响应面法优化超声辅助提取僵蚕多糖的工艺研究

采用超声辅助技术提取僵蚕中的多糖。在单因素实验的基础上,通过响应面法优化僵蚕多糖提取工艺。结果表明:对僵蚕多糖得率影响的实验因素为液料比(C)>提取温度(A)>提取时间(B);提取工艺最佳条件为温度61℃,时间52 min,液料比33 mL/g。在此优化条件下僵蚕多糖得率为(1.81±0.02)%,相对误差(RE)为0.79%。研究结果表明,响应面优化的模型有效且可靠,可为僵蚕多糖的开发利用提供理论参考。

僵蚕与其掺伪品鉴别方法的研究

为探索僵蚕与其掺伪品的鉴别方法。本研究通过样品形态、质地、断面和气味特征,对僵蚕及其掺伪品进行性状描述;采用光学显微技术比较僵蚕与掺伪品体表被有的白色粉霜状物的区别;用稀盐酸与僵蚕体表被有的白色粉霜状物反应,判断僵蚕与其掺伪品的真伪;采用薄层色谱法,以硅胶G为固定相,以石油醚(60~90℃)-丙酮(7:3)为展开剂,置365nm紫外灯下检视,对僵蚕与掺伪品甲醇提取物进行鉴别。结果表明,与正品僵蚕比较,通过性状鉴别,掺伪品可分为3类,通过光学显微镜检查,部分样品中检出淀粉粒,部分样品呈碳酸盐或碳酸氢盐阳性反应,部分样品的薄层色谱特征存在明显差异。该方法快速、易操作、专属性良好,为僵蚕的鉴别方法提供参考。

僵蚕中黄曲霉毒素的测定及风险评估

采用高效液相色谱法,对僵蚕药材及其饮片中的黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)残留量进行分析,并对黄曲霉毒素B_(1)的安全风险进行评估,为僵蚕药材及其饮片的市场监管提供依据。样品经提取后,通过免疫亲和柱处理,采用高效液相色谱法测定,色谱柱为YMC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,荧光检测器激发波长为360 nm,发射波长为450 nm。对收集的24批次僵蚕药材及其饮片进行定量分析。采用暴露限值法对黄曲霉毒素B_(1)进行风险评估。结果显示,黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)检测方法的线性关系、精密度、回收率良好;僵蚕药材及其饮片中黄曲霉毒素整体检出率较高,有1批黄曲霉毒素B_(1)超出限量,黄曲霉毒素B_(1)的MOE值≤10000。僵蚕中黄曲霉毒素B_(1)的暴露水平可能会对人体健康产生不良影响,对人体健康存在潜在风险,需要引起关注。本研究可为僵蚕黄曲霉毒素的检测和风险评估提供技术支持。

HPLC法测定僵蚕5个核苷类成分的含量及聚类分析

目的建立同时测定僵蚕药材中5种核苷类成分含量的方法,并比较不同来源僵蚕药材中上述成分的差异性,为僵蚕药材的质量控制提供参考。方法采用月旭AQ-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以纯水-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL/min;检测波长为260 nm,柱温为26℃;进样量为20μL。以21批不同来源的僵蚕药材为样品,测定上述5种成分含量,并采用SPSS 25.0统计学软件对21批不同来源的僵蚕药进行聚类分析。结果尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷及腺嘌呤分别在1~32μg/mL(r=1.0000)、0.3~9.6μg/mL(r=0.9999)、2~64μg/mL(r=0.9999)、5~160μg/mL(r=0.9998)、5~160μg/mL(r=0.9999)的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD<3.00%,平均加样回收率为98.86%~101.73%,RSD<3.00%。不同来源僵蚕之间5个成分含量差异有统计学意义。经聚类分析,21批样品共聚为3类,产地样品即S1、S4、S5、S7、S8、S9聚类第Ⅰ类,市场样品聚为第Ⅱ类,产地样品S2、S3、S6聚为第Ⅲ类。结论该方法简便准确、重复性好,可用于同时测定僵蚕药材中上述5种核苷类成分的含量。同一产区僵蚕质量较为稳定,含量较高,市场僵蚕来源复杂,含量较低。

