小春花木犀草素提取工艺优化及其抗氧化活性研究

为优化小春花木犀草素提取工艺,并探讨其抗氧化活性。以小春花为试材,采用单因素和正交试验对小春花中天然产物木犀草素的提取工艺进行优化,得到最佳提取条件,并通过测定小春花提取物对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)的清除能力及总还原力,研究其抗氧化活性。结果表明,最佳提取工艺条件为:超声时间25 min,液料比25∶1(mL/g),乙醇体积分数60%,超声温度85℃,通过验证试验得到该条件下木犀草素提取量为4.88 mg/g。抗氧化试验结果表明,小春花提取物对DPPH·、·OH和ABTS+自由基清除率的IC50分别为14.9、78.6、80.2 mg/L,是一种潜在的天然抗氧化剂。优化的小春花中木犀草素提取工艺合理可行,且提取物具有较强的抗氧化活性。

绒毛阴地蕨石油醚部分化学成分研究

目的：研究绒毛阴地蕨的化学成分。方法：应用各种色谱技术分离纯化，通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果：从95％乙醇提取物中分离得到10个化合物，分别鉴定为：30-nor-21β-hopan-22-one（1），β-谷甾醇（2），木犀草素（3），thunberginol A（4），芹菜素（5），（6′-O-palmitoyl）-sitosterol-3-O-β-D-glucoside（6），β-胡萝卜苷（7），1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，4E，8Z）-2-[（2R-hydroxyhexadecanoyl）amino]-4，8-octadecadiene-1，3-diol（8），木犀草素-7-O-葡萄糖苷（9），蔗糖（10）。结论：化合物1-10均为首次从该属植物中获得。

一朵云不同部位氨基酸的分析与评价

采用盐酸水解法,利用高效液相色谱仪对一朵云所含氨基酸进行定性、定量分析。结果显示,一朵云根含有至少14种氨基酸,氨基酸总量为5.12%,其中,有4种是人体必需氨基酸,含量为1.95%,占氨基酸总含量的38.08%;一朵云茎叶含有至少17种氨基酸,氨基酸总量为2.17%,其中,有7种是人体必需氨基酸,含量为0.85%,占氨基酸总含量的39.17%,一朵云的根及茎叶必需氨基酸的构成比例均基本符合食品法典委员(FAO/WHO)的理想模式标准。根及茎叶均含有8种味觉氨基酸(其中2种鲜味氨基酸,4种甜味氨基酸,2种芳香氨基酸),总含量分别为2.9%、1.8%,3种特殊氨基酸总含量分别为1.44%、0.62%。最后用模糊隶属函数法进行综合评价发现,一朵云的根氨基酸质量较好;茎叶氨基酸质量相对较差。这些结果将为一朵云的开发利用奠定重要基础。

苗药一朵云中微量元素含量的测定

[目的]测定黔东南林区野生苗药一朵云的微量元素的的含量,为该地苗药资源开发和利用提供依据。[方法]采用火焰原子吸收光谱法测定样品中微量元素锌、铁、镍、铜的含量。[结果]样品中微量元素锌、铁、镍和铜的含量分别为41.40、587.42、2.31和5.91mg/kg。[结论]苗药一朵云中含有适量的微量元素,值得进一步开发利用。

一朵云不同部位营养成分分析及安全性评价

为研究云南野生植物一朵云(Botrychium ternatum(Thunb.)Sw.)的营养价值及开发前景,测定了一朵云的营养成分及重金属、硝酸盐和亚硝酸盐含量,并将一朵云与4种野生蔬菜和药食两用植物进行了营养成分含量和硝酸盐、亚硝酸盐含量的对比,并对一朵云的营养价值和重金属、硝酸盐和亚硝酸盐风险进行了评估。研究结果表明:1)一朵云茎叶和根的粗蛋白、粗脂肪、总糖、纤维素和灰分的含量分别为3.70%和3.17%、8.15%和5.40%、8.50%和1.40%、8.43%和1.48%、7.0%和3.80%,均比经常食用的4种野生蔬菜高。此外,一朵云茎叶和根均还有丰富的维生素B1、维生素B2、维生素B6及矿物质元素K、Na、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn,尤其是维生素B6和Ca、Fe的含量极高;2)一朵云根及茎叶中均未检测出重金属汞,但是,含有一定量的重金属Cd、Pb,但且其含量未超出蔬菜限量标准及中草药限量标准。此外,一朵云茎叶及根均含有亚硝酸盐和硝酸盐,但是含量极低。

