高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡机制的研究

为揭示高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的机制,研究通过添加0、0.2、1.2 mM的NEFA刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,应用WB和qRT-PCR技术检测FoxO1、pFoxO1、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白和mRNA表达水平。结果显示:NEFA在低浓度0.2 m M时细胞凋亡无明显变化,在高浓度1.2 mM时细胞凋亡极显著增多(P<0.01);NEFA在高浓度1.2 mM时极显著上调G1期细胞数量,显著下调G2期细胞数量;NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1和p-FoxO1蛋白表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax、FoxO1和p-FoxO1的蛋白表达(P<0.01),NEFA在高浓度1.2 mM时极显著下调Bcl-2的蛋白表达(P<0.01)。NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1的mRNA表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax和FoxO1的mRNA表达水平(P<0.01),极显著下调Bcl-2的mRNA水平(P<0.01)。研究表明,高浓度NEFA可以通过FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡和细胞周期阻滞。

酸性神经肽1对VD小鼠脑内SOD、MDA和NO的影响

目的:探讨酸性神经肽1(BANP-1)对血管性痴呆(VD)小白鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的影响。方法:将小白鼠随机分为5组,每组12只,除正常对照组外,其余4组分别在高脂血症的基础上,用颈总动脉缺血再灌注法建立VD模型,其中1组为VD模型组,其它3组在手术后分别给予BANP-11.5g/(kg·d)、0.75g/(kg·d)、0.3g/(kg·d),连续灌胃15d,每天1次,每次1ml。15d后将小白鼠断头处死并立即在冰盘中开颅取脑做组织匀浆,取上清液测MDA、NO含量和SOD活性。结果:VD模型组较正常对照组脑内SOD活性明显降低(P<0.01),MDA、NO含量明显升高(P<0.01)。BANP-1各治疗组较VD模型组脑内SOD活性明显升高(P<0.01),MDA、NO含量明显下降(P<0.01)。结论:BANP-1可明显升高VD小白鼠脑内SOD活性,降低MDA和NO含量。

酸性神经肽1对吗啡成瘾小鼠脑内GABA及环核苷酸含量的影响

目的:探讨酸性神经肽1(bovineacidicneuropeptide1,BANP- 1)对吗啡成瘾小鼠脑内γ 氨基丁酸(γ ami nobutyricacid,GABA)及环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响。方法:48只昆明小鼠随机分为4 组,前10d,吗啡成瘾组、戒断组和BANP -1治疗组每d按100mg/kg注射盐酸吗啡,对照组每d注射生理盐水。第 11d,对照组在注射生理盐水后8h断头处死;吗啡成瘾组在注射盐酸吗啡8h后处死;戒断组在注射盐酸吗啡7.5 h后按4mg/kg注射盐酸纳络酮,0.5h后断头处死;治疗组在注射盐酸吗啡6h后按15mg/kg注射BANP- 1,1.5h 后按4mg/kg注射盐酸纳络酮,0.5h后断头处死。取脑组织匀浆,应用滤纸电泳法测定GABA,应用放射免疫法测 定cAMP和cGMP。结果:吗啡成瘾组各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);戒断组cAMP、cGMP 较对照组升高(P<0.05);BANP 1治疗组GABA及cGMP均高于对照组及戒断组(P<0.01)。结论:BANP- 1可能 通过调节吗啡成瘾小鼠脑内GABA及cGMP水平而发挥治疗作用。

酸性神经肽1对小鼠脑谷氨酸和GABA含量的影响

目的 :探讨酸性神经肽 1(bovineacidicneuropeptide 1,BANP 1)对小鼠脑内谷氨酸 (glutamicacid ,Glu)和GABA含量的影响。方法 :将小鼠随机分为 6组 (每组 15只 ) ,其中 5组按 15mg/kg腹腔注射BANP 1,分别在注射后0 .5h ,1h ,2h ,3h ,4h处死小鼠并取脑匀浆 ;另一组注射生理盐水作对照 ,注射后 1h处死并取脑匀浆 ,用体积分数75 %冰乙醇抽提氨基酸类物质并沉淀蛋白质。应用纸电泳法测定Glu和GABA。结果 :腹腔注射BANP 1后 ,与对照组比较 ,Glu含量在注射后 1h ,2h时明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,0 .5h ,3h ,4h时差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;GABA含量在 2h ,3h时显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,0 .5h ,1h ,4h时差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :BANP 1急性用药后在一定时间内可升高脑内Glu。

