北京地区新近报道的人Boca病毒VP1、VP2蛋白编码区基因序列分析

目的了解北京地区新近报道的人Boca病毒(human bocavirus,HBoV)主要结构蛋白编码区基因的特征。方法选择已经过初步研究证明为HBoV NP1基因检测为阳性的2份临床标本BJ3064、BJ3722,应用针对HBoV VP1蛋白编码区基因的PCR引物进行扩增,对所获得的PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定。将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较分析和种系进化分析。结果从标本BJ3064及BJ3722中扩增得到HBoV VP1蛋白编码区全基因的PCR扩增产物为2016 bp,编码671个氨基酸。VP2蛋白是在不改变开放性读码框架(ORF)的情况下,由VP1蛋白编码区内起始合成,并与VP1终止于同一终止密码子,长度为1629 bp,编码542个氨基酸。与HBoV原型株ST1、ST2株相比较,BJ3064、BJ3722的VP1及VP2蛋白无论是核苷酸水平还是氨基酸水平的同源性均超过98％,但与同属细小病毒的BPV及MVC相应位置的序列相比较,同源性较低,其中核苷酸序列同源性低于60％,而氨基酸序列同源性低于50％。VP1及VP2蛋白的编码区基因进化分析显示, BJ3064、BJ3722与ST2之间进化关系较ST1更密切。在BJ3064、BJ3722的VP1蛋白中,也存在类似于MVC的保守性磷酸酯酶A2特异性位点的活性基序(HDXXY)及Ca2+结合位点。结论已得到HBoV的结构蛋白VP1和VP2的全基因,将为儿科急性呼吸道感染中该病毒的病原作用、地位及其在各年龄组人群中的血清学特征的深入研究打下坚实的基础。

北京地区人Boca病毒外壳蛋白VP2的原核表达及抗原性初步分析

目的获得新发现的北京地区人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2，为对该病毒病原学的深入研究打下基础。方法从已证明为HBoV阳性的临床标本BJ3722中经PCR扩增得到HBoV VP2蛋白编码区基因片段，将其克隆至pUCm-T载体中，然后再亚克隆至原核表达载体pET-30b（＋），经双酶切、PCR、序列测定等方法挑选、鉴定阳性克隆，得到重组表达质粒pET-30b-VP2，转化大肠杆菌B121（DE3），在不同的温度下利用IPTG诱导蛋白表达；对得到的蛋白表达产物粗提物经NP亲和层析纯化后，利用抗组氨酸抗体、兔抗HBoV-VP2多肽免疫血清及人血清进行抗原性初步分析。结果BJ3722 VP2基因正确插入pET-30b中，开放阅读框架正确，表明得到了预期的pET-30b-VP2重组原核表达质粒。比较25℃、30℃、37℃ 3个不同温度下的蛋白表达产物，以25℃ 1mmol／L IPTG诱导培养过夜后产生的带6×His标记的重组VP2蛋白量最大，主要以包涵体形式存在。VP2蛋白粗提物经NP亲和层析，在pH4．5时获得较理想的纯化结果。Western blot显示所表达的蛋白质能够与抗组氨酸特异性抗体、兔抗HBoV-VP2蛋白多肽免疫血清以及人血清发生反应。结论本研究成功构建了重组pET-30b-VP2原核表达质粒，改善了表达及纯化条件，得到了较大量的HBoV-VP2蛋白表达，并初步证明表达产物具有抗原特异性，可用于对这一新发现病毒的进一步深入研究。

北京地区人Boca病毒全基因组序列及生物信息学分析

目的 了解北京地区人Boca病毒（human Bocavirus，HBoV）的基因组编码特征，并对其基因组编码的非结构蛋白NS1、核蛋白NP-1以及病毒外壳蛋白VP1及VP2的二级结构等特性进行预测分析。方法从已证明为HBoV阳性的2份临床标本BJ3064、BJ3722中应用针对NS1、NP-1、VP1、VP2基因组3′末端的引物对经PCR扩增得到预期片段，将扩增产物直接测序后得到基因组序列；运用生物信息学的方法，对HBoVBJ3064基因组编码的各蛋白的二级结构及其他生物学特性进行了预测分析。结果 测序结果显示HBoVBJ3064及BJ3722基因组序列全长均为5299bp，有4个主要的COS（codmgdomainsequences），分别编码NS1、NP-1、VP1和VP2蛋白。序列同源性比较结果显示BJ3064与BJ3722间基因组序列的同源性达99．9％；与ST1比较，同源性为99．4％-99．5％；与ST2比较，同源性为99．8％；与BPV及MVC比较，同源性低于45％；与细小病毒B19的同源性仅为5％左右；基因组系统进化树分析显示BJ3064、BJ3722与S12在一簇中，ST1属另一簇。NS1、NP-1、VP1及VP2蛋白二级结构中主要为无规卷曲，其他结构如α螺旋、β片层、β转角在不同蛋白中占有不同比例；各蛋白均无明显的跨膜结构域；NS1、NP-1属不稳定蛋白，VP1、VP2属稳定蛋白。结论全基因组序列的确定进一步证明北京地区发现的BJ3064、BJ3722是典型的人Boca病毒，相对于ST1，BJ3064、BJ3722与S12之间进化关系更密切；蛋白二级结构等生物信息学分析将有益于对此新发现病毒的进一步深入研究，如蛋白的表达、分离纯化以及蛋白检测条件的选择等。

