百日咳杆菌69KDa外膜蛋白的分离纯化及生物学特性研究

本文发展了一种从百日咳杆菌Ⅰ相菌株中纯化６９ＫＤａ外膜蛋白的简易方法，将细菌体经加热浸提、乙醇沉淀蛋白、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ＿（５０）柱层析精制而成。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹、光密度仪扫描分析，证明纯化制剂为均一的、特异性的６９ＫＤａ外膜蛋白，其收率为５４．２％，纯度达９９．２％，每微克６９ＫＤａ蛋白制。剂中内毒素含量低于０．８５ＥＵ；ＰＴ残留量小于０．１０５ｎｇ。ｆＬ６９ＫＤａ蛋白抗血清能凝集含有３因子凝集原的百日咳菌株。用纯化的６９ＫＤａ蛋白免疫小鼠，能够保护小鼠抵抗致死剂量的１８３２３菌株的脑内攻击，与ＰＴ、ＦＨＡ组成的无细胞百日咳菌苗的效力，较含ＰＴ和ＦＨＡ的组分菌苗为高。表明６９ＫＤａ蛋白与ＰＴ、ＦＨＡ显示协同保护作用，有望成为无细胞百日咳菌苗的另一候选组分。