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杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性
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作者 喻琦胜 朱庆 +6 位作者 周群 宋鑫 张家祺 陈涛云 徐林 张朝辉 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期640-648,共9页
旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P<0.001),最高抗体效价达1∶12800;微量中和试验结果显示,小鼠血清中和效价最高达1∶224,试验组中和效价平均值高于灭活病毒组,但统计学差异不显著(P>0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S蛋白 杆状病毒表达系统 免疫原性
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携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价
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作者 郭晓旭 张帅 +5 位作者 刘莹 赵云环 王传文 李妍 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期178-184,共7页
为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗... 为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/mL。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后以50μg/只分别免疫小鼠,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d采血制备血清,采用ELISA方法检测小鼠血清中的BCoV IgG特异性抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4,结果显示,将两种VLP乳化后免疫小鼠产生的BCoV IgG抗体(P<0.01)和两种细胞因子水平(P<0.05)均显著高于对照组,且可溶性表达的VLP诱导产生的抗体水平和细胞因子水平更高。本研究首次制备了含BCoV S蛋白抗原表位的VLP,两种不同表达形式的重组蛋白均形成VLP,且在小鼠体内均能够产生免疫应答,为BCoV亚单位疫苗及相关生物制品的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 牛冠状病毒 病毒样颗粒 分子伴侣质粒
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内蒙古自治区通辽市部分规模化牛场BCoV流行病学调查
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作者 石晓娇 谢梦圆 +7 位作者 张园园 郭宇 萨茹拉 陈柯佳 尚和卫 郝彦儒 许燕飞 徐晓静 《兽医导刊》 2023年第2期20-23,共4页
从内蒙古自治区通辽市部分规模化养牛场采集粪样350份、血样325份,分别采用RT-PCR和ELISA方法进行牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)的分子流行病学调查,了解内蒙古自治区通辽市规模化养殖场牛冠状病毒的流行状况,以期为通辽地区养... 从内蒙古自治区通辽市部分规模化养牛场采集粪样350份、血样325份,分别采用RT-PCR和ELISA方法进行牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)的分子流行病学调查,了解内蒙古自治区通辽市规模化养殖场牛冠状病毒的流行状况,以期为通辽地区养牛场牛冠状病毒病的防控提供参考。结果显示:抗原总阳性率为22.86%,抗体总阳性率为7.69%。在采集的样品中,0~2月龄犊牛的抗原阳性率最高,达57.50%,抗体阳性率最高,达19.00%,表明通辽地区牛冠状病毒流行率较高,及时采取科学有效的防控措施是很有必要的。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 流行病学调查 ELISA RT-PCR
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牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 蒲鹏 李晨露 +2 位作者 张琪 吴发兴 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期7-10,共4页
为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan... 为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,建立的牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性、敏感性和重复性均良好。该方法BCoV重组质粒标准品在5.75×10^(7)~5.75×10^(3)copies/μL时与Ct值呈现良好线性关系,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型均无交叉反应,特异性良好;该方法对BCoV重组质粒标准品最低检测限为5.75×10^(1)copies/μL;批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于2%。利用所建立的TaqMan荧光定量PCR方法对收集的132份样品进行检测,与常规PCR相比,两者符合率为96.21%,可为BCoV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测方法
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河北省廊坊市牛主要病毒性腹泻病原感染状况检测及牛冠状病毒演化分析
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作者 李思远 付新成 +10 位作者 袁雪松 毛立 蔡旭航 孙心如 黄金 谢玲玲 王府 周华 张琪 李基棕 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期649-659,共11页
牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还... 牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还会导致母牛生殖功能异常,这些疾病对畜牧业造成巨大的经济损失。为了解牛主要病毒性腹泻病原流行情况,本次试验通过PCR检测方法对我国河北地区323份腹泻牛粪样品进行常见9种病毒性牛腹泻病原进行检测。结果显示,BVDV阳性检出率1.85%(6/323)、BCoV阳性检出率14.24%(46/323)、BRV阳性检出率57.89%(187/323)、BoAstV阳性检出率0.31%(1/323)、BoNeV阳性检出率10.84%(35/323)、BNoV阳性检出率4.33%(14/323)、MRV阳性检出率2.48%(8/323)、BToV阳性检出率4.64%(15/323)、BKoV阳性检出率11.76%(38/323)。混合感染共有76份,占比23.53%(76/323)。HBLF2302株的全基因序列、S、HE、N、M和E基因进行同源性和遗传进化分析发现,HBLF2302与BCoV/NMG1/2022基因同源性最高,为GIIb亚型。基于氨基酸序列比对和HBLF2302的S蛋白三级结构预测发现,在S蛋白中157号位突变为157T,854号位点突变为854I。318V为独特突变,改变了与侧链残基的作用力,与631C形成氢键连接。并发现中国株区别于其它地区的GⅡb亚型,位于ORF1a区域有三个独特位点。本研究丰富了牛腹泻病原的流行病学数据,为牛腹泻病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 病毒性腹泻 牛冠状病毒 流行病学调查 腹泻病原
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牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
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作者 黄金 李思远 +6 位作者 毛立 蔡旭航 谢玲玲 王府 周华 李基棕 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2050-2060,共11页
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫Hi... 为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125μg·mL^(-1),血清稀释度为1∶200;采用1%明胶,于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25000,37℃孵育45 min;37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD_(450 nm)为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88%(31/32),特异性为87.50%(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P<0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00%(31/31),特异性为88.89%(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91%。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 昆虫杆状病毒表达系统 S1蛋白 间接ELISA
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牛冠状病毒刺突蛋白研究进展
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作者 刘强 牛小霞 +6 位作者 方敏 刘艳玲 高辉 陈吉祥 加华才让 张思浓 李勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期944-956,共13页
牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)是一种能感染牛肠道、呼吸道引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和各年龄段的牛呼吸道疾病的重要病原体,严重危害着养牛业的发展。刺突(spike, S)蛋白是该病毒主要的结构蛋白和免疫原性蛋白,在病毒... 牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)是一种能感染牛肠道、呼吸道引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和各年龄段的牛呼吸道疾病的重要病原体,严重危害着养牛业的发展。刺突(spike, S)蛋白是该病毒主要的结构蛋白和免疫原性蛋白,在病毒初始感染和诱导保护性免疫中发挥重要作用。本文就该病毒刺突蛋白的结构特征、生物学功能及应用研究、免疫原性、变异原因和潜在双受体系统的最新研究进展做一阐述,期望为新型疫苗研制和靶点治疗药物开发提供科学依据,以便制定快速有效的安全防治对策应对预出现的新毒株。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 刺突蛋白 生物学功能 蛋白变异
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牛冠状病毒、牛轮状病毒和致病性大肠杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究
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作者 曹兴旺 付祥益宁 +3 位作者 陈扬 高恒赟 王丹 蒋松 《中国牛业科学》 2024年第2期51-58,62,共9页
为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV... 为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV)和牛轮状病毒(BRV)和大肠杆菌混合感染引起。药敏试验表明,分离到的大肠杆菌对28种抗生素产生了严重的耐药,仅对多粘菌素和呋喃妥因敏感,并且发现该菌同时携带2种毒力基因和10种耐药基因。本研究分离的一株大肠杆菌携带有丰富的耐药基因,具有多重耐药性,为该奶牛场上临床治疗加大了难度。而本试验结果为该养殖场提供科学的临床药物指导,为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据,同时为新疆犊牛腹泻混合感染的防控提供了病例参考和技术资料。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 牛轮状病毒 牛冠状病毒 大肠杆菌 混合感染
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河南省2021-2022年犊牛腹泻主要病原流行情况调查
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作者 王向佩 周峰 +8 位作者 薛永康 秦帅 张洋 闫磊 闫跃飞 刘晓曼 孙贝贝 谷淑华 张震 《中国奶牛》 2024年第2期25-30,共6页