人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建

为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本（BJ3722）的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体（pFastBac1）,通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9。收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBoV VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白。昆虫细胞经重组病毒感染后7~10d细胞完全裂解时,收获培养上清（VLPs-A）,或在感染后4~5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解（VLPs-B）,经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法（IFA）检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构。通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性。纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒。本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs。

青花瓷韵味Boca do Lobo全新限量版橱柜

葡萄牙家具品牌Boca do Lobo前不久与设计师Marco Costa合作推出的限量版Heritage餐具橱柜,彰显了Boca do Lobo产品的不凡格调。这款看似层层叠叠的Heritage餐具橱柜尺寸规格为160厘米(长)×50厘米(宽)×90厘米(高),外观设计精美,表面铺有纯白色瓷砖,瓷砖上绘有葡萄牙油画师以蓝色漆油绘制的图案,描绘了葡萄牙历史上各个时期的建筑、人物等,讲述了一个个不同的故事,远远看去宛如中国的青花瓷。内饰上,橱柜选用了金色装饰,意在彰显富贵。

Foro Boca音乐厅

Foro Boca音乐厅是整体城市规划中的一部分,旨在使日渐衰退的城市区域重新恢复活力。它坐落在有着丰富历史和美食传统的河口地带,并位于将河流与海洋分隔开的防浪堤旁。这里也是Vicente Fox滨海大道的尽头,在其与Zamora大道交汇的地方排布着众多当地的餐馆。Foro Boca音乐厅旨在使城市中心和滨海大道间的动态关系变得更加清晰,同时作为城市的推动者,为该区域带来更多现代性的元素。项目本身便为基础设施的建设和城市形象的树立提供了条件与工具。

儿童重症博卡病毒与腺病毒肺炎临床比较

目的通过对比临床常见的重症腺病毒肺炎的临床特点,更好的了解重症博卡病毒(HBoV)肺炎的临床特征,指导临床工作。方法收集2017年1月-2019年12月苏州大学附属儿童医院重症医学科42例重症博卡病毒(HBoV)肺炎及30例重症腺病毒(ADV)肺炎患儿临床资料,进行比较分析。结果重症HBoV肺炎和ADV肺炎发生率分别为1.93%(42/2178)和4.85%(30/619),两者中位年龄分别为1.33(1.00,1.89)岁、1.25(0.96,2.77)岁,差异无统计学意义(P=0.587)。重症HBoV肺炎全年均可发生,以春季偏低,为7.14%(3/42)。而重症ADV肺炎以冬季高发。78.57%(33/42)重症HBoV肺炎患儿有喘息,显著高于重症ADV肺炎的30.00%(9/30)(P<0.001)。30.95%(13/42)重症HBoV肺炎有发热,显著低于重症ADV肺炎的80.00%(24/30)(P<0.001);重症HBoV肺炎组影像学以肺纹理增粗模糊、小斑片状影多见,存在絮片状影、胸腔积液表现显著低于重症ADV肺炎组(P<0.05)。2.38%(1/42)重症HBoV肺炎可合并中重度贫血,显著低于重症ADV肺炎的20.00%(6/30)(P=0.037)。两组患儿均可引起呼吸衰竭,发生率分别为64.29%(27/42)、56.67%(17/30),差异无统计学意义(P>0.05)。结论两组患儿均以幼儿高发,重症HBoV肺炎全年均可发生,重症ADV肺炎则以冬季高发;除重症HBoV肺炎更易引起喘息外,其全身症状及影像学表现均较重症ADV肺炎轻。呼吸衰竭是两者主要危重状态,大部分患儿经不同程度氧疗可缓解。

