牛黄熊脱氧胆酸抑制TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解

目的探讨牛黄熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解及其可能的机制。方法以3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,设:①对照组;②TNF-α(50 ng/ml)组;③TUDCA(1 mmol/L)+TNF-α(50 ng/ml)组;④TUDCA组(1 mmol/L)。通过油红O染色观察脂滴形态变化并测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标,同时用Western blot检测脂滴包被蛋白perilipinA蛋白表达。结果 TNF-α可以显著刺激3T3-L1细胞脂肪分解,包括功能学显示甘油释放量显著增加[(2.784±0.104)mmol/L,P<0.01],形态学显示脂滴碎裂;TUDCA可以明显抑制TNF-α刺激的3T3-L1细胞脂肪分解,包括阻止脂滴形态的改变,逆转甘油的释放[(1.718±0.085)mmol/L,P<0.01]。通过Western blot检测结果显示TNF-α可以下调perilipin A蛋白表达[(0.227±0.004),P<0.01],而TUDCA可以阻断TNF-α对perilipin A蛋白表达的下调作用[(0.705±0.066),P<0.01]。结论 TUDCA可能通过阻止perilipin A蛋白下调而抑制TNF-α诱发脂肪分解,通过减少游离脂肪酸FFA,从而对胰岛素抵抗、糖尿病等具有一定的改善作用。

TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解及其相关基因转录表达的影响

为探讨TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解的调控作用及其机制,用1、101、00 ng.mL-13种剂量TNF-α作用体外培养的猪原代脂肪细胞24 h,及10 ng.mL-1TNF-α处理脂肪细胞1、6、12、244、8 h。使用甘油试剂盒,检测细胞甘油的释放量,RT-PCR检测ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipinA表达量变化。结果表明,TNF-α以浓度和时间依赖性的方式促进猪原代脂肪细胞甘油的释放(P<0.05);同时下调ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipin A mRNA表达量。说明:TNF-α主要通过下调perilipin A的表达,降低其对脂滴的保护作用,增加脂肪分解酶和脂滴的接触,促进了猪脂肪细胞的脂解作用。

瘦素通过JAK2/STAT3途径调控椎间盘髓核细胞的分解代谢

目的:探讨瘦素对椎间盘髓核细胞中退行性变相关分解代谢基因的影响,并探讨其机制。方法:培养SD大鼠髓核细胞,行cytokeratin 19和II型胶原免疫组化进行鉴定。使用瘦素和(或)白细胞介素1β(IL-1β)作用于髓核细胞,real-time PCR分析MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-4、ADAMTS-5、aggrecan和COL2A1的表达水平。阿利辛蓝染色和免疫组化分析II型胶原和蛋白多糖的生成。Western blot分析激活的信号通路,并使用不同通路的抑制剂来分析信号通路的作用。结果:Real-time PCR显示单用瘦素可以提高MMP-1、MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5的表达水平;IL-1β和瘦素可以协同提高MMP-1、MMP-3和ADAMTS-5的表达水平;瘦素降低髓核细胞II型胶原的表达,PI3K/Akt通路和JAK2/STAT3通路均被激活,但使用抑制剂后显示只有JAK2/STAT3信号通路参与瘦素对髓核细胞的作用。结论:瘦素通过调节JAK2/STAT3信号通路促进髓核细胞的分解代谢,可能是肥胖与椎间盘退变相互关联的机制。

基于细胞自动机与奇异值分解的零水印算法

针对常规水印算法对JPEG压缩与几何攻击鲁棒性较差的问题,提出了一种基于细胞自动机(CA)变换与奇异值分解(SVD)的零水印算法。首先对图像进行二维细胞自动机变换,分离出低频近似图像并保存作为密钥的变换参数;然后对低频图像分块并在每个子块上进行奇异值分解,通过细胞自动机变换规则在每个子块的奇异值矩阵上构造零水印;最后,图像认证时根据两个图像的水印相似度是否大于阈值来判断图像是否遭遇篡改。通过实验证明,该水印算法具有良好的不可见性和安全性,并且对于JPEG压缩与几何攻击表现出较强的鲁棒性。

