利用酵母双杂交系统筛选与BnSmD1相互作用的蛋白

本研究以油菜BnSmD1为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术,从甘蓝型油菜cDNA文库中筛选出与之有相互作用的Arf-GTP酶激活蛋白1(Brassica napus ADP-ribosylation factorGTPase activating proteinl,BnArf GAP1),采用RT-PCR扩增并克隆到3个油菜ArfGAP基因的开放阅读框全长序列,BnArf GAP1、BnArf GAP2和BnArfGAP3.BnArfGAP1和BnArfGAP2都拥有1个507bp的开放阅读框,编码168个氨基酸残基;与前两个基因相比,BnArfGAP3核苷酸序列中插入了一个93bp的带有终止密码子的外源片段,导致翻译的提前终止,它拥有1个249bp的开放阅读框,编码82个氨基酸残基.BnArfGAP1和BnArfGAP2核苷酸序列一致性达到98.22%;BnArfGAP1与BnArfGAP3核苷酸序列一致性达到82.83%,BnArf GAP2与BnArf GAP3核苷酸序列一致性达到84.17%.BnArfGAP1、BnArf GAP2和BnArf GAP3都含有一个C2结构域.