家蚕核型多角体病毒egt基因的结构和功能分析

以苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的egt基因作探针 ,从家蚕核型多角体病毒镇江株 (BmNPVZJ- 8)基因组中克隆了egt基因及其旁侧序列 ,作了该片段的酶切图谱 ;测定了BmNPVZJ - 8egt基因序列。与AcMNPV的egt基因相比同源性为 95 % ;基因大小都为 15 18bp。利用egt基因旁侧序列构建了转移载体pUDegt,以绿色荧光蛋白基因 (EGFP)作报告基因取代egt基因 ,构建了由EGFP取代egt基因的重组病毒BmDegt。将含egt基因的BmNPV和不含egt基因的重组病毒BmDegt分别注射感染四龄家蚕幼虫 ,发现BmDegt感染的家蚕个体生长速度缓慢 ,家蚕个体小 。

家蚕核型多角体病毒egt基因在大肠杆菌中的表达

利用ＰＣＲ技术对已克隆的ＢｍＮＰＶＺＪ８株的ｅｇｔ基因５′端非编码区序列进行删除，并将ＰＣＲ片段克隆到质粒ｐＢａｃＰＡＫ８中，测序结果表明ＰＣＲ扩增的片段完全正确，接着将经过改造的ｅｇｔ基因克隆于大肠杆菌表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中，在大肠杆菌中高效表达了ＢｍＮＰＶｅｇｔ基因。同时，对ＢｍＮＰＶｅｇｔ基因的密码子使用作了分析。