白僵蚕多糖对2型糖尿病小鼠的抗氧化作用

目的观察白僵蚕多糖对2型糖尿病小鼠的抗氧化作用。方法从31只SPF级雄性小鼠中随机取7只作为空白组,其余24只小鼠制备2型糖尿病模型,造模期间死亡3只。将21只成功建模小鼠随机分为3组,模型组、白僵蚕多糖组、二甲双胍组各7只。白僵蚕多糖组予白僵蚕多糖溶液400 mg/kg,二甲双胍组予盐酸二甲双胍溶液200 mg/kg,模型组予0.9%氯化钠注射液0.2 mL/10 g,空白组予0.9%氯化钠注射液0.2 mL/10 g,均每日灌胃1次,连续给药28天。观察各组小鼠肝脏病理学变化;比较各组小鼠体质量、空腹血糖(FPG)、脏器指数(脾脏指数、肾脏指数)、氧化指标[总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)]变化。结果空白组肝细胞排列规整,细胞范围清晰,没有水肿、炎症等。模型组细胞排列紊乱,绝大多数肝细胞已出现弥漫性水肿变性和轻度脂肪变性,细胞组织疏松、空泡化较严重,有许多大小不等整齐的小圆空泡,炎症程度一般较轻。白僵蚕多糖组肝细胞结构比较均匀完整,有轻度松散,细胞表面有少量大小深浅不等的小空泡形成和轻微的水肿,细胞间有脂肪变性,无炎症。二甲双胍组肝细胞较为整齐,细胞略有空泡变性,细胞体中度肿大,无炎症。与空白组比较,模型组小鼠体质量降低(P<0.05),FPG水平升高(P<0.05);与模型组比较,白僵蚕多糖组、二甲双胍组小鼠体质量升高(P<0.05),FPG水平降低(P<0.05);白僵蚕多糖组与二甲双胍组小鼠体质量、FPG水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组脾脏指数、肾脏指数均升高(P<0.05);与模型组比较,白僵蚕多糖组、二甲双胍组脾脏指数、肾脏指数均降低(P<0.05);白僵蚕多糖组与二甲双胍组脾脏指数、肾脏指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组T-SOD、GSH含量均降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,白僵蚕多糖组、二甲双胍组T-SOD、GSH含量均升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05);白僵蚕多糖组与二甲双胍组T-SOD、GSH、MDA含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论白僵蚕多糖可减轻2型糖尿病小鼠肝脏脂肪变性,增强其抗氧化作用,推测白僵蚕多糖通过调节氧化应激来降低血糖。

乌梅-僵蚕治疗小儿腺样体肥大临床探析

腺样体肥大是临床常见儿童高发疾病,中医药可有效改善其临床症状,防止病情进展。本文从小儿腺样体肥大的病机,以及乌梅-僵蚕理论来源、功效主治、药理研究及配伍意义等方面进行详细阐述,探讨该药对治疗小儿腺样体肥大的发展前景。

优质动物药白僵蚕的专业化人工制备

白僵蚕作为常用大宗药材,在动物类饮片中名列前茅。近年来市场需求量逐年递增,供不应求。而在传统的丝茧育中,随着防治真菌感染的药物效果的提升和防控措施落实到位,家蚕感染白僵菌的情况已变得极为罕见。为满足市场需求,专业化人工大规模生产白僵蚕应时而生。本文对专业化人工制备白僵蚕的前景、存在的挑战点以及相对应的解决方案进行讨论。

白僵蚕的主要药用成分及研究进展

白僵蚕是我国传统中药材之一,有着悠久且广泛的药用史.白僵蚕富含黄酮、蛋白质、多肽、氨基酸、草酸铵等有效成分,具有抗惊厥、通络散结、止咳化痰、抗凝血、抗肿瘤等功效.文章概述了白僵蚕的主要药用成分及研究进展,旨在为白僵蚕的后续研究及临床应用提供参考.

不同炮制白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量与外观性状的相关性研究

为探究不同炮制白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量与外观性状的相关性,采用HPLC-UV法分别测定不同批次白僵蚕与炒僵蚕中草酸铵和白僵菌素的含量,利用SPSS 26.0软件将白僵蚕和炒僵蚕的单体质量、长度、直径、丝腺环数与草酸铵和白僵菌素含量进行相关性分析。结果表明,白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量呈显著正相关,且这两个成分含量与白僵蚕外观性状也均呈显著正相关;炒僵蚕中白僵菌素含量与外观性状呈显著正相关,而草酸铵含量与白僵菌素含量及各外观性状指标均无相关关系。该结果可为白僵蚕、炒僵蚕饮片质量评价提供参考,也可为炒僵蚕炮制工艺的规范提供线索。

僵蚕药材及饮片质量标准研究

目的:对不同来源僵蚕质量进行评价,完善其质量标准。方法:建立僵蚕中白僵菌素、草酸铵HPLC含量测定方法,对58批次具有代表性的不同来源僵蚕药材及饮片进行测定分析。结果:58批次僵蚕样品中,10批次未检出特征性成分白僵菌素、草酸铵,占比17.2%。白僵菌素含量分布在0.0101%~0.1192%间,草酸铵含量分布在4.71%~10.84%间,两者呈显著正相关(P<0.01)。结论:本研究建立的方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可有效评价和控制僵蚕质量。僵蚕存在较高质量风险,有待进一步完善僵蚕质量标准。

