复合温敏水凝胶,该材料可以显著促进炎性环境下细胞的体外成骨分化。

Bmp2影响脂肪干细胞成骨能力的研究

目的探究在大鼠脂肪干细胞内过表达骨形态发生蛋白2(Bmp2)后成骨基因的表达情况以及成骨能力的变化。方法通过电转染Bmp2至大鼠脂肪干细胞内,以空白组作为对照,分为空白对照组(Control组)、空载组(Vector组)、成骨诱导组(Inducement组)、过表达组(Bmp2组),采用Western blot、qRT-PCR及免疫荧光对比成骨基因表达情况,采用碱性磷酸酶染色与茜素红染色观察硫化钴沉淀及钙盐沉积情况。结果Western blot与qRT-PCR检测显示,与Control组相比,Bmp2组的Bmp2、Bmp4、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)、矮小相关转录因子2(Runx2)、磷酸化大鼠信号转导分子1/5(P-Smad1/5)、远端缺失同源框2(Dlx2)、骨涎蛋白(BSP)表达显著增高(P<0.05),而Smad1/5的表达情况差异无统计学意义;免疫荧光检测显示,与Control组相比,Bmp2组的OPN、Runx2荧光强度显著增高(P<0.05);茜素红染色及碱性磷酸酶染色结果显示,与Control组相比,Bmp2组细胞周围钙盐沉积增多,硫化钴沉淀增多,碱性磷酸酶活性增强。结论过表达Bmp2增强了脂肪干细胞的成骨基因表达,提高了其成骨能力。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

大骨鸡和AA+肉鸡骨骼性状差异及BMP2 mRNA表达研究

为研究大骨鸡和AA+肉鸡的骨骼性状差异以及骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA的表达与骨骼性状的相关性,选取大骨鸡和AA+肉鸡1日龄公雏鸡进行舍饲笼养,在0~7周龄(w)随机挑选大骨鸡和AA+肉鸡各5只,在8~24 w随机挑选大骨鸡5只,限饲12 h后进行屠宰。屠宰后对其股骨、胫骨和跖骨的重量、长度和强度进行测定,并采用实时荧光定量PCR方法检测胫骨组织中BMP2 mRNA相对表达量。结果显示:0~24 w大骨鸡和0~7 w AA+肉鸡的股骨、胫骨及跖骨的重量、长度和强度均呈现相似但不同的生长趋势和回归公式。按体重相近原则,建立了0~24 w大骨鸡和0~7 w AA+肉鸡周龄配对表。大多数配对周龄中,大骨鸡各骨骼重量、长度和强度均极显著高于AA+肉鸡(P<0.01)。大骨鸡和AA+肉鸡胫骨组织BMP2基因相对表达量与骨骼性状均呈现极显著正相关(P<0.01)。4~7 w AA+肉鸡BMP2 mRNA相对表达量均极显著高于大骨鸡(P<0.01)。提示:BMP2可能是影响鸡骨骼生长的重要功能基因。

异补骨脂素介导BMP2/Runx2/Osx信号通路促进成骨细胞增殖和分化的研究

目的本实验旨在探讨异补骨脂素对成骨细胞增殖和分化的影响及其可能的作用机制。方法常规复苏培养前成骨细胞株OCT1细胞,分别给予异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))、中剂量(30μg·mL^(-1))和高剂量(60μg·mL^(-1))进行干预48 h,同步采用骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)纯化蛋白(50 ng·mL^(-1))为阳性对照。MTT法观察细胞增殖情况;实时荧光定量RT-PCR反应检测BMP2、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix,Osx)mRNA的表达;Western blot检测Runx2和Osx蛋白的表达;从BMP2^(loxp/loxp)小鼠中分离培养原代颅盖骨成骨细胞,利用体外条件性基因敲除技术敲除BMP2基因后,给予最佳浓度的异补骨脂素干预48 h后,采用实时荧光定量RTPCR反应检测Runx2和Osx基因表达的情况,并利用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色观察成骨细胞中ALP活性变化的情况。结果MTT法检测结果显示,异补骨脂素能促进成骨细胞的增殖,但以低剂量(10μg·mL^(-1))组最明显(P<0.05);实时荧光定量RT-PCR反应结果表明,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞BMP2 mRNA的表达,以前者作用最佳(P<0.05)。异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))可明显促进成骨细胞Runx2 mRNA的表达(P<0.05)。异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞Osx mRNA的表达。Western blot检测结果显示,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞中Runx2蛋白的表达。此外,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))、中剂量(30μg·mL^(-1))和高剂量(60μg·mL^(-1))均可提高Osx蛋白的表达量。体外条件性基因敲除实验结果显示,异补骨脂素诱导的成骨细胞Runx2和Osx基因以及ALP染色高表达呈BMP2的依赖性。结论异补骨脂素可以促进成骨细胞增殖和分化,并可能通过BMP2/Runx2/Osx信号通路而发挥作用。

