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PCR克隆高GC含量牛Fcγ2R cDNA
被引量:
2
1
作者
乔松林
张改平
+6 位作者
王丽
张红
张华
付彦峰
郭军庆
王选年
夏春
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2005年第5期67-69,共3页
根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3...
根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3个碱基突变。
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关键词
牛IgG
FC
γ2
r
克隆
下载PDF
职称材料
牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶
2
作者
黄晓静
李睿
+4 位作者
马红芳
冯丽丽
乔松林
邓瑞广
张改平
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2019年第8期1-7,共7页
【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果...
【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%TacsimateTM(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。
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关键词
牛IgG
2
FC受体
蛋白表达
蛋白结晶
下载PDF
职称材料
题名
PCR克隆高GC含量牛Fcγ2R cDNA
被引量:
2
1
作者
乔松林
张改平
王丽
张红
张华
付彦峰
郭军庆
王选年
夏春
机构
中国农业大学动物医学院
河南省动物免疫学重点实验室
聊城出入境检验检疫局
出处
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2005年第5期67-69,共3页
基金
国家杰出青年基金项目 ( 30 12 5 0 35 )
国家自然科学基金重点项目 ( 30 2 30 2 70 )
文摘
根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3个碱基突变。
关键词
牛IgG
FC
γ2
r
克隆
Keywords
bofcγ2r
PC
r
Cloning
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶
2
作者
黄晓静
李睿
马红芳
冯丽丽
乔松林
邓瑞广
张改平
机构
河南农业大学牧医工程学院
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2019年第8期1-7,共7页
基金
河南省自然科学基金重点项目(182300410001)
河南省农业科学院科研发展专项资金项目(豫财预[2017]76-22,20188118)
文摘
【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%TacsimateTM(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。
关键词
牛IgG
2
FC受体
蛋白表达
蛋白结晶
Keywords
bofcγ2r
p
r
otein exp
r
ession
p
r
otein c
r
ystallization
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PCR克隆高GC含量牛Fcγ2R cDNA
乔松林
张改平
王丽
张红
张华
付彦峰
郭军庆
王选年
夏春
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2005
2
下载PDF
职称材料
2
牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶
黄晓静
李睿
马红芳
冯丽丽
乔松林
邓瑞广
张改平
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2019
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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