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血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用 被引量:6
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作者 高美玲 王红 +2 位作者 张彩云 兰婧 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2221-2227,共7页
目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A H... 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。 展开更多
关键词 血清型a肉毒杆菌神经毒素重链 Neuro-2a细胞株 神经突起再生 细胞外信号调节激酶 蛋白激酶B
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A型肉毒毒素受体结合区Hc在重组SFV复制子载体中的表达 被引量:1
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作者 余云舟 孙志伟 +1 位作者 王双 俞炜源 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期124-129,共6页
为了在哺乳动物细胞中表达A型肉毒毒素Hc抗原,构建了含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的基于RNA和DNA的重组Semliki森林病毒(Semliki forest virus,SFV)复制子表达栽体。RNA和DNA复制子栽体转染BHK21细胞后,经间接免疫荧光、Western印迹和... 为了在哺乳动物细胞中表达A型肉毒毒素Hc抗原,构建了含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的基于RNA和DNA的重组Semliki森林病毒(Semliki forest virus,SFV)复制子表达栽体。RNA和DNA复制子栽体转染BHK21细胞后,经间接免疫荧光、Western印迹和ELISA检测,结果表明非分泌型和分泌型的Hc抗原在细胞中都得到了有效地表达;而且复制子表达载体与辅助病毒载体共转染均可制备高滴度的重组病毒颗粒,该重组病毒颗粒感染细胞后,也都能表达Hc抗原。以上结果表明,基于RNA和DNA的重组SFV复制子表达载体在细胞中均可有效地表达Hc抗原和制备具有感染能力并能表达Hc抗原的重组病毒颗粒。基于RNA和DNA的重组SFV复制子表达载体的构建和含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的重组病毒颗粒的获得,为进一步观察SFV复制子疫苗的免疫原性奠定了基础,从而为A型肉毒毒素新型疫苗的研制提供了新途经。 展开更多
关键词 semliki森林病毒 复制子 a型肉毒毒素 受体结合区Hc 重组病毒颗粒
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A型肉毒杆菌神经毒素重链干预大鼠脊髓损伤后蛋白表达的初步研究 被引量:1
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作者 兰婧 王红 +2 位作者 白娟 王亚芳 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2125-2132,共8页
目的:初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响,为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法:复制大鼠单侧腰段脊髓损伤... 目的:初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响,为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法:复制大鼠单侧腰段脊髓损伤模型;采用SDS-PAGE及双向电泳观察不同剂量BoNT/A HC(2μg、4μg、6μg和8μg)对脊髓损伤后局部(包括损伤部位及其近头端部分脊髓组织)蛋白表达谱的干预作用。结果:大鼠单侧腰段脊髓损伤2 d时局部脊髓组织结构明显破坏崩解,损伤波及左侧脊髓灰质及白质;脊髓损伤局部SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色显示,于损伤同时局部一次性注射不同剂量BoNT/A HC后,某些蛋白表达与单纯损伤组相比明显不同,而与正常组基本一致;双向电泳结果进一步显示,损伤局部注射6μg BoNT/A HC后2 d和20 d时,在不同等电点及不同蛋白分子量水平上,有10余种蛋白表达与单纯损伤组明显不同,呈向正常转化的趋势。结论:大鼠脊髓损伤局部注射BoNT/A HC一定时间可影响损伤局部蛋白表达谱的变化,这种变化呈现由损伤造成的蛋白表达变化被转向正常的趋势。 展开更多
关键词 脊髓损伤 a型肉毒杆菌神经毒素重链 神经损伤 神经再生
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A型肉毒素重链干预神经细胞组蛋白3乙酰化水平的初步研究
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作者 兰婧 刘福 +5 位作者 高扬 李志强 刘雅 赵明伟 袁海霞 李夏青 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第6期4-9,共6页