负载rh-BMP2的羟基磷灰石人工骨治疗胫骨平台骨折骨缺损的临床疗效研究

目的通过与羟基磷灰石生物陶瓷人工骨对比,评估负载rh-BMP2的羟基磷灰石人工骨对胫骨平台骨折骨缺损修复的临床疗效。方法回顾性分析2014年10月至2019年9月中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院骨科收治的53例SchatzkerⅤ、Ⅵ型胫骨平台骨折骨缺损患者,所有患者均进行骨折切开复位内固定术并予术中植骨,其中27例患者术中予负载rh-BMP2的羟基磷灰石人工骨植骨(研究组),另26例患者予羟基磷灰石生物陶瓷人工骨植骨(对照组)。对比两组患者骨折愈合时间、膝关节HSS功能评分、Rasmussen影像学评分及术后并发症发生情况。结果所有患者获得随访,平均随访时间为(10.45±2.31)个月,所有患者最终均骨性愈合。研究组的骨折愈合时间[(13.46±3.38)周]明显短于对照组[(16.67±6.51)周](P<0.05);术后6个月时研究组HSS评分[(85.53±5.30)分]优于对照组[(80.58±6.40)分](P<0.05)。术后6个月时两组的Rasmussen影像学评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),同时两组患者随访期间出现并发症情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相较于羟基磷灰石人工骨治疗胫骨平台骨折骨缺损,负载rh-BMP2的羟基磷灰石人工骨植入后骨折愈合时间更短,膝关节功能恢复更佳,同时未增加并发症发生风险。其可视为一种良好的人工骨修复材料。

不同阶段糖尿病肾病患者血清25-OH-D3、BMP2、RBP4及超声骨密度测定与分析

目的分析不同阶段糖尿病肾病(DN)患者血清25-羟维生素D3(25-OH-D3)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、超声骨密度的变化。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月保定市第一中心医院收治的40例单纯糖尿病患者为A组,40例DN微量尿蛋白患者为B组,40例DN大量尿蛋白患者为C组,40例正常体检者为对照组,比较4组骨代谢指标[总I型胶原氨基端延长肽(PINP)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)]、骨密度指标(股骨近端骨密度)、血清25-OH-D3、BMP2、RBP4水平,并分析血清25-OH-D3、BMP2、RBP4与骨代谢指标、骨密度指标相关性。结果C组PINP水平为(24.53±6.02)μg/L,低于B组、A组、对照组[(28.97±5.11)、(32.59±5.81)、(33.54±5.46)μg/L],β-CTX水平为(420.15±42.86)μg/L,高于B组、A组、对照组[(387.65±49.87)、(326.87±42.07)、(336.58±36.15)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05);C组股骨近端骨密度为(0.71±0.11)g/cm2,低于B组、A组、对照组[(0.86±0.17)、(0.88±0.21)、(0.90±0.18)g/cm2],差异有统计学意义(P<0.05)。C组25-OH-D3、RBP4水平分别为(7.26±2.09)、(4.92±1.33)μg/L,低于B组[(12.38±2.84)、(7.42±2.21)μg/L]、A组[(12.99±3.01)、(7.67±2.06)μg/L]、对照组[(10.36±2.47)、(5.97±1.59)μg/L],BMP2水平为(40.07±5.81)μg/L、高于B组、A组、对照组[(37.11±5.29)、(34.05±6.27)、(33.25±6.14)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析,25-OH-D3、RBP4与PINP、股骨近端骨密度呈正相关(P<0.05),与β-CTX呈负相关(P<0.05);BMP2与PINP、股骨近端骨密度呈负相关(P<0.05),与β-CTX呈正相关(P<0.05)。结论DN患者随病情进展,骨量丢失增加,骨密度下降,血清25-OH-D3、BMP2、RBP4水平与骨密度、骨代谢有关,早期通过测定以上因子水平可敏感反映DN患者骨质变化,以便对骨质疏松尽早预防和诊疗。

