苎麻(Boehmeria nivea L)叶片愈伤组织诱导与植株再生的研究

为了建立苎麻外源DNA导入和遗传转化的实验体系，本试验以“湘苎3号”为材料，就激素、培养方法、培养条件对叶片外植体脱分化与再分化的影响作了较系统的研究。试验结果表明：1．较低浓度（0．1mg／l）的NAA能加快叶片启动。较高浓度（2．0～3．0mg／1）的BA有利于叶组织脱分化和愈伤组织形成，并能促进芽的再生，但BA浓度过高则抑制愈伤组织和芽的生长发育。2．NAA与BA配合使用能改善愈伤组织的质量和生长速度，促进芽的形成，高浓度BA与适当浓度NAA配合能分化丛生芽。配合使用时NAA与BA表现了互作效应，其互作效应受光温条件的影响。3．低温短光照预处理能提早叶组织启动；低温短光照预处理和昼夜温差预处理均能显著提高叶外植体分化成芽率；暗培养能促进愈伤组织分化和芽的发生。

苎麻遗传转化再生体系的建立

苎麻(BoehmerianiveaL.Guad)是荨麻科苎麻属宿根型草本植物,主要分布在热带和亚热带地区,为我国特产,是重要的纺织纤维和饲料作物。由于苎麻为杂合体,其遗传背景十分复杂,有性杂交等常规方法难以取得育种上的突破,因此,探讨利用基因工程技术改良苎麻品种具有重要意义。本研究以苎麻品种圆叶青叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素BA、IAA、GA3和NAA,通过研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响以及不同激素配比对生根的作用,建立了较好的遗传转化再生体系。试验结果表明圆叶青叶盘最适诱导愈伤培养基为MS+6-BA2.0mg/L+GA30.4mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L;分化培养基为MS+6-BA2.0mg/L+GA30.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L;小苗的最佳生根培养基为MS+NAA0.2mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L。在抗生素浓度梯度筛选实验中获得50mg/L卡那霉素可以抑制叶盘的分化;40mg/L卡那霉素可以抑制再生植株的生根。筛选出的遗传转化再生体系,为进一步利用基因工程技术对苎麻进行遗传改良打下基础。

苎麻雄性不育保持系组培再生技术研究

以苎麻雄性不育保持系GS13-X1为实验材料,选用MS培养基附加激素TDZ和2,4-D,研究不同激素浓度组合对种子苗叶片和茎段外植体愈伤诱导与不定芽分化的影响.试验结果表明,GS13-X1再生的最适培养基为MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂,叶片和茎段的愈伤诱导率分别为100%和95.24%,出芽分化率分别为11.11%和23.81%.50 mg/L卡那霉素可以明显抑制茎段和叶愈伤诱导与分化.苎麻雄性不育保持系组织培养再生技术是苎麻雄性不育转基因验证的前提条件,也是苎麻遗传工程改良的基础.