阴地蕨全转录组分析及植物激素信号转导相关基因筛选

该研究以新鲜阴地蕨全株为材料,用Illumina HiSeq 2500平台进行全转录组测序,干净序列经组装后得单一基因(Unigene),将Unigene在非冗余蛋白/核酸数据库(nonredundant protein database,NR)、核酸序列数据库(nucleotide sequence database,NT)、基因本体论数据库(gene ontology,GO)、蛋白质真核同源数据库(clusters of eukaryotic orthologous groups,COG)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、蛋白质序列数据库SwissProt和Interpro进行生物信息学分析。结果表明:共获得干净序列6.67 Gb,组装后得到58 646个Unigene,平均长度为1 023 bp,Unigene在上述数据库的总体注释率为69.25%。其中,在GO数据库中,20 762个基因被注释到生物功能、细胞组分和分子功能3个本体的52个功能组,COG注释了20 633个基因并将其划分为25个功能簇;在KEGG数据库中,比对注释了29 377个基因,可划分为5个大类、19个亚类代谢途径,据此筛选出八类植物激素信号转导相关的41个基因家族。通过比对共得到43 102个编码序列(coding sequence,CDS),平均长度为749 bp,N50为1 137;筛选到60个转录因子(transcript factor,TF)家族共1 502个转录因子基因;共发现17 195个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中碱基转换11 122个,颠换6 073个;发现了8 245个简单序列重复(simple sequence repeat,SSR),数量最多的为二核苷酸重复和三核苷酸重复。这些结果从功能和结构方面提供了阴地蕨全转录组信息和涉及植物激素信号转导的潜在基因,为进一步深入研究阴地蕨的生长发育、遗传、品种鉴别等提供了分子生物学的基础数据。

一朵云挥发油成分的GC/MS分析

采用水蒸气蒸馏-乙醚萃取法提取一朵云中挥发油成分,利用气相色谱-质谱联用分析并人工图解析挥发油的化学成分.鉴定出47个化合物,相对含量高达86.62%.主要成分依次为糠醛(2.08%),邻-羟基苯甲酸(15.74%),2-羟基3-甲基苯甲醛(1.65%),α-桉叶油醇(2.41%),甜没药萜醇(2.70%),甲基-1-(6-羟基-2-异丙基)-苯并呋喃基酮(6.40%),正十六酸(13.96%),(9Z,12Z)-9,12-共轭二烯十六酸(11.85%),17-十八烯-14-炔-1-醇(9.16%)等.

苗药一朵云的矿质元素锰、钙的测定

用火焰原子吸收光谱法测定产地为黔东南林区剑河县的野生苗药一朵云的矿质元素锰、钙的含量,并讨论了人体内锰、钙的作用与该苗药相关药用价值的关系.

高效液相色谱法测定阴地蕨中山奈酚和槲皮素含量

目的：通过高效液相色谱-质谱串联（ HPLC-MS/MS）法鉴定阴地蕨中山奈酚成分，并建立HPLC法同时测定阴地蕨中山奈酚和槲皮素含量。方法采用 Agilent 1200 LC高效液相色谱仪及 API3200 QTRAP MS/MS质谱仪， Ecilipse XDB-C18（15 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱，甲醇-0.1％甲酸溶液（85：15）为流动相，鉴定阴地蕨中山奈酚及槲皮素；用Agilent 1260 LC高效液相色谱仪，Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×4.6 mm，5μm），甲醇-0.4％磷酸溶液（45：55）为流动相，流速0.8 mL·min－1，检测波长360 nm，测定阴地蕨中的山奈酚及槲皮素含量。结果出现m/z 287.1[M＋H]＋及m/z 301.0[ M＋H]＋峰为质谱的特征峰，分别与山奈酚及槲皮素对照品具有高相似度，证明样品中含有山奈酚和槲皮素；山奈酚和槲皮素的线性范围均为2.500~25.000μg·mL－1，r分别为0.9999和0.9998；精密度实验RSD分别为0.98％和0.79％（ n＝5）；加样回收率RSD分别为1.89％，2.70％（ n＝5）。结论阴地蕨中含有丰富的山奈酚及槲皮素，HPLC法适于同时测定阴地蕨中的山奈酚及槲皮素含量，方法简便可行，重复性好，精密度高，结果可靠。