目的通过对离体神经细胞培养及大鼠在体脊髓损伤模型施予BoNT/A重链,观察损伤局部组蛋白乙酰化水平的变化,为探讨BoNT/A重链干预神经细胞再生的分子机制提供实验依据。方法将BoNT/A重链加入细胞培养液或在脊髓损伤模型基础上局部给予小... 目的通过对离体神经细胞培养及大鼠在体脊髓损伤模型施予BoNT/A重链,观察损伤局部组蛋白乙酰化水平的变化,为探讨BoNT/A重链干预神经细胞再生的分子机制提供实验依据。方法将BoNT/A重链加入细胞培养液或在脊髓损伤模型基础上局部给予小剂量BoNT/A重链;收集细胞及损伤局部脊髓组织,采用免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot等方法对细胞和脊髓组织内选择性组蛋白亚类的乙酰化水平进行检测。结果不论是体内应用还是培养液内加入BoNT/A重链,细胞和组织内组蛋白3的乙酰化水平皆明显增多;BoNT/A重链所致的Neuro-2a细胞组蛋白3乙酰化水平的增高与神经突起的增长相匹配,即同一时间点组蛋白乙酰化水平显著增高的同时,神经突起的生长也呈显著增长;脊髓损伤基础上给予BoNT/A重链所显示的组蛋白3乙酰化的表达量增高呈现双时相高峰(2 h和48 h)。结论 BoNT/A重链可促进组蛋白3的乙酰化;在同一时间点,组蛋白3的乙酰化水平与神经突起增长的长度相一致;组蛋白3乙酰化可能是BoNT/A重链促神经突起生长的相关机制之一。 展开更多
关键词 a型肉毒素 a型肉毒素重链 组蛋白乙酰化 乙酰化/去乙酰化 神经突起再生 脊髓损伤
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A型肉毒毒素轻链基因的克隆及其结构分析 被引量:2
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作者 贾宏丽 赵金红 +1 位作者 王景林 康琳 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期116-118,共3页
以文献报道的A型肉毒毒素基因全序列为标准,设计并合成一对引物,自肉毒梭菌基因组中扩增出肉毒毒素轻链基因片段,并将扩增产物与pGEM-T载体在体外连接,构建测序重组质粒,进行测序和基因结构分析。PCR扩增获得了产物为1364bp的DNA片段,... 以文献报道的A型肉毒毒素基因全序列为标准,设计并合成一对引物,自肉毒梭菌基因组中扩增出肉毒毒素轻链基因片段,并将扩增产物与pGEM-T载体在体外连接,构建测序重组质粒,进行测序和基因结构分析。PCR扩增获得了产物为1364bp的DNA片段,测序结果与DNA数据库对照检索分析证明,此基因片段与GenBank中的A型肉毒毒素LC基因的一致性达99.9%以上,可以认为克隆的基因为A型肉毒毒素LC基因。 展开更多
关键词 a型肉毒毒素 轻链 基因克隆 基因结构 毒性 肉毒梭菌
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A型肉毒毒素重链对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10的表达及神经突起再生的影响 被引量:4
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作者 王亚芳 高扬 +4 位作者 李志强 刘雅 赵明伟 袁海霞 李夏青 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1142-1148,1155,共8页
目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损... 目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型基础上局部及鞘内给予BoNT/A重链;于用药后不同时间提取局部蛋白进行双向电泳,并根据双向电泳提示的蛋白点群变化的分子量和等电点,选取SCG10为目标蛋白行Western Blot检测及神经突起测定;通过抓力和热痛敏实验测试损伤侧后肢的运动和感觉功能情况。结果:(1)BoNT/A重链可干预脊髓损伤后局部蛋白谱的变化,MW位于18—25kDa、等电点在5—7范围的蛋白点可以作为蛋白点群变化的代表之一;(2)作为分子量位于18—25kDa/等电点在5—7的蛋白成分之一的SCG10在单纯损伤时较正常对照组其表达有所增高,给予BoNT/A重链后, SCG10的表达显著增强(P<0.05);(3)免疫荧光结果显示:单纯损伤时SCG10的阳性表达主要分布于损伤周边细胞的胞体,应用BoNT/A重链后,SCG10阳性分布于胞浆和细胞突起且以损伤近头端的周边区域较为显著;(4)突起测定结果显示:BoNT/A重链可促进脊髓损伤周边神经细胞突起增长,包括突起数目增多及含有突起的神经细胞百分比增多(P<0.05);(5)给予BoNT/A重链后,损伤侧后肢肌力明显优于单纯损伤组(P<0.05),但感觉功能未见明显改善。结论:脊髓损伤局部给予BoNT/A重链可促进生长相关蛋白SCG10的表达并促进损伤周边神经细胞突起生长,改善肌肉抓力。BoNT/A重链有助于脊髓损伤后的再生修复。 展开更多
关键词 肉毒毒素 a型肉毒毒素重链 脊髓损伤 颈上神经节蛋白10 神经突起 神经再生
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A型肉毒素重链干预对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 王亚芳 兰婧 +2 位作者 刘福 白娟 李夏青 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期12-19,共8页
目的探讨人工重组A型肉毒素重链(Bo NT/A重链)对在体大鼠脊髓损伤局部生长相关蛋白表达的影响,为阐明Bo NT/A重链促神经突起再生机制提供依据。方法建立大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型并局部及鞘内给予Bo NT/A重链;对用药后不同时间局部... 目的探讨人工重组A型肉毒素重链(Bo NT/A重链)对在体大鼠脊髓损伤局部生长相关蛋白表达的影响,为阐明Bo NT/A重链促神经突起再生机制提供依据。方法建立大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型并局部及鞘内给予Bo NT/A重链;对用药后不同时间局部骨髓组织进行双向电泳检测总体蛋白表达;选择生长相关蛋白-43(GAP-43)和颈上神经节蛋白10(SCG 10)进行蛋白印迹和免疫荧光检测以观察二者在Bo NT/A重链影响下的表达及分布。结果 (1)单侧腰髓离断损伤模型动物呈现明显单侧运动及感觉功能障碍;(2)脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可影响损伤局部蛋白表达谱变化:Bo NT/A重链可引起损伤局部蛋白点群在变化的基础上逆转或表达进一步增加,尤以MW位于35~45 k Da及18~25 k Da、等电点在5~7范围的蛋白点表现明显;(3)蛋白印迹和免疫荧光染色结果提示:Bo NT/A重链可促进p-GAP 43和SCG 10的表达(P<0.05),且p-GAP 43及SCG 10主要以损伤周围细胞阳性明显,胞浆及突起皆呈阳性。结论脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可促进脊髓损伤后选择性生长相关蛋白p-GAP 43和SCG 10的表达。 展开更多