敏捷供需链管理系统实现方案的探讨

敏捷供需链管理系统的实现 ,需要结合分布式对象技术、网络技术以及人工智能技术。本文讨论了这些技术在实现过程中所扮演的角色和应当达到的目标 ,在此基础上 ,提出了敏捷供需链管理系统实现框架 ,并进一步详细讨论了供需链计划与调度内核的实现方案 ;原有信息系统封装的实现方案 ,以及运用业务对象构件体系结构和对象数据库实现敏捷供需链管理系统执行系统的优化方案 ,并分析了实现过程所涉及的技术要点。

新发现呼吸道病毒感染的流行病学及其临床特征

呼吸道感染是儿科的常见病、多发病,是引起世界范围内5岁以下儿童死亡的首位原因。其临床表现易被认识,但病因却很难明确。2001年以来许多新的人类病毒被发现,其中人类偏肺病毒、人类冠状病毒NL63和HKU1,以及人类博卡病毒,均已被证实可引起小儿呼吸道疾病,其流行病学及临床特征也得到较为深入的研究。

猪博卡病毒1型nPCR检测方法的建立与 SXWN20株基因序列分析

建立了检测猪博卡病毒1型(PBoV)的nPCR方法,对陕西省部分猪群PBoV1型感染情况进行流行病学调查。通过优化反应体系与条件,测试了方法的灵敏性和特异性,建立了PBoV1型nPCR检测方法,并对阳性样品进行测序分析。结果表明,建立nPCR方法检测PBoV1型单链DNA的极限为4.742×10^(-2) ng/μL,该方法与PCV2、PCV3、PPV、猪链球菌和猪大肠杆菌DNA均无交叉反应,特异性良好。检测了陕西省猪场60份样品,PBoV1型阳性率为3.33%(2/60)。测序获得的SXWN20株VP1/VP2基因序列比对发现,SXWN20株与参比的PBoV1型毒株核苷酸同源性为96.6%~97.5%,与PBoV2/3/4/5型同源性仅为53.8%~59.7%。进化树分析显示,所有参比毒株分为3个大分支,SXWN20株与PBoV1型毒株处在一个进化分支,PBoV2型处在一个进化分支,PBoV3/4/5型处在一个进化分支。

厚叶旋蒴苣苔BcWRKY2基因5′端调控区的克隆及功能元件分析

在克隆厚叶悬蒴苣苔干旱诱导表达转录因子BcWRKY2基因的基础上,利用接头介导的PCR(LM-PCR)技术,从基因组DNA中克隆了908bp的BcWRKY2基因的上游调控区序列。序列分析显示,该启动子中存在多种非生物胁迫反应元件,如ABA反应元件ABRE、干旱反应元件DRE/C-repeat以及MYB结合位点MBS(MYB binding site involved in drought-inducibility)等。

2种不同标本采集方法对儿童博卡病毒检测阳性率的影响

目的比较鼻咽分泌物抽吸法与吸痰法对人博卡病毒检测阳性率的影响。方法选取呼吸道感染住院患儿120例按照随机数字表法分为对照组和观察组各60例,对照组采取鼻咽分泌物抽吸法采集标本,观察组采取吸痰法采集标本。比较2组患儿博卡病毒检测阳性率差异、鼻腔黏膜损伤情况及家长满意度。结果观察组博卡病毒检测阳性率为45%,显著高于对照组博卡病毒检测阳性率8.3%(P<0.05);观察组患儿鼻腔黏膜损伤发生率低于对照组(P<0.05),同时观察组家长满意度也高于对照组(P<0.05)。结论吸痰法可提高儿童博卡病毒检测阳性率、减少儿童鼻腔黏膜损伤发生并提高家长满意度。

上海嘉定地区连续3年儿童人博卡病毒感染的研究

目的了解上海市嘉定地区2006—2008年儿童下呼吸道感染患者人博卡病毒感染情况。方法 2006年2月—2008年9月期间,共收集843例下呼吸道感染儿童鼻、咽拭子标本,检测人博卡病毒阳性者进一步检测血液标本。并对其中12例博卡病毒阳性病例回访,再次检测鼻、咽拭子,同时留取血、尿标本。鼻、咽拭子和血、尿液标本均采用RT-PCR方法检测人博卡病毒基因片段。结果 843例鼻、咽拭子标本中博卡病毒阳性90例,阳性率10.7%;其中90例人博卡病毒阳性标本中血标本阳性21例。90例阳性标本中博卡病毒检测阳性率<1岁16.2%,～3岁10.3%,～6岁8.9%。博卡病毒检测阳性率冬季(1～3月)为13.1%,春季(4～6月)为9.9%,夏季(7～9月)为4.1%,秋季(10～12月)为15.3%。确诊博卡病毒感染后14 d,12例患儿再次取鼻、咽拭子以及血、尿液标本,检测出人博卡病毒。结论上海市嘉定地区部分儿童患者的下呼吸道感染与人博卡病毒有关;秋冬季节是人博卡病毒的好发季节;人博卡病毒在感染呼吸道后持续排毒,存在病毒血症可能。