僵蚕中非法添加硼砂检测

目的:建立僵蚕中非法添加物硼砂的定性、定量检测方法,对市售僵蚕药材中非法添加硼砂情况进行筛查,以保障临床用药安全。方法:硼砂在酸性条件下转化为硼酸,与姜黄素结合生成有色的络合物,颜色深浅与硼酸含量成正比。采用改良姜黄试纸法对僵蚕中硼砂进行快速定性筛查,紫外-可见分光光度法准确测定硼砂含量。结果:改良的姜黄试纸灵敏度与《中华人民共和国药典》方法制备的姜黄试纸相当,且高于市售试纸;其制备以姜黄素代替姜黄粉末,操作更简便,并大幅缩短制备时间。硼砂在2.53259~12.66295μg/mL范围内,与吸光度呈良好线性关系(r=0.9997),平均加样回收率为101.20%,RSD为2.37%(n=9)。对31批市售僵蚕药材中硼砂进行定性、定量检测,结果7批检出硼砂,硼砂含量分布在0.03%~5.63%之间。结论:目前市场上僵蚕存在违法添加硼砂现象,需加强宣传及监管力度来遏制此类违法现象。

电感耦合等离子体质谱法测定僵蚕中钙、硼、钠元素含量

目的建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法同时测定僵蚕中钙、硼、钠三种元素含量的方法。方法采用微波消解法作为前处理方法,采用ICP-MS测定25批次僵蚕中钙、硼、钠三种元素含量并结合多元统计对不同产地僵蚕进行分析评价。结果三种元素在各自范围内线性关系良好(r>0.995);加样回收率在80%~120%范围内;重复性RSD﹤5%;重现性RSD﹤5%;1D内稳定性RSD﹤5%。结论该方法操作简单,结果准确,可用于僵蚕中三种元素的定量研究,结果可为僵蚕质量控制及产地研究提供参考。

僵蚕的化学成分研究

目的 :研究僵蚕的化学成分。方法 :应用硅胶柱层析和重结晶方法进行分离、纯化 ,并利用谱学方法进行结构鉴定。结果 :分离并鉴定出 7个化合物。结论 :其中

僵蚕提取液中蛋白质和草酸铵等成分的定量分析

目的对僵蚕提取液中三种形态的含氮物质、草酸盐、总离子浓度和还原性物质进行含量测定。方法采用离子交换和经典化学分析方法。结果僵蚕提取液中固形物含量为38.52%,RSD=0.92%(n=3);总氮、铵态氮和酰胺态氮含量分别为5.798%、0.868%、0.196%,蛋白质含量为29.74%,占总固形物的77.2%;草酸铵含量为3.85%(不包括0.96%的草酸根对应的其他盐),占总固形物的9.98%;总离子浓度按一价离子计为1.099mol/L;能被高锰酸钾在酸性条件下氧化的还原性物质含量相当于1.015mol/L的草酸盐浓度,其中阳离子型、阴离子型和非离子型还原物质浓度占总还原物质的摩尔百分率分别为7.84%、64.16%和不低于28.0%。结论本研究为进一步研究僵蚕提取液的抗凝作用和药理作用机理奠定了一定的物质基础。

僵蚕化学成分研究

目的:研究僵蚕的化学成分。方法:利用反相硅胶柱层析和反相制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果:从僵蚕乙酸乙酯萃取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为:槲皮素-7-O-β-D-4-O-甲基吡喃葡萄糖苷(1)、山柰酚-7-O-β-D-4-O-甲基吡喃葡萄糖苷(2)、槲皮素(3)、山柰酚(4)、环(缬-脯)二肽(5)、腺苷(6)、尿嘧啶(7)、环(丙-脯)二肽(8)、白僵菌素(9)。结论:其中,化合物1~4、6、8均为首次从僵蚕中分离得到,化合物1、2为4-O-甲基葡萄糖苷化产物,并且为特征化合物。