为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)及大肠杆... 为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)及大肠杆菌K99^(+)(E.coli K99^(+))荧光PCR检测,并对检测结果采用SPSS 27.0软件进行数据统计以及显著性差异分析(Pearson卡方检验)。结果显示:2022年BRV检出率为50.00%、BCoV检出率为41.00%,相比2021年均显著增高(P<0.01),E.coli K99^(+)检出率与上一年相比基本持平,无明显差异(P>0.05),说明2022年BRV、BCoV流行情况愈加严重。进一步分析发现,2022年腹泻病原单一感染检出率为26.79%,其中主要是BRV感染,与2021年单一感染检出率25.29%基本持平,差异不显著(P>0.05)。2022年腹泻病原混合感染检出率为35.71%,且主要以BRV、BCoV混合感染为主。相比2021年的12.94%明显上升,差异显著(P<0.01),说明2022年混合感染情况愈加严重。建议针对河南省腹泻流行情况有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了2021年、2022年河南省不同地区犊牛腹泻主要病原流行情况,可为河南省制定犊牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 病原检出率 牛轮状病毒 牛冠状病毒 牛大肠杆菌K99^(+)
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新疆部分地区双峰驼BVDV、BCoV和BRV感染情况调查
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作者 付强 陈俊贞 +6 位作者 郭妍婷 李泽宇 贺渊秀 董文丽 王万顺 杨莉 史慧君 《畜牧兽医科学(电子版)》 2021年第7期14-16,共3页
为了解新疆部分地区双峰驼感染牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒情况。从新疆乌鲁木齐和阿勒泰等地区随机采集新鲜粪便和血液样本185份,提取总RNA,反转录成cDNA,使用反转录PCR技术检测BVDV、BCoV和BRV阳性率情况。结果发现,BVD... 为了解新疆部分地区双峰驼感染牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒情况。从新疆乌鲁木齐和阿勒泰等地区随机采集新鲜粪便和血液样本185份,提取总RNA,反转录成cDNA,使用反转录PCR技术检测BVDV、BCoV和BRV阳性率情况。结果发现,BVDV、BCoV和BRV阳性率分别为9.19%、4.86%和1.62%。表明新疆部分地区双峰驼虽然不表现相应的临床症状,但存在不同程度的BVDV、BCoV和BRV隐性感染。 展开更多
关键词 双峰驼 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛轮状病毒 反转录PCR
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贵州省部分牛场BVDV、BHV-1、BCoV、MB的感染情况调查及BVDV分子特征分析 被引量:6
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作者 石柯 刘巧玲 +8 位作者 张森 林泠 任杰 汤德元 曾智勇 王彬 明东东 李思南 黄涛 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第9期83-88,共6页
为了初步了解贵州省牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛疱疹病毒1型(BHV-1)、牛冠状病毒(BCoV)、牛支原体(MB)的感染情况,在贵州省7个地区的牛场随机采集了224份鼻拭子样品,采用PCR方法检测所采集样品。结果:BVDV阳性率16.07%(36/224),BHV-1阳... 为了初步了解贵州省牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛疱疹病毒1型(BHV-1)、牛冠状病毒(BCoV)、牛支原体(MB)的感染情况,在贵州省7个地区的牛场随机采集了224份鼻拭子样品,采用PCR方法检测所采集样品。结果:BVDV阳性率16.07%(36/224),BHV-1阳性率7.59%(17/224),BCoV阳性率8.04%(18/224),MB阳性率12.90%(29/224);BVDV与MB混合感染率为2.68%(6/224),BVDV与BHV-1混合感染率为1.78%(4/224),MB和BHV-1混合感染率为1.34%(3/224),MB和BCoV混合感染1.78%(4/224)。BVDV的5′-UTR和E2基因系统进化树分析发现,3份BVDV样品与标准株ZM-95遗传关系相近,确定了贵州省流行毒株以BVDV-1m型主。本研究结果可为贵州省牛呼吸道和消化道疾病防控提供一定参考。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛疱疹病毒Ⅰ型 牛冠状病毒 牛支原体 贵州
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Prevalence of coronavirus from diarrheic calves in the Republic of Korea 被引量:1
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作者 Jinho Park Du-Gyeong Han +4 位作者 Su Hee Kim Jeong-Byoung Chae Joon-Seok Chae Do-Hyeon Yu Kyoung-Seong Choi 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2018年第1期1-6,共6页
Objective: To investigate the prevalence of bovine coronavirus(BCo V), bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus in the feces of normal and diarrheic Korean native calves aged 1-81 days between April and Octob... Objective: To investigate the prevalence of bovine coronavirus(BCo V), bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus in the feces of normal and diarrheic Korean native calves aged 1-81 days between April and October of 2016 in the Republic of Korea. Methods: Samples were obtained from 50 normal and 93 diarrheic(56 semi-formed, 28 loose, and 9 watery feces) calves in six different regions of northern and southern Korea. These fecal samples were tested for BCo V, bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus by RT-PCR. Results: Among the three pathogens examined, infection with BCo V was especially prominent in relation to diarrhea among calves aged 1-21 days [odds ratio(OR)=9.3, 95% confidence interval(CI): 1.1-78.9; P=0.02). Infection with BCo V alone(OR=2.9; 95% CI: 1.1-7.6; P=0.03) or coinfection of BCo V with bovine viral diarrhea virus(OR=3.6; 95% CI: 1.0-12.4; P=0.04) was significantly associated with the development of loose feces. Grazing and colostrum intake strongly reduced the occurrence of diarrhea as compared to housed calves(OR=0.2; 95% CI: 0.1-0.4; P=0.00) and calves that had not been fed colostrum(OR=0.2; 95% CI: 0.1-0.7; P=0.02), respectively. Conclusions: The present study suggests that BCo V is involved in calf diarrhea in the Republic of Korea. Therefore, grazing and colostrum intake is recommended for preventing and controlling calf diarrhea caused by BCoV. 展开更多
关键词 Calf diarrhea bovine coronavirus bovine viral diarrhea virus Loose feces GRAZING
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牛冠状病毒河北流行株部分基因全序列测定及分子特征分析 被引量:1
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作者 刘莹 顾文源 +5 位作者 刘媛 曹立辉 彭志豪 王梦佳 左玉柱 范京惠 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期191-202,共12页
牛冠状病毒(BCoV)是引起新生犊牛腹泻的重要病原之一,在世界范围内广泛分布,严重影响养牛业的健康发展。为确定河北省BCoV流行毒株的基因遗传进化特征,本研究对从河北省某牛场腹泻犊牛的粪便和肠内容物中鉴定出的1株BCoV流行毒株(BCoV/C... 牛冠状病毒(BCoV)是引起新生犊牛腹泻的重要病原之一,在世界范围内广泛分布,严重影响养牛业的健康发展。为确定河北省BCoV流行毒株的基因遗传进化特征,本研究对从河北省某牛场腹泻犊牛的粪便和肠内容物中鉴定出的1株BCoV流行毒株(BCoV/CH/HB-BD/2019),进行了S、N、HE基因的全序列扩增及测定,并与GenBank中的51株牛冠状病毒参考株进行了各基因的同源性和遗传进化分析。结果显示:BCoV/CH/HB-BD/2019与BCoV参考株相比,S基因具有2个独特的氨基酸变异位点(N311S、D1276Y);在HE基因中HB-BD株出现2个独特的氨基酸变异位点,分别为G400V、D423H;虽然在基因的重组分析中,HB-BD株HE基因序列并没有检测到基因重组信号,但通过检测我们发现,HB-BD株HE基因序列为其新疆毒株(KU886219.1)推测的主要亲本毒株;进化分析发现,BCoV HB-BD株与人冠状病毒(HCoV-OC43)均属于β类冠状病毒属2a亚群,且同源性高达96.0%,而正在全世界范围内传播的SARS-CoV-2属于β类冠状病毒属2b亚群病毒,BCoV与SARS-CoV-2属于同一冠状病毒属不同亚群。本研究为牛冠状病毒病的防控以及进一步揭示冠状病毒之间的关系提供了依据。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S基因 N基因 HE基因 序列扩增 序列分析
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牛病毒性腹泻病毒、牛肠道病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒四重一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用
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作者 季彬 彭轶楠 +2 位作者 叶泽 王莎莎 王治业 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期120-127,共8页
为了建立一种能够同时、快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)的方法,根据BVDV 5'UTR基因、BEV 5'UTR基因、BRV VP6基因、BCV N基因设计引物,建立了能够同时鉴别检测BVDV、... 为了建立一种能够同时、快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)的方法,根据BVDV 5'UTR基因、BEV 5'UTR基因、BRV VP6基因、BCV N基因设计引物,建立了能够同时鉴别检测BVDV、BEV、BRV、BCV的四重一步法RT-PCR方法,该方法检测IBRV、BPIV-3、BRSV均为阴性,对BVDV、BEV、BRV、BCV的核酸检测下线分别为3.28、28.2、23.6、25.0 pg,与现有标准或商品化RT-PCR试剂盒的符合率均为100%,批内和批间重复性试验的检测结果均完全一致,检测222份临床样品的BVDV、BEV、BRV、BCV阳性率分别为15.32%、18.02%、6.31%和4.05%。说明四重一步法RT-PCR方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,可用于BVDV、BEV、BRV、BCV的临床鉴别诊断、流行病学调查以及疫病防控。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛肠道病毒 牛轮状病毒 牛冠状病毒 一步法RT-PCR
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4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 高睿 徐伟 +3 位作者 罗艳 谢晓刚 李梦磊 张琪 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第10期20-28,共9页