复方861对HSC-T6细胞基质分解素1mRNA表达水平影响的研究

为观察复方 86 1对HSC -T6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于HSC -T6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,复方 86 10 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等不同浓度的HSC -T6细胞mRNA表达水平依次为 2 75± 0 35、3 0 0± 0 0 1、3 5 0± 0 71,与空白对照组比较 ,可明显提高MMP3 mRNA表达水平 (P <0 0 5或P <0 0 1)。因此 ,复方 86 1提高HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平 ,可能是其促进胶原降解 ,抗肝纤维化的作用机理之一。

白细胞介素-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响

为了研究白细胞介素(Interleukin,IL)-6对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞用不同浓度的IL-6(0、25、50、75、100 ng.mL-1)处理24或48 h。通过测定培养液中的甘油浓度检测脂肪细胞的脂解率;采用形态学观察检测脂肪细胞中甘油三酯积聚量的变化;分别用RT-PCR和Western blot检测脂肪细胞中perilipin A、PPARγ2(Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma2)、HSL(Hormone-sensitive lipase)和AT-GL(Adipose triglyceride lipase)的mRNA及蛋白表达。结果显示,IL-6以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解,同时PPARγ2和perilipin A的mRNA及蛋白表达被显著下调;HSL的mRNA表达显著上调,但其蛋白表达水平并未发生显著改变;ATGL的mRNA和蛋白表达均未发生显著改变。上述研究结果表明,IL-6通过抑制PPARγ2及其靶基因perilipin A的表达直接刺激猪脂肪细胞的脂肪分解。

重组MMP-14分解区蛋白诱导成骨样细胞凋亡的机制

目的 :观察重组基质金属蛋白酶 1 4 (matrixmetalloproteinase 1 4 ,MMP 1 4 )分解区蛋白 (recombinantma trixmetalloproteinase 1 4catalyticdomain ,RMC)对人成骨样细胞SaOS 2凋亡的影响 ,探讨MMP 1 4分解区蛋白在骨代谢中的作用。方法 :MMP 1 4分解区蛋白在细胞培养液中的表达用Westernblotting检测。RMC对SaOS 2细胞MMP 2酶原激活的影响用明胶酶谱检测 ,并检测其对SaOS 2细胞黏附功能的影响。细胞凋亡用吖啶橙 /溴乙啶染色与ELISA检测。结果 :观察到MMP 1 4分解区蛋白在SaOS 2细胞培养液中 5 6kD的MMP 1 4表达。RMC促进细胞凋亡的作用呈剂量依赖性 ,且此作用可被EDTA阻断。RMC激活MMP 2酶原 ,抑制SaOS 2细胞在Ⅰ型胶原上的黏附。结论 :重组MMP 1 4分解区蛋白可通过降解骨基质蛋白 ,诱导人成骨样细胞SaOS

色氨酸分解代谢对T细胞分化增殖的影响

色氨酸是动物必需氨基酸之一。体内色氨酸在吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)等相关酶的作用下进行分解代谢,发挥重要生理作用,包括抑制T细胞分化增殖和影响T细胞功能。本文就色氨酸分解代谢对T淋巴细胞的影响及可能机理作一综述。

猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A经NF-κB/MAPK通路对巨噬细胞RAW264.7影响的研究

通过猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)原核表达蛋白对巨噬细胞RAW264.7进行刺激,结果发现,猪链球菌2型ccpA蛋白可以调节巨噬细胞NO产生,另外该蛋白质可通过对iNOS、NF-κB、p38和ERK1/2MAPK等的调节,从而影响巨噬细胞RAW264.7对细胞因子IL-6、TNF-α和IFN-γ的分泌。该研究为类似蛋白质对免疫细胞NF-κB/MAPK等通路调节影响及细胞因子产生条件探索建立了基础。

