骨髓细胞液氮长期冻存后间充质干细胞活力研究

目的研究骨髓细胞(BMC)液氮长期冻存后间充质干细胞(MSC)活力。方法从98人份经加低温保护剂、程控降温仪降温、液氮冻存23—25年的BMC中,取20人份复温,复温BMC体外行MSC初始和传代培养,传代细胞再行成骨和神经细胞诱导。检测培养全过程细胞的形态、增殖数量、细胞化学、免疫组化染色和抗原表达,计贴壁细胞回收率、相对增殖率和MSC相对回收率。结果 BMC冻存细胞,初始培养d10时旋涡状生长,d14时成纤维样细胞为(88.2±4.3)%;P1—P5传代培养时,d7旋涡状生长,传至P5时细胞扩增>60倍;P3时,成纤维样细胞为(94.7±3.6)%,细胞高表达CD29、CD90、CD44、CD71、CD73、CD105、CD166和HLA-A/B/C,低表达CD34、CD45和HLA-DR。P3细胞成骨诱导后ALP和茜素红染色强阳性,细胞内ALP含量明显增高;P3细胞神经细胞诱导后神经元烯醇化酶和巢蛋白染色阳性。细胞增殖和周期未发生改变。贴壁细胞回收率、相对增殖率和MSC相对回收率的结果分别为(52.1±5.6)%、(98.1±1.1)%和(48.5±8.6)%。结论用传统降温、液氮冻存骨髓细胞,至少在23—25年时,细胞内MSC性质不变、活力良好,达到了长期冻存的目的 。

人骨髓细胞长期低温保存的研究

目的:探讨人骨髓在液氮长期保存下造血细胞活力.方法:以10%二甲基亚砜、“二步”冻存法在液氮液相中冻存人骨髓细胞,用造血细胞培养的集落形成为指标,定期观察造血细胞活力.结果:20份人骨髓,1～15年CFU-GM回收率由(72.4±10.3)%下降至(40.5±13.2)%,CFU-GM回收率相关公式为:Y=0.7822-0.02573X.15年后BFU-E、CFU-GEMM、LTC-IC形成能力良好.结论:在液氮液相中冻存入骨髓,15年后仍有较好的造血细胞活力.