阴地蕨多糖提取工艺及抗肿瘤活性测定研究

水提醇沉法提取阴地蕨多糖,以多糖得率为指标,考察提取温度、提取时间、料液比及提取次数对多糖得率的影响,通过正交试验优化提取工艺参数;采用MTT法检测阴地蕨多糖对癌细胞CT-26、K562、WEHI-3细胞作用48 h后的增殖抑制作用。试验结果表明,提取时间和温度是阴地蕨多糖提取率最主要的影响因素,优化的最佳提取条件为:温度100℃,料液比为1∶40(mg/m L),提取时间4 h和提取次数3次。阴地蕨多糖对3种肿瘤均有生长抑制作用,且呈现一定的浓度依赖性,抑制作用强弱为WEHI-3>K562>CT-26,半数抑制浓度IC50分别为0.85、2.13、2.52 mg/m L。

阴地蕨属植物研究进展

阴地蕨属植物的主要化学成分为黄酮类化合物和多糖类化合物,具有广泛的生物活性.对近年来该属植物的分布、形态特征、化学成分、生物活性等几个方面进行了综述.

小春花镇咳平喘有效部位活性筛选

目的:考察小春花不同提取部位的镇咳平喘作用。方法:通过氨水引咳法检测咳嗽的潜伏期和3 min内咳嗽次数,组胺喷雾致喘法检测引喘潜伏期,卵蛋白致敏法检测气道反应性、ELISA法检测细胞因子(IL-4,IFN-γ)水平、光镜下肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的分类计数和观察肺组织病理学改变。结果:小春花氯仿层和乙酸乙酯层可极显著减少小鼠在3 min内的咳嗽次数(P<0.01);石油醚层和氯仿层与对照组相比能极显著延长哮喘潜伏期(P<0.01),乙酸乙酯层具有显著性差异(P<0.05);小春花各部位与模型组相比均能降低哮喘小鼠气道反应性,其中石油醚层、氯仿层和正丁醇层能明显地降低哮喘小鼠的气道缩窄指数(Penh)(P<0.01),氯仿层和乙酸乙酯层能极显著性增加哮喘小鼠的潮气量(P<0.01)以及降低BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例(P<0.01);石油醚层和乙酸乙酯层能显著降低IL-4的水平和IL-4/IFN-γ的比值(P<0.05)。结论:氯仿层和乙酸乙酯层具有明显的镇咳作用并且能明显降低气道炎症反应,提示为小春花镇咳、平喘的有效部位。

原子荧光光谱法测阴地蕨的硒含量

采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定了阴地蕨根和叶中的硒含量.结果表明,硒含量在0～10ng/mL之间线性关系良好,其相关系数r=0.999 6,其回归方程为y=140.02x+27.回收率为98.9%～101%,相对标准偏差RSD=0.73%,检出限为1.45ng/g;硒在阴地蕨全草中分布比较均匀.该方法具有准确度较高、重现性好和线性范围宽的优点.

三种国产阴地蕨科植物叶的表皮构造

运用光学显微镜和扫描电镜对三种国产阴地蕨科植物 :劲直蕨萁 (Botrypusstrictus)、小阴地蕨(Botrychiumlunaria)和薄叶阴地蕨 (Sceptridiumdaucifolium)叶的成熟表皮构造进行了详细观察和研究。它们具有共同的特征 :气孔散生 ,气孔类型无规则型 ,气孔长轴方向多与叶脉延伸方向一致。但也存在明显区别 ,特别是劲直蕨萁与另外二个种的区别更为明显 :前者表皮细胞垂周壁直 ,相邻气孔不接触 ,保卫细胞平周壁具细条纹。但后二者之间亦有一定区别 :薄叶阴地蕨的气孔为下生式 ,不下陷 ,而小阴地蕨的气孔为两面气孔型 ,气孔下陷。本文是国内首次对阴地蕨科叶的表皮构造进行研究 ,其研究结果表明 ,表皮构造在阴地蕨科植物的鉴定上具有重要意义 ,并且在研究阴地蕨科的分类以及起源和演化上也有一定参考价值。

阴地蕨粗多糖对细菌和肿瘤细胞增殖的抑制作用

近年来,蕨类植物的有效成分研究备受人们关注,药用蕨类植物含有黄酮类、酚酸类、萜类、生物碱和多糖等化学成分[1];其多糖除了参与构成细胞壁和储藏营养外,还具有提高免疫力、抗菌和抗癌的功效[2-3]。阴地蕨〔Botrychium ternatum(Thunb.)Sw.〕隶属于阴地蕨科(Botrychiaceae)阴地蕨属(Botrychium Sw.),为传统药用植物,全草入药,具有清热解毒、平肝息风、止咳、止血和明目去翳的功效[4-5]。