酸性神经肽1对小鼠大脑环核苷酸含量的影响

目的 :探讨酸性神经肽 1(bovineacidicneuropeptide 1,BANP 1)对小鼠脑内环核苷酸含量的影响。方法 :将小鼠随机分为 6组 (每组 10只 ) ,其中 5组 (实验组 )按 15mg/kg腹腔注射BANP 1,将小鼠在注射后 0 5h ,1h ,2h ,3h ,4h处死并取脑匀浆 ,另一组为对照组 ,注射生理盐水 ,在注射生理盐水后 1h处死并取脑匀浆 ,用体积分数为75 %冰乙醇抽提环核苷酸类物质并沉淀蛋白 ,应用放射免疫法测定小鼠脑环磷酸腺苷 (cyclicmonophosphateadeno sine,cAMP)和环磷酸鸟苷 (cyclicmonophosphateguanosine ,cGMP)。结果 :腹腔注射BANP 1后 ,不同时间的结果分别与对照组比较 :cAMP结果差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;cGMP浓度有一定升高 ,1h、2h、3h时显著升高 (P <0 0 5 ) ,其余各时间组差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :BANP 1急性用药后在一定时间可升高脑内cGMP水平 ,对cAMP水平无显著影响。

酸性牛神经肽1对吸毒成瘾小鼠戒断后发作的治疗作用

为了解酸性牛神经肽１（ＡＢＮＰ１）对吸毒成瘾小鼠戒断后发作的治疗作用，连续１０ｄ给于实验小鼠盐酸吗啡使小鼠成瘾，停止给药后用吗啡拮抗剂纳洛酮催瘾，成瘾小鼠因戒断后发作从跳台上跳下。用ＡＢＮＰ１治疗成瘾小鼠（２０ｇ／ｋｇ，１次）。结果：使８０％的成瘾小鼠不从跳台上跳下。

氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸在内皮素-1对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的影响

目的观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在内皮素-1(ET-1)对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用。方法实验设7组,对照组、1g·L-1二甲基亚砜(DMSO)组、200pmol·L-1ET-1组、200pmol·L-1ET-1+1g·L-1DMSO组和200pmol·L-1ET-1+50、100、200μmol·L-1NPPB3个实验组。采用倒置光学显微镜观察牛角膜内皮细胞形态。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法观察细胞增殖,计算细胞存活率。采用免疫细胞化学检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并采用计算机图像分析测定平均光吸收值。应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果 NPPB能够使细胞形态发生异常,细胞内分裂相减少。50、100μmol·L-1NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值、细胞存活率和PCNA阳性细胞的平均光吸收值较200pmol·L-1ET-1组均显著降低,并具有浓度依赖性。而NPPB浓度达到200μmol·L-1时,细胞趋于死亡。经100μmol·L-1的NPPB处理后,与对照组和200pmol·L-1ET-1组相比,出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2/M期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论 NPPB浓度依赖性抑制ET-1对培养BCECs的增殖作用,使细胞周期停滞在G1期。

酸性神经肽1对小鼠大脑氨基酸类神经递质及cGMP影响的实验研究

目的 :探讨酸性神经肽 (bovineacidicneuropeptide 1BANP 1)对小鼠脑内氨基酸类递质 (谷氨酸和γ 氨基丁酸 )及cGMP的影响。方法 :将小鼠随机分为 6组 (每组 15只 ) ,其中 5组按 15mg/kg腹腔注射BANP 1,将小鼠在注射后 0 5h ,1h ,2h ,3h ,4h处死并取脑匀浆 ,另一组为注射生理盐水对照组 ,在注射盐水后 1h处死并取脑匀浆 ,用 75 %冰乙醇抽提氨基酸类物质及cGMP并沉淀蛋白质。应用滤纸电泳法对小鼠大脑谷氨酸 (glutamicacid ,Glu)和γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA)进行测定 ,应用放射免疫法对小鼠大脑环磷酸鸟苷 (cyclicmonophos phateguanosine ,cGMP)进行测定。结果 :腹腔注射BANP 1后 ,各项指标在不同时间的结果分别与对照组比较 :Glu浓度在 1h、2h时明显高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、3h、4h时差异无显著性 (P >0 0 5 )。GABA浓度在 2h、3h时显著高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、1h、4h时差异无显著性 (P >0 0 1)。cGMP浓度有一定升高 ,1h 2h时显著升高 (P <0 0 1) ,其余各时间组差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :BANP 1急性用药后在一定时间可升高脑内Glu。