基于小波包分解的白细胞胞核边缘提取算法与实现

白细胞胞核的形状是病理学家观察和检查白细胞样本的重要依据,是白细胞自动分类技术的关键。因为通过它可以区分白细胞的种类,所以白细胞胞核的边缘检测对临床标本的自动检测和分类具有重要意义。但是由于在成像过程中,常常混入随机噪声,这使得原始图像(把尺度空间中零尺度下的结果看作是原始图像)的边缘检测比较困难。小波分解是近年来较常用的方法,它以不同尺度下小波变换所获系数的局部极大值来确定图像的边缘。但是小波分解的方式固定,而正交小波包分解可以根据信号的特性灵活的选择分解方式,因而更加适合于图像的边缘检测。本文尝试利用正交小波包分解的方法实现白细胞胞核的提取并最终取得了比较好的效果。

BMP-7对IL-1β作用下软骨细胞合成和分解表型的影响

目的探讨在炎症因子白细胞介素(IL)-1β刺激下,骨形态发生蛋白(BMP)-7对小鼠关节软骨细胞合成表型及分解表型的作用,为BMP-7用于骨关节炎(OA)治疗提供科学证据。方法将原代培养的小鼠关节软骨细胞分为6组,对照组包括未加处理的空白组、IL-1β(5 ng/ml)组,实验组包括3个浓度梯度(10、50、200 ng/ml)BMP-7分别与IL-1β(5 ng/ml)共作用组、单独BMP-7(200 ng/ml)组,作用时间为24 h。用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Y染色体性别决定结构域转录因子(Sox)9等合成基因及基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)-5等分解基因表达变化。再用酶联免疫吸附试验(ELISA)验证MMP-3、MMP-13蛋白表达水平。结果在IL-1β作用下,软骨细胞特异合成基因显著下调并表达分解表型。添加BMP-7后,受抑制的合成基因得到一定程度恢复,MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5等蛋白酶表达量明显减少,其中200 ng/ml BMP-7的促合成、抑分解作用最佳。单独BMP-7作用于软骨细胞会上调aggrecan表达,但不影响ColⅡ和Sox9表达。结论 BMP-7对OA的治疗作用与BMP-7调控炎症环境中软骨细胞合成表型和分解表型的能力相关。

五种功能因子体外促进原代大鼠脂肪细胞分解作用的研究

为了应用现有减肥体外筛选模型,对5种功能因子的减肥作用进行体外筛选,为其开发减肥作用的功能性食品提供科学依据,试验用油酸诱导SD大鼠原代成熟脂肪细胞建立肥胖细胞模型,通过检测脂肪细胞三酰甘油分解产生的甘油浓度,反映熊果酸、齐墩果酸、厚朴酚、芒果苷、芍药苷的体外减肥作用。结果表明:熊果酸、齐墩果酸具有显著促进脂肪细胞中三酰甘油分解的作用,高剂量芍药苷可显著促进脂肪细胞中三酰甘油的分解,芒果苷显著抑制脂肪细胞中三酰甘油的分解,厚朴酚对脂肪细胞中三酰甘油分解无显著影响。说明熊果酸、齐墩果酸可用于具有减肥功效的功能性食品的开发。

