微细化-蛋白酶解对蚕蛹蛋白营养价值和功能特性的影响

本实验采用磨球超微粉碎-蛋白酶解的方法改性处理蚕蛹蛋白,研究了改性处理后蚕蛹蛋白的营养价值和功能特性。结果表明:微细化-酶解改性处理后蚕蛹蛋白的必需氨基酸/非必需氨基酸、必需氨基酸/总氨基酸均达到联合国粮食及农业组织和世界卫生组织推荐模式标准,营养价值显著提升(P<0.05);改性处理后蚕蛹蛋白的水解度提高了65.62%,溶解度、乳化性和起泡性分别提高了402%、187%和141%;巯基含量增加了57%,二硫键含量降低了21%;二级结构无规卷曲含量由37.46%增加到91.33%;剂量为25μg/m L的蚕蛹蛋白改性处理后,促小鼠脾细胞增殖能力增加了100%,免疫能力极显著提高(P<0.01)。

家蚕蚕蛹过敏原表皮蛋白RR-2基序63前体(CPR63)的克隆表达、纯化鉴定及生物信息学分析

目的克隆表达家蚕蚕蛹表皮蛋白RR-2基序63前体（CPR63）基因,纯化鉴定蛋白的过敏原性,并进行生物信息学分析。方法合成家蚕蚕蛹CPR63蛋白的基因（ref｜NM_001173223.1｜）,将其连接至克隆载体p MD18-T,p MD18-T-CPR63阳性质粒与原核表达载体p ET-44a分别用限制性内切酶酶切,构建出重组表达质粒p ET-44a-CPR63,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达;Western blot检测重组CPR63蛋白特异性过敏原性;用clustalw2和MEGA5工具包进行同源性分析;用Prot Param Tools预测其理化性质;用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。利用网络服务器IEDB、Preprod和DNAStar,对CPR63蛋白T、B细胞抗原表位进行预测。结果经测序鉴定,本研究成功克隆出了家蚕蚕蛹CPR63基因,其开放阅读框549 bp,编码182组氨基酸。通过大肠杆菌E.coli BL21（DE3）表达CPR63重组蛋白主要以可溶性形式存在,相对分子质量约20 000。Western blot显示重组CPR63能够与家蚕蚕蛹过敏患者血清Ig E结合。家蚕蚕蛹CPR63蛋白与黑脉金斑蝶表皮蛋白RR-2基序63（gb｜EHJ69818.1｜）同源性为85%。系统进化树结果显示家蚕蚕蛹与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示CPR63蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示CPR63的结构主要以无规则卷曲组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列（5～13、20～28、51～59和87～95）。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列（21～40、37～56、47～66和64～83）。结论成功克隆并表达了家蚕蚕蛹CPR63,并证实重组CPR63蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究家蚕蚕蛹过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹食物过敏模型的研究

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹过敏模型并研究其致敏作用。48只雌性Balb/c小鼠分别用灌胃和皮下注射家蚕蛹蛋白的方法进行致敏。小鼠致敏后通过尾静脉注射伊文斯蓝考察其对血管通透性的影响;光镜和扫描电镜下观察致敏小鼠空肠组织的病理切片;测定血清中IgE、组胺、IFN-γ、IL-4和IL-6等的含量;免疫印记反应测定小鼠血清特异性抗体与家蚕蛹变应原的结合度。结果表明:小鼠发生过敏反应时,血清中产生与家蚕蛹蛋白特异性结合的IgE抗体,血清中组胺、IL-4和IL-6等的含量显著上升,而IFN-γ含量显著下降,同时各致敏试验组小鼠血管通透性增加,空肠组织出现糜烂和结构受损症状。该小鼠致敏模型的成功构建对于后续研究家蚕蛹变应原及其致敏的抗原表位等均具有重要基础作用。

外源昆虫激素诱导家蚕卵蛋白形成、积累的初步研究

在雌蚕化蛹当时制成游离腹部,以外源激素诱导卵巢发育,采用SDS—PAGE技术,连续探讨了蛹血液蚕白组份和卵巢蛋白组份的变化。结果表明:游离腹部血液蚕白组份不因注射外源激素(MH或JHA)而改变,只有经注射MH后,血液蛋白组份才向卵巢中转移、积累,卵巢申形成卵特异蛋白。提示MH对家蚕卵黄蛋白发生的调节作用存在合成调节和摄取调节两个过程。由外源昆虫蜕皮激素诱导形成成熟卵的蛋白组份与正常蛹成熟卵蛋白组份相同。