BMP2/SMAD1信号通路在绝经性骨质疏松中的蛋白互作功能

目的通过生物信息学角度挖掘骨形态发生蛋白(BMP)2、Smad同源蛋白(SMAD)1蛋白生信数据,解析BMP2/SMAD1信号通路蛋白互作功能在骨质疏松中发挥的作用及影响。方法基于UniPort数据库进行检索,联合STRING、Ensemble、SWISS-MODEL等数据库,挖掘BMP2、SNAD1理化信息并结合相关文献进行分析。构建BMP2/SMAD1蛋白互作通路等。查询BMP2/SMAD1信号通路在骨质疏松中的表达,利用CNKI、Web of science、万方数据库、Springer、Elsevier SD等数据库检索相关文献。中文检索关键词为“BMP2蛋白、SMDA1蛋白、骨质疏松”,英文检索关键词为“BMP2、SMAD1、Osteoporosis”。排除重复性文献、与主题无关性文献。结果获取BMP2、SMAD1基本信息,绘制分子、生物功能图;构建二元互作蛋白通路图及BMP2/SMAD1信号通路网络图;将糖基化磷脂酰肌醇锚蛋白(RGMB)、血色素沉着(HFE2)、泛素连接酶(SMURF)1、SMURF2、丝裂原活化蛋白激酶分子(MAP3K7)、锌指蛋白(ZNF)521蛋白作为潜在关键位点蛋白进行下一步研究;SMAD家族蛋白作为受体位点在BMP通路中发挥关键作用;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)间接参与BMP2/SMAD1通路调控成骨分化。结论BMP2/SMAD1信号通路中,位于胞外的BMP2蛋白与细胞膜上受体蛋白BMPR1、BMPR2蛋白结合,通过磷酸化激活胞质中SMAD1/5与SMAD4协同调控核内铁代谢;SMAD6/7抑制SMAD1/5协同调控成骨分化表达。在BMP2/SMAD1信号通路蛋白互作网络中,除同族蛋白外,以RGMB、HFE2、SMURF1、SMURF2、MAP3K7、ZNF521为代表的蛋白参与其中,可作为深入研究对象解析BMP2/SMAD1信号通路。在骨质疏松发生过程中,除BMP2/SMAD1信号通路外,包括但不限于MAPK通路的参与,而MAPK的关键作用还有待深究。

血清BMP2表达水平与帕金森病的相关性研究

目的 探讨骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)表达水平与帕金森病(Parkinson′s disease, PD)的相关性。方法 2019年1月-2022年12月在新疆医科大学第二附属医院神经内科门诊就诊的178例PD患者为PD组;来自相同地区且同一时间段无PD临床表现及PD家族史,并在性别、年龄上相互匹配的185例健康体检者为对照组。比较两组BMP2和α突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)的表达水平差异。采用两变量的线性相关性分析,探讨BMP2和α-syn的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估BMP2和α-syn表达水平对PD的预测价值。采用二元Logistic回归分析评估BMP2对α-syn的影响。比较分析BMP2表达水平在PD组不同Hoehn-Yahr分期和简易精神状态检查量表(Mini-mental state examination, MMSE)评分间的差异。结果 PD组BMP2表达水平低于对照组(t=-5.582,P<0.001),而PD组α-syn表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=3.669,P=0.001)。相关性分析结果显示,BMP2和α-syn呈负相关(r=-0.351,P<0.001)。ROC分析结果显示,BMP2的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.599(0.540~0.657)。α-syn的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.658(0.602~0.714)。二元Logistic回归分析结果显示,BMP2可影响α-syn表达水平,即高水平的BMP2对抑制α-syn的升高有保护作用(OR=0.951,P=0.001)。随着Hoehn-Yahr分期的增高,PD组患者BMP2表达水平逐渐下降,差异有统计学意义(F=24.956,P<0.001);PD组患者不同MMSE评分之间的BMP2表达水平差异无统计学意义(F=1.138,P=0.323)。结论 BMP2表达水平与PD的进展有关,且高水平的BMP2对于抑制α-syn的升高有保护作用。