激素诱导大鼠离体肝细胞糖原分解的调节

利用大鼠肝细胞激素诱导磷酸化酶α激活,来研究不同激素对cAMP和Ca^(2+)依赖的糖原分解途径的调节。血管加压素和血管紧张素Ⅱ降低胰高血糖素诱导cAMP水平增加,呈明显的剂量效应关系。血管加压素、血管紧张素Ⅱ和苯肾上腺素诱导肝细胞^(45)Ca掺入及其激活磷酸化酶α的时间反应动力学近似。激素诱导离体肝细胞糖原分解具有不同的下调特点,这可能在体内有一定的生理意义。

siRNA干扰ATGL基因表达对猪脂肪细胞脂肪分解的抑制作用

【目的】探讨猪脂肪甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因在脂肪细胞脂解中的作用。【方法】构建针对猪ATGL基因CDS区113和1 358位点的慢病毒干扰载体,包装后用其感染猪成熟脂肪细胞,检测ATGL和激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase,HSL)基因mRNA及其蛋白的表达情况;用甘油试剂盒检测细胞甘油释放量。【结果】成功构建了ATGL基因的慢病毒干扰载体,用其感染猪成熟脂肪细胞后,RT-PCR分析和Western印迹检测结果表明,试验组脂肪细胞ATGL的表达显著下调,HSL的表达没有明显变化;甘油释放量显著降低,其中针对ATGL基因CDS区113位点的siRNA1对ATGL mRNA的干扰效率达55%,甘油释放量降低了49%。【结论】成功构建了猪ATGL基因慢病毒干扰载体,其能显著降低ATGL基因mRNA及其蛋白在猪成熟脂肪细胞中的表达,降低脂肪细胞的甘油释放量,表明ATGL在猪脂肪细胞脂解中有着重要作用,且113位点是ATGL基因CDS区的最佳干扰靶位点。

gAd对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢关键酶表达的影响

目的通过检测3T3-L1脂肪细胞内糖酵解关键酶的表达情况,探讨课题组前期制备的脂联素球状结构域(gAd)对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢的影响。方法用课题组前期制备的gAd(质量浓度依次为10、50、100、300、1 000 ng/mL)干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,干预结束后以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞糖酵解关键酶包括己糖激酶、6-磷酸果糖激酶-1及丙酮酸激酶转录表达情况,以Western blot法检测各组细胞丙酮酸激酶翻译表达情况。结果gAd干预组(5个浓度)己糖激酶的转录表达[(2.02±0.16)、(3.47±0.29)、(4.22±0.33)、(5.83±0.45)、(6.65±0.51)倍]显著高于对照组(1.00±0.00)(F=125.789,P<0.001),6-磷酸果糖激酶-1和丙酮酸激酶的转录表达也显著高于对照组(F分别为85.399和113.661,P均<0.001),同时丙酮酸激酶的翻译表达(12.430%±0.800%、1.700%±3.010%、26.570%±1.114%、52.600%±2.910%、71.130%±10.600%)也显著高于对照组(8.000%±1.610%)(F=161.007,P<0.01)。结论 gAd促进3T3-L1脂肪细胞摄取胞外葡萄糖的同时,激活了细胞内葡萄糖的分解供能代谢途径。

胃泌素对白介素1β诱导的大鼠软骨细胞分解代谢的抑制作用

目的·探究胃泌素对白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠关节软骨细胞的保护作用及其机制。方法·原代培养并鉴定新生大鼠膝关节软骨细胞,MTT法测定胃泌素对细胞活力的影响。10 ng/mL的IL-1β诱导软骨细胞2 d后,胃泌素(1×10^-7 mol/L)处理3 d,实时荧光定量PCR检测软骨细胞分解代谢基因基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和MMP13的表达;Western blotting检测胃泌素信号通路中关键蛋白胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)、P65的表达;另设正常对照组和IL-1β诱导组。结果·1×10^-7 mol/L浓度的胃泌素无细胞毒性作用,并能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞分解代谢基因MMP3和MMP13的高表达。与正常对照组比较,IL-1β诱导组及胃泌素处理组CCKBR的表达均显著升高,且胃泌素处理能显著增加p-ERK的表达,抑制P65的表达。结论·胃泌素能激活CCKBR,诱导ERK磷酸化,抑制P65的活性,从而拮抗IL-1β诱导引起的MMP3和MMP13 mRNA表达升高,进而可能抑制大鼠软骨细胞分解代谢活动。