1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚-磺酸与蛋白质结合反应的光谱法研究

采用荧光光谱法和吸收光谱法研究了1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚-磺酸(PAN-S)与牛血清白蛋白(BSA)的结合反应.研究表明,PAN-S对BSA的荧光猝灭机理为静态猝灭.测定了反应的结合常数(K=5.32×105～8.53×105L·mol-1)、荧光猝灭常数(Ksv=7.08×105L·mol-1)及结合位点数(n=2.88).进一步通过同步荧光法研究了PAN-S对BSA构象的影响,认为PAN-S主要结合在BSA的色氨酸残基附近.研究发现,PAN-S与BSA之间存在着类似于其同阳离子表面活性剂的静电作用.

金刚烷甲酸与牛血清白蛋白相互作用的光谱分析

目的研究金刚烷甲酸(Ad)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。方法以BSA为荧光剂,Ad为猝灭剂,采用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱和圆二色性光谱等方法研究在生理条件下Ad与BSA的相互作用。结果 Ad与BSA二者间的结合常数为7.83×104L.mol-1(291 K),1.59×104L.mol-1(301K);Ad与BSA相互结合时,结合反应的主要作用力为氢键和范德华力,结合距离为r=3.12 nm,结合位点数n=1;BSA的α-螺旋由22.4%降低为19.6%,β-折叠分别由30.2%上升为43.6%。结论 Ad对BSA的荧光猝灭属于静态荧光猝灭;紫外吸收光谱、同步荧光光谱和圆二色性光谱数据证实Ad与BSA相互作用后,BSA的二级结构发生了改变。

邻菲咯啉合铜配合物与牛血清白蛋白的相互作用

利用荧光光谱法研究了两种配合物,[Cu(phen)(L-Phe)(H2O)]ClO4(1)(L-Phe为L-苯丙氨酸根)和[Cu(phen)(Gly)(H2O)]ClO4.2.5H2O(2)(Gly为甘氨酸根),与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,牛血清白蛋白的荧光强度随着配合物浓度的增大而逐渐降低,配合物(2)与BSA的结合常数大于配合物(1)与BSA的结合常数,牛血清白蛋白对配合物的结合位点数为1,荧光猝灭作用机理为静态猝灭.

醋酸沉淀法从牛初乳中提取IGF-1的工艺条件研究

目的:用醋酸沉淀法从牛初乳中提取牛初乳IGF-1,确定醋酸沉淀法的最佳工艺流程。方法:以新鲜牛初乳为原料,离心除去脂肪和少量杂质后,用醋酸溶液调节牛初乳为不同的pH值,离心后,分别收集上清液和沉淀,再用PBS洗涤沉淀物,离心后再次收集上清液和沉淀物,对2次收集的上清液和沉淀物进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE法测定和ELISA法测定,确定最佳的醋酸沉淀法的工艺流程。结果:确定了"二步法"提取工艺流程:首先用醋酸溶液调整脱脂牛初乳的pH值为4.2,离心后,将沉淀物用PBS(p H=6.8)溶解,再次离心,收集上清液,将2次离心得到的上清液混合,其中牛初乳IGF-1的含量达到原脱脂牛初乳中的91.96%,同时可将酪蛋白等杂蛋白最大限度地除去。结论:醋酸沉淀法能够从牛初乳中提取IGF-1,且操作简单,收率高,适合工业化生产的要求。

ANS与牛血清白蛋白的相互作用

通过荧光光谱研究了8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS)在牛血清白蛋白(BSA)上的结合位置、结合常数及作用力,通过计算ANS分子的一些参数,发现芳环上引入磺酸基更有助于ANS与蛋白的作用。