骨形态发生蛋白2(BMP2)基因在内蒙古绒山羊不同时期皮肤毛囊中的表达

【目的】研究内蒙古绒山羊毛囊发育兴盛期和休止期BMP2基因在皮肤毛囊中的表达情况。【方法】功能分类基因芯片以及原位杂交技术。【结果】原位杂交结果表明,该基因在休止期毛囊毛干周围高表达,在兴盛期不表达;基因芯片结果显示,同兴盛期相比,休止期BMP2基因在皮肤中表达上调24.65倍。【结论】BMP2基因抑制内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育,与维持皮肤毛囊处于休止期有关;该基因主要在皮肤毛囊的毛干周围发挥作用,从而达到维持皮肤毛囊发育处于休止期的作用。

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组(P<0.01),且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组(P<0.01),而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异(P>0.05);相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r=0.741,P<0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。

内蒙古绒山羊毛囊不同发育时期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达

采用功能分类基因芯片方法,分析内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育兴盛期和休止期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达,探讨其对毛囊发育的作用方式。结果表明:与兴盛期相比,休止期BMP2、Noggin及SHH基因表达分别上调24.61倍、下调0.16倍、下调0.22倍。BMP基因可抑制毛囊发育,且与维持毛囊处于休止期有关;在毛囊发育兴盛期,Noggin基因起强抑制BMP2基因表达的作用;在毛囊发育过程中,Noggin对BMP2基因的抑制作用至少是部分通过SHH实现的。

BMP2基因在鹅胸、腹、背部皮肤中的定位定量表达研究

运用免疫组化和荧光定量PCR方法，研究了吉林白鹅生后期胸、腹、背皮肤中BMP2基因的定位表达及mRNA变化规律。结果表明：BMP2基因在鹅胸、腹、背部皮肤初级毛囊和次级毛囊发育过程中均有表达，BMP2在毛囊中羽枝嵴和羽轴嵴部位表达，而羽枝嵴将来发育成羽枝，推断BMP2与羽枝发育有关。7日龄时背部BMP2的m／~NA相对基因表达量为5．52t7，分别是胸部的3．42倍和腹部的7．56倍。此时胸腹部毛囊处于快速发育阶段，BMP2则抑制毛囊发育；28日龄腹部BMP2相对基因表达量明显高于背部和胸部，此时腹部已有羽小钩出现，BMP2可能参与羽毛分支；63日龄BMP2的mRNA相对表达量胸部高于腹部和背部，此时胸部羽手发育已基本成熟．而腹部和背部晚1～2周成熟。

BMP2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的 研究BMP2在室管膜前下区 (SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用 ,提高SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。方法 体外分离培养SVZa神经干细胞 ,以不同浓度的BMP2诱导SVZa神经干细胞 ,采用免疫荧光和流式细胞仪技术 ,检测SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果 BMP2浓度为 1～ 10ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例均高于 0ng ml ,10ng ml时达到最高峰 ,2 0～ 10 0ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例亦高于 0ng ml,但呈下降趋势。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向神经元分化 。

金匮肾气丸调控FNDC5、BMP2对BMSCs成骨分化的作用

目的研究金匮肾气丸通过调控FNDC5、BMP2基因对BMSCs成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,分别用大鼠空白血清和高、低剂量金匮肾气丸干预BMSCs成骨分化过程。采用CCK8检测金匮肾气丸对BMSCs的增殖、毒性作用;AKP活性检测细胞上清成骨分化活性;ALP染色检测细胞成骨分化能力;反转录-实时荧光定量技术(RT-q PCR)检测FNDC5、BMP2 mRNA表达;Western-blotting检测FNDC5、BMP2蛋白表达。结果 CCK8结果示,从第1天到第7天,各组细胞增殖整体呈上升趋势,7天后各组细胞增殖呈下降趋势,且各组增殖(OD值)无统计学差异。含药血清干预BMSCs 3天时,SG组AKP活性明显高于CON(P<0.01),SD组与CON组差异虽无统计学意义,但高于CON组;7天时,SG和SD两组AKP活性均高于CON组(P<0.05);ALP染色结果示:SG组和SD组ALP染色阳性率均高于CON组,而SG组ALP染色率高于SD组。干预3天时,SD组FNDC5 mRNA表达较CON、SG组显著上调(P<0.05);7天时,SD、SG组FNDC5mRNA表达均较CON组显著上调(P<0.05),SD组高于SG组(P<0.05)。3、7天时SG、SD组BMP2 mRNA表达均较CON组显著上调(P<0.01)。干预第3、7天时,SG、SD组FNDC5、BMP2蛋白水平均明显高于CON组(P<0.05)。结论金匮肾气丸含药血清可能通过上调FNDC5、BMP2基因水平来促进BMSCs成骨增殖、分化。