“波卡”轮通风系统除尘装置的设计

本文对波卡轮进行了货舱区域空舱内通风系统除尘装置设计和机舱区域通风系统除尘装置设计。通过对"波卡轮(BOCA GRANDEⅡ)"轮加装通风系统除尘装置设计工程的使用情况看,其性能满足施工的要求,其改装工程为今后进行类似设计提供了宝贵的经验。

需机械通气的儿童重症博卡病毒肺炎十例临床分析

目的总结因博卡病毒感染需机械通气的重症肺炎儿童的临床特点。方法回顾性分析2022年10月至2023年6月入住首都医科大学附属北京儿童医院急诊重症监护病房需机械通气的重症博卡病毒肺炎患儿的临床资料。结果共纳入10例需机械通气的重症博卡病毒肺炎患儿,其中男7例,中位年龄21.5(10.0~42.0)个月,6例患儿<2岁。6例患儿于2022年秋季入院,4例患儿于2023年夏季入院。10例患儿均有咳嗽、喘息、发热。10例患儿入院查体均可闻及哮鸣音;6例患儿呼吸音减低,2例可闻及湿啰音。2例患儿合并鹅口疮,1例患儿支气管肺泡灌洗液培养可见肺炎链球菌及金黄色葡萄球菌,1例患儿病程第5天检出人疱疹病毒6型感染,1例患儿检出鼻病毒。余5例患儿无合并感染证据。所有患儿均因呼吸衰竭予有创机械通气,机械通气中位时间为85(46~165)h。每例患儿行1~3次电子支气管镜检查及治疗,镜下表现为气管支气管内膜炎症、黏膜明显肿胀、分泌物增多(10/10),黏液栓形成(8/10)以及散在坏死上皮附着(4/10)。所有患儿好转后出院,中位住院时间9(6~14)d。结论博卡病毒是儿童重症肺炎的重要病原体之一,以严重咳喘、发热为主要表现,可导致气管支气管内膜炎症,易形成黏液栓和黏膜坏死,重者需机械通气及支气管镜治疗,多数预后良好。

北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与新近报道的人细小病毒相关性的初步研究

目的了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染与新近报道的人细小病毒（human bocavirus,HBoV）的关系.方法选择2003年11月至2004年2月收集的经间接免疫荧光和/或病毒分离排除了常见呼吸道病毒感染的急性呼吸道感染患儿标本319例,应用针对HBoV的NP1基因的PCR引物进行HBoV基因片段检测,随机选取HBoV基因检测阳性标本中的5例,对其PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定.将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较分析.结果319例标本中HBoV基因检测阳性的为13例,其阳性检出率占本组检测标本的4.1%;HBoV阳性检出率在本组的毛细支气管炎患儿中最高,达10.9%（5/46）,其次为支气管炎患儿（6.3%,2/32）;HBoV检测阳性标本的患儿年龄主要分布于5个月～5岁,尤其是＜1岁的患儿;其中6～7个月的患儿中HBoV检测阳性的占50%（2/4）,9～10个月的患儿中阳性的占25%（2/8）,其次为5～6个月的患儿（18.2%）、11个月～1岁的患儿（14.3%）及8～9个月的患儿（12.5%）;在＜5个月的总计103例患儿中以及＞5岁的28例患儿中均未检测到HBoV阳性标本;基因序列分析表明,本研究中5例北京的HBoV之间基因序列的同源性在99.7%～100%之间;与st1、st2株的同源性为99.2%～99.4%.结论本研究结果提示北京地区部分儿科患者的急性呼吸道感染与HBoV有关,且HBoV感染在低年龄组儿童中更为常见.

新近发现的呼吸道病毒感染流行病学与临床研究进展

呼吸道感染是儿科常见病、多发病，病因复杂，其中病毒在儿童呼吸道感染中起重要作用。近年来新发现的呼吸道病毒包括人偏肺病毒、SARS冠状病毒、人冠状病毒NL63和HKU1、人博卡病毒以及人多瘤病毒，本文对其流行现状和临床研究进展作一介绍。