关键词 肉毒素 a型肉毒素重链 脊髓损伤 生长相关蛋白-43(GaP-43) 颈上神经节蛋白10(SCG 10)
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A型肉毒毒素重链在大肠杆菌中的厌氧表达
8
作者 韦娜 付楚溪 +2 位作者 汪建华 熊向华 张惟材 《生物技术通讯》 CAS 2019年第6期751-755,共5页
目的:用大肠杆菌表达可溶性A型肉毒毒素(BoNT/A)重链。方法:按大肠杆菌偏好密码子设计合成重链N端(HN)编码序列,重叠延伸PCR连接HN和重链C端(HC)构成重链基因;将重链基因构建至pTIG-TrxA载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),厌氧培养与好氧培养... 目的:用大肠杆菌表达可溶性A型肉毒毒素(BoNT/A)重链。方法:按大肠杆菌偏好密码子设计合成重链N端(HN)编码序列,重叠延伸PCR连接HN和重链C端(HC)构成重链基因;将重链基因构建至pTIG-TrxA载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),厌氧培养与好氧培养分别诱导表达重链;SDS-PAGE比较表达条带,ELISA比较不同表达条件的重链表达水平。结果:测序结果表明正确设计合成了HN编码序列;SDS-PAGE结果显示重链厌氧表达条带的相对分子质量与预期一致,好氧表达条带的相对分子质量比预期小;定性ELISA结果显示静置培养表达的重链活性远远高于摇床培养。结论:BoNT/A重链在大肠杆菌中厌氧条件下表达活性明显高于好氧表达,为厌氧生物蛋白在大肠杆菌中的表达提供了新思路。 展开更多
关键词 a型肉毒毒素 重链 大肠杆菌 厌氧条件
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Diaminodiacid bridge improves enzymatic and in vivo inhibitory activity of peptide CPI-1 against botulinum toxin serotype A 被引量:1
9
作者 Jintao Shen Jia Liu +5 位作者 Shuo Yu Yunzhou Yu Chao Huang Xianghua Xiong Junjie Yue Qiuyun Dai 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2021年第12期4049-4052,共4页
The replacement of the disulfide bridge of CPI-1, a peptide inhibitor of light chain of Botulinum toxin serotype A, with the thioether-containing and biscarba-containing diaminodiacid bridge leads to a significant dec... The replacement of the disulfide bridge of CPI-1, a peptide inhibitor of light chain of Botulinum toxin serotype A, with the thioether-containing and biscarba-containing diaminodiacid bridge leads to a significant decrease in the degradation by trypsin and increase in the detoxification activity in vivo, the addition of hydrophobic or positive amino acid at C-terminus of modified peptides further improves the inhibitory activity. 展开更多
关键词 botulinum neurotoxin serotype a Light chain inhibitor Peptide CPI-1 Diaminodiacid bridges Inhibitory activity
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B型肉毒毒素重组Hc亚单位疫苗的免疫原性研究 被引量:1
10
作者 陈博阳 周果 +2 位作者 师丹阳 周晓巍 余云舟 《生物技术通讯》 CAS 2017年第4期435-440,共6页
目的:用大肠杆菌表达重组B型肉毒毒素受体结合区Hc抗原(BHc)作为亚单位疫苗,并研究其免疫原性。方法:构建pTIG-Trx-BHc原核表达载体,用大肠杆菌表达并纯化重组BHc抗原;免疫BALB/c小鼠以研究它的免疫原性。结果:大肠杆菌表达并纯化获得... 目的:用大肠杆菌表达重组B型肉毒毒素受体结合区Hc抗原(BHc)作为亚单位疫苗,并研究其免疫原性。方法:构建pTIG-Trx-BHc原核表达载体,用大肠杆菌表达并纯化重组BHc抗原;免疫BALB/c小鼠以研究它的免疫原性。结果:大肠杆菌表达并纯化获得了重组BHc抗原,免疫小鼠后能刺激机体产生高效价的抗BHc抗体和保护性免疫反应。该重组BHc亚单位疫苗1μg剂量2次免疫小鼠即可产生对104LD50剂量B型肉毒毒素攻毒的完全保护,血清中和效价可达1.33 IU/m L。结论:大肠杆菌表达的重组BHc抗原具有良好的免疫原性,能够有效地保护小鼠抵抗B型肉毒毒素的攻击,该BHc抗原能够作为亚单位候选疫苗预防B型肉毒毒素中毒。 展开更多
关键词 B型肉毒毒素 重链受体结合区C端片段(Hc) 重组亚单位疫苗 免疫原性
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