补肾健脾活血方干预过表达DKK1骨细胞对细胞活性及BMP2的影响

目的用补肾健脾活血方干预过表达的DKK1腺病毒转染的成骨细胞,通过观察细胞的活性及BMP2的表达,研究补肾健脾活血方治疗骨质疏松的分子生物学机制。方法将培养细胞分成NC对照组,Ad-DKK1组两组。NC对照组由空载腺病毒转染;Ad-DKK-1组由包装过表达的DKK1腺病毒转染。每组分别用含药血清和空白血清干预。采用CKK-8检测细胞增殖,蛋白印记法检测BMP2的表达。结果各组细胞活性变化:空白血清和含药血清干预均能提高细胞活性。与空白血清分别干预的两组比较,含药血清分别干预后的两组,在24 h,48 h,72 h的细胞活性的增加倍数都较多;在采用蛋白印记法检测后,BMP2在含药血清分别干预的两组的相对表达量较空白血清分别干预的两组的相对表达量高(P<0.01,P<0.01),在NC对照组中含药血清干预与空白血清干预无明显差异。结论补肾健脾活血方含药血清可以提高细胞活性,提高BMP2的相对表达量,有利于成骨细胞的矿化,尤其在过表达DKK1干预后。补肾健脾活血方可能通过调控DKK1进而影响成骨细胞的代谢。

BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的调控作用

目的研究BMP2在SVZa神经干细胞向γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化中的调控作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠室管膜下区(SVZa)神经干细胞,纯化传代培养3代后,使用不同浓度BMP2诱导SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测不同浓度BMP2作用下SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例;另外利用活体荧光GFP标记GAD67特异性启动子,动态地研究BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用。在此基础之上,采用RT-PCR检测不同浓度BMP2作用下Mash1的表达。结果不同浓度BMP2作用组分化为GABA能神经元的比例均高于空白对照组,10 ng/ml浓度的BMP2组比例最高;10 ng/ml浓度BMP2组,GAD67-GFP标记阳性细胞数目明显高于对照组;10ng/ml浓度BMP2组Mash1表达高于其他组。结论BMP2促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元的分化;10 ng/ml浓度的BMP2显著促进Mash1的表达。

活血通络汤中药对激素性股骨头坏死造模家兔中BMP2和Jagged1表达的影响

目的:探讨中药预防性治疗激素性股骨头坏死(SANFH)的疗效及作用机制。方法:将192只日本大耳兔随机分为模型组A(48)、模型组B(48)、模型对照组C(48)、空白对照组D(48),A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,A、B、C组第3周开始造模,每组分别于第2周末、第5周末、第8周末随机抽取8只取双侧股骨头标本,做病理镜检及计算空骨陷窝率,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)对兔血清BMP2的含量进行测定,实时荧光定量PCR(RT-PCR)对兔血清Jagged1蛋白基因表达进行测定。结果:病理镜检及空骨陷窝率显示造模成功,BMP2阳性表达的强度及面积均明显高于造模组,结果有统计学意义(P<0.05),模型组A、模型组B、模型对照组C的Jagged1均呈上调趋势。结论:1表明活血通络汤中药对股骨头坏死的预防治疗作用确切;2活血通络汤中药可能是通过促进Jagged1的上调并维持股骨头BMP2浓度,共同促进骨修复和血管生成起治疗作用。

骨形态发生蛋白2(BMP2)基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育不同时期的表达

为探讨调节内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育相关基因及其作用机理,采用原位杂交和荧光实时定量PCR方法对BMP2基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达情况进行了检测,分析了其可能的作用方式。原位杂交结果表明,该基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育休止期毛干周围有强烈的表达信号,在兴盛期不表达;荧光实时定量PCR结果显示,该基因在休止期皮肤毛囊的表达量是兴盛期的27.8倍。综合上述试验结果,推测BMP2基因在毛囊发育过程中主要起抑制毛囊生长发育、维持毛囊处于休止期的作用,且可能参与新一轮的毛囊重建,因此,可将BMP2基因作为绒山羊育种过程中提高其产绒量的一个潜在的分子靶点。