40种蕨类植物matK基因的系统分类及分子进化研究

采用“放松分子钟”模型、氨基酸位点正选择模型和分子内共进化网络估算方法,对蕨类植物Ⅱ型内含子成熟酶蛋白K(Maturase K,MATK)编码基因matK的进化趋势进行研究。结果显示:matK基因在蕨类植物系统学研究中具有一定的应用价值,与rbcL基因和psaA基因联合后能显著提升系统发育树的可信度;蕨类植物MATK蛋白中存在少数曾经历正选择的位点;MATK蛋白内部有多对氨基酸位点共同构成共进化网络。在被子植物兴起环境改变后,MATK蛋白部分位点发生适应性进化,通过位点间共进化网络协同作用方式提升蕨类植物对新光合环境的适应能力。

阴地蕨属药用植物matK基因编码区全序列测定及编码产物研究

以阴地蕨属(Botrychium)5种药用植物的matK基因为对象,分析matK基因编码区全序列和其编码产物MATK蛋白的氨基酸序列特征,并比较他们在用于阴地蕨属药用植物系统发育关系研究中的差异。结果显示,阴地蕨属5种植物matK基因全长为1500~1503 bp,共有153个变异位点,其编码产物均为不稳定的亲水性蛋白,无跨膜结构,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。系统发育分析结果表明,基于matK基因序列的系统发育分析更适合于阴地蕨属种间亲缘关系的鉴定,说明matK基因在阴地蕨属植物的鉴定中具有一定的应用价值。

阴地蕨、银粉背蕨总黄酮和总酚含量及其抗氧化能力分析

测定了阴地蕨(Botrychium ternatum (Thunb) Sw.)和银粉背蕨(Aleuritopteris argentea(Gmel.) Fee)乙醇提取物的总黄酮和总酚含量,及其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力、2,2'-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除能力和Fe的还原力.结果表明:1)阴地蕨和银粉背蕨乙醇提取物样品中总黄酮质量分数在4. 2～41. 2 mg·g^(-1)之间,总酚质量分数在3. 9～16. 4 mg·g^(-1)之间,两者地上部分总黄酮和总酚含量均高于地下部分的,阴地蕨与银粉背蕨的总黄酮和总酚含量存在一定差异; 2)阴地蕨和银粉背蕨的乙醇提取物对DPPH、ABTS自由基具有一定的清除能力及还原力,且提取物抗氧化活性与总黄酮和总酚含量存在浓度依赖.

阴地蕨不同采收期木犀草素含量的动态积累研究

目的:研究阴地蕨中化学成分木犀草素的动态积累。方法:采用反相-高效液相色谱法测定不同产地、不同采收期、不同部位阴地蕨药材中木犀草素的含量,色谱柱:色谱柱为菲罗门ODS(150 mm×4.6 mm,4 μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(45∶ 55);体积流量:1 mL·min^-1;检测波长:360 nm。样品平均回收率为98.18%, RSD 为1.09%( n =6)。结果:阴地蕨药材中木犀草素的含量在不同生长时期、不同部位有明显的变化规律。不同部位木犀草素的含量由高到低的顺序为:叶、茎、根;一年生长期内在8月份阴地蕨根、茎、叶中木犀草素的含量最高。结论:阴地蕨中木犀草素的积累动态将为阴地蕨生物特性的形成及阴地蕨药材采收期提供一定的科学依据。

阴地蕨药材质量标准研究

目的对阴地蕨药材进行生药鉴定研究,以制定其药材的质量标准。方法观察阴地蕨药材的性状和显微鉴别特征;以木犀草素为对照品进行TLC色谱研究;采用紫外分光光度法测定总黄酮,高效液相色谱法测定木犀草素含量;并检查其水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物。结果 TLC采用硅胶G板,以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20︰10︰3︰1.5)为展开剂,1%FeCl_3乙醇溶液为显色剂,可见清晰的斑点;紫外分光光度法以芦丁为对照品,以总黄酮含量为指标,对8批药材测定,药材中阴地蕨总黄酮含量不低于12.55 mg·g^(-1);HPLC法以木犀草素为对照品,以甲醇-水(含0.5%冰醋酸)为流动相,检测波长350 nm,对8批药材测定,药材中阴地蕨木犀草素含量不低于13.75μg·g^(-1)。结论阴地蕨药材的显微、TLC鉴别、总黄酮及木犀草素的含量测定方法准确可靠,可有效控制阴地蕨药材的质量。