一株感染家蚕的高致病性白僵菌的鉴定及在僵蚕生产中的应用

僵蚕是传统中药材,筛选对家蚕具有高致病性的球孢白僵菌用于提高规模化生产僵蚕的产量和品质。从蚕区采集的僵蚕虫体分离纯化到一株高致病力的白僵菌,通过形态学鉴定和rRNA ITS序列系统发育分析,确定该菌株为球孢白僵菌（Beauveria bassiana）,命名为Beauveria bassiana JC-1。优化该菌株应用于僵蚕生产中的接种菌液浓度为1×10^6～5×10^6mL^-1,用此浓度的菌液喷洒接种5龄起蚕后5～6 d,幼虫大量死亡,僵化率达90%以上,万头蚕可生产僵蚕约5 kg。利用该菌株感染家蚕收获所得僵蚕的各项质量指标均符合《中国药典》中的有关标准,且僵蚕的总灰分和酸不溶性灰分含量较市售僵蚕更低。初步认为该菌株在僵蚕的标准化、规模化生产中具有应用价值。

僵蚕抑菌活性成分的提取及其对大肠杆菌的抑制作用

【目的】探讨僵蚕抑菌活性成分的提取方法,比较所得提取物对大肠杆菌的抑制作用,为解析和深入研究僵蚕的抑菌药理机制提供参考。【方法】以僵蚕为材料,以体积分数95%乙醇为提取溶剂,对中药僵蚕的4种提取方法(超声波法、微波法、煎煮法、冷浸法)进行平行比较研究;采用超声波提取法,探讨了石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、体积分数95%乙醇、甲醇和水7种提取溶剂的提取效果,采用比色法、纸片扩散试验和肉汤倍比稀释法研究所得僵蚕活性提取物对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑菌活性。【结果】以体积分数95%乙醇作为提取溶剂,4种提取方法中,以超声波法提取时的浸膏得率最高。采用超声波提取法时,7种提取溶剂中,以体积分数95%乙醇提取浸膏的得率最高。研究结果显示,不同提取方法得到的提取物对大肠杆菌均有明显的抑菌作用,其中采用超声波提取法,以体积分数95%乙醇为提取溶剂时,所得提取物的抑菌活性最高,其对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.625mg/mL。【结论】不同提取方法得到的僵蚕提取物对大肠杆菌均具有明显的抑菌活性,僵蚕的抗炎作用与其抑菌活性相关。

10批市售僵蚕商品药材质量评价

目的:采用多指标评价市售僵蚕药材质量状况,为临床合理用药提供参考。方法:按照2015年版《中国药典》(一部)对市售10批僵蚕药材外观性状进行观察,对水分、总灰分含量进行测定,采用傅里叶变换红外光谱法对药材进行鉴别,采用紫外-可见分光光度法和高锰酸钾滴定法分别测定有效成分蛋白质和草酸铵的含量。结果:10批僵蚕的水分含量在2.84%~4.07%之间(RSD<5%,n=3),总灰分含量在7.79%~34.32%之间(RSD<5%,n=3);紫外和红外光谱图基本相似,均能反映出蛋白质多肽类物质的特征峰;蛋白质含量在29.87%~57.19%之间(RSD<0.5%,n=3),草酸铵含量在0.27%~4.77%之间(RSD<5%,n=3)。结论:10批市售僵蚕均为正品且为炮制品;水分含量符合2015年版《中国药典》(一部)规定,但总灰分含量未达其要求;其主要成分为蛋白质多肽类物质,但有效组分蛋白质多肽与草酸铵含量差异较大。

白僵蚕的化学成分和鉴别技术研究进展

白僵蚕是传统中药,通过与其它中药组配可治疗多种疾病。白僵蚕由蛋白质、酶类、草酸铵、脂肪、有机酸、毒素、色素、挥发油、维生素、微量元素及少量的核酸组成,其中草酸铵是主要药理成分。白僵蚕的鉴别除采用传统的目测方法外,还有利用现代仪器检测的高效液相色谱法、薄层色谱法、微量升华法、紫外分光光度法等。今后应加强白僵蚕的药理成分及作用机制的研究,并加快药用白僵蚕的质量标准制定和实施药用白僵蚕的标准化生产。

采用响应面法优化白僵蚕草酸铵的提取工艺

白僵蚕体内所含的草酸铵为抗惊厥的有效药用成分。采用响应面法优化了白僵蚕草酸铵的提取工艺条件。在单因素试验的基础上,选择提取温度、提取时间、原料质量浓度3个因素进行中心组合试验,建立了草酸铵得率的二次回归方程。此模型拟合性好,通过响应面分析以及岭嵴分析得到了优化组合条件。试验结果表明,提取温度及原料质量浓度对草酸铵得率都有显著影响,当提取工艺条件为温度85℃,提取时间65 min,原料质量浓度43 g/L时,草酸铵得率达到最大值。此条件下草酸铵得率验证值为3.25%,与预测值3.29%基本一致。