无血清条件对诱导转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的探讨无血清条件对诱导pEGFP-C1/Akt转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响。方法实验分实验组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs)、抑制组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs+PI3K/Akt特异性抑制剂)和对照组(MSCs)。在无血清培养基条件下,分别在4、12、24和36h共4个时间点利用RT-PCR检测Akt及Caspase-3mRNA表达,Western blot检测Akt蛋白表达,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在无血清培养4、12、24和36h后,实验组的Akt mRNA和蛋白的表达均高于抑制组及对照组(P<0.01),Caspase-3mRNA及蛋白的表达水平和细胞凋亡率则均低于抑制组及对照组(P<0.01);抑制组及对照组间Akt和Caspase-3mRNA及蛋白的表达和凋亡率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论Akt可能通过PI3K/Akt途径抑制其下游底物Caspase-3的表达,从而抑制无血清诱导的MSCs凋亡。

PI3K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞条件培养基减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的:评价磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在骨髓间充质干细胞(MSCs)条件培养基减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用。方法:健康雄性SD大鼠32只,6~8周龄,体重200~250 g,按照随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)、急性肺损伤+MSCs条件培养基组(M组)和急性肺损伤+MSCs条件培养基+LY294002组(L组)。ALI组、M组和L组采用气管内雾化吸入LPS 5 mg/kg的方法制备大鼠急性肺损伤模型。给予LPS 1 h后,C组和ALI组静脉注射无血清DMEM培养基1 ml;M组静脉注射MSCs条件培养基1 ml;L组于造模前2 h腹腔注射PI3K抑制剂LY29400230 mg/kg,造模后1 h静脉注射MSCs条件培养基1 ml。给予LPS后24 h,心脏取血,分离血清,采用ELISA法测定血清TNF-α和IL-6的浓度;然后处死大鼠,取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理学结果,并行肺损伤评分,采用Western blot法测定Akt和磷酸化Akt(p-Akt)的表达,计算p-Akt/Akt比值。结果:与C组比较,ALI组肺W/D比值、肺损伤评分、血清TNF-α和IL-6浓度升高,肺组织p-Akt表达下调,p-Akt/Akt比值下降(P<0.05),肺组织发生病理学损伤;与ALI组比较,M组肺W/D比值、肺损伤评分、血清TNF-α和IL-6浓度下降,肺组织p-Akt表达上调,p-Akt/Akt比值升高(P<0.05),肺组织病理学损伤减轻,L组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与M组比较,L组肺W/D比值、肺损伤评分、血清TNF-α和IL-6浓度升高,肺组织p-Akt表达下调,p-Akt/Akt比值下降(P<0.05),肺组织病理学损伤加重。4组间肺组织Akt表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路参与了MSCs条件培养基减轻大鼠内毒素性急性肺损伤的过程。

补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法:以6.5,13,26 g·kg^(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠1周,制备3种补阳还五汤含药血清和空白血清。将BMSCs分为补阳还五汤6.5 g·kg^(-1)组(用含10%6.5 g·kg^(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤13 g·kg^(-1)组(用含10%13 g·kg^(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤26 g·kg^(-1)组(用含10%26 g·kg^(-1)生药制备的血清培养),空白组(用含10%空白血清培养)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)和磷酸化丝(苏)氨酸蛋白酶(p-Akt)(Ser473)蛋白的表达。结果:13,26 g·kg^(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用BMSCs 48,72 h后,细胞增殖活性较空白组明显升高(P<0.05);3种补阳还五汤含药血清作用48 h后,BMSCs在S期的细胞比率随着药物浓度的升高而升高,与空白组比较有统计学意义(P<0.05);13,26 g·kg^(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用48 h后,PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白表达较空白组显著增强(P<0.01)。结论:13,26 g·kg^(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清可能通过活化PI3K/Akt信号通路促使细胞进入S期,增强BMSCs增殖活性。