人与大鼠皮下脂肪细胞分解的受体调节差异研究

用不同的选择性 β受体激动剂分别作用于人和大鼠脂肪细胞，用放射免疫法测定 ｃ Ａ Ｍ Ｐ浓度，并观察不同的选择性 β受体阻断剂对激动剂阻断作用的强度。结果表明，选择性 β３ 受体激动剂作用于大鼠脂肪细胞后能产生 ８３２μｍ ｏｌ／ Ｌ 的ｃ Ａ Ｍ Ｐ，作用人脂肪细胞后仅能产生 １４０μｍ ｏｌ／ Ｌ 的ｃ Ａ Ｍ Ｐ。选择性 β１和 β２ 受体阻断剂阻断异丙肾上腺素对大鼠脂肪细胞的激动作用较弱（分别为 １５％ 和 ２７％ ），选择性 β２ 受体阻断剂约能阻断异丙肾上腺素对人脂肪细胞作用的 ６５％ 。提示大鼠脂肪细胞分解主要由 β３ 受体调节，人则主要由 β２ 受体调节。

细胞外基质分解酶

近年来,随着肝纤维化机制的逐步阐明,基质金属蛋白酶(MMP)——细胞外基质分解酶的重要性越来越受到关注,以活性中心存在Zn^(2+)为特征的MMP基因家族的新分子不断被发现。本文就肝脏中已知的MMP种类及其作用的最新研究进展作一介绍。 一、MMP (一)MMP的类型和结构 MMP是以细胞外基质蛋白为主要底物的一组金属依赖性蛋白酶的总称。近年,数种具有跨膜结构的MMP(membrane-type MMP, MT-MMP)被发现,因而现在主张根据基因结构特征分类。 MMP的基因基本结构由信号肽、前肽、酶活性部位、铰链、血红蛋白结合蛋白类似物5个区域组成,根据与细胞内酶活性有关的弗林蛋白酶识别部位(RXKR)的有无,大致可分成2类,即RXKR型和非RXKR型。前者包括有跨膜结构的4种MT-MMP和无跨膜结构的MMP-11。后者现已分出三型12种,MMP-7(基质溶解素)属短小型,MMP-2、MMP-9属纤维连接蛋白型,最早发现的MMP-1为MMP基本型。 (二)MMP-1、MMP-13 MMP-1是间质型胶原酶,MMP-13又称胶原酶3,可特异性地分解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原。潜在型MMP-1经纤维蛋白溶酶等丝氨酸蛋白水解酶的限定分解和自身的媒触反应转变为中间活性型,再在MMP-3的作用下而变为活性型MMP-1。MMP-1。

树豆酮酸A抑制3T3-L1细胞脂肪合成与分解的作用研究

目的探讨树豆酮酸A(caianonic acid A,CAA)对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂质代谢的影响及其机制。方法诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞加入不同浓度的CAA作用48 h后进行总脂肪、甘油三酯、游离脂肪酸和甘油含量测定。实时荧光定量PCR法检测脂质代谢相关基因的表达。结果CAA明显降低3T3-L1脂肪细胞总脂肪和甘油三酯含量,抑制游离脂肪酸和甘油的释放,下调乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、激素敏感性脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)和脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因的表达,但增加乙酰辅酶A氧化酶(acyl CoA oxidase,ACOX)和肉碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyl transferase 1,CPT-1)基因的mRNA水平。结论 CAA通过抑制脂肪吸收与合成相关基因(ACC、FAS、LPL)的表达,减少脂肪细胞甘油三酯的合成,抑制细胞过度肥大。同时,下调脂肪分解限速酶基因(HSL、ATGL)mRNA水平,促进脂肪酸氧化关键基因(ACOX和CPT-1)的表达减少游离脂肪酸的释放,改善脂肪细胞的脂质代谢平衡。