【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N... 【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物,克隆目的基因构建标准阳性重组质粒,建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测,并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法建立的标准曲线线性关系良好,仅可特异性扩增出4种目标基因片段;对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×10^(1),1.4×10^(3),9.1×10^(1)和1.2×10^(2)拷贝/μL,与普通PCR相比,灵敏性高出10~1000倍;批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示,多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%(BCoV)、97.4%(BRV)、100.0%(BVDV)和100.0%(MCFV)。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。 展开更多
关键词 牛腹泻病 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛恶性卡他热病毒 牛轮状病毒 多重荧光定量PCR检测
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牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立
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作者 唐豪 贺泂杰 《中兽医医药杂志》 CAS 2023年第4期31-35,F0003,共6页
牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻,对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合,建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明,CPA体系Mg2+最佳物质浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTP... 牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻,对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合,建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明,CPA体系Mg2+最佳物质浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度,60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原,层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线,未出现交叉反应。结果显示,CPA BCoV-N具有较高的特异性,CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器,简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增,封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染,对结果的判断更加直观客观,是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 交叉引物扩增 快速检测
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吉林省肉牛冠状病毒感染状况调查及分析 被引量:5
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作者 孙飞雁 叶京飞 +8 位作者 魏宇 王子贤 张金玉 邴丽媛 孟婷婷 王帅 赵立峰 孙亮 郭利 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期673-682,共10页
旨在全面了解牛冠状病毒(BCoV)在吉林省肉牛群的流行情况,选择吉林省东中西部地区的12个县市的规模化、养殖合作社、家庭型养殖户等牛场在不同季节采集血液、鼻拭子、粪拭子及临床病死牛组织脏器,采用血清学及分子生物学诊断检测技术,对... 旨在全面了解牛冠状病毒(BCoV)在吉林省肉牛群的流行情况,选择吉林省东中西部地区的12个县市的规模化、养殖合作社、家庭型养殖户等牛场在不同季节采集血液、鼻拭子、粪拭子及临床病死牛组织脏器,采用血清学及分子生物学诊断检测技术,对BCoV进行流行病学调查,了解BCoV在该吉林省部分地区的流行情况。共采集临床血清样品1298份,粪便样品、肝、肺、脾、气管等组织样品462份,应用商品化BCoV抗体检测试剂盒检测血清抗体和纳米PCR新型检测技术对临床样品进行PCR检测,并对核酸检测出的阳性结果测序分析。结果显示BCoV抗体血清阳性率为1.08%,粪便、肝等临床样品阳性率21.10%。经测序分析调查地区BCoV流行株与我国四川流行株相似性达99%以上。本研究对吉林省中部地区BCoV流行情况进行了全面调查,丰富了牛冠状病毒的流行病学调查数据,为指导牛冠状病毒的防控工作奠定了基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 流行病学调查
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牛冠状病毒病诊断及防治的研究进展 被引量:1
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作者 李小龙 石亚楠 +3 位作者 鲍显伟 李昊 王雪妍 许立华 《现代畜牧兽医》 2023年第7期78-83,共6页
牛冠状病毒是套式病毒目冠状病毒科Beta冠状病毒属的成员,该病毒根据被感染动物的年龄、感染途径等不同而引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和呼吸道症状等3种临床表现。牛冠状病毒病自发现至今,每年在全球范围均具有较高的发病率,因影... 牛冠状病毒是套式病毒目冠状病毒科Beta冠状病毒属的成员,该病毒根据被感染动物的年龄、感染途径等不同而引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和呼吸道症状等3种临床表现。牛冠状病毒病自发现至今,每年在全球范围均具有较高的发病率,因影响患牛生长发育、治疗与预防困难等给养牛业带来较大损失。文章对牛冠状病毒病的病原学、流行病学、致病机制、鉴别诊断和预防等方面的研究进展进行综述,旨在加强对牛冠状病毒病的认知,为该病的防控提供参考。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 牛冠状病毒病 核衣壳蛋白 新型疫苗
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广西河池地区牛肠道病毒和牛冠状病毒流行病学调查及遗传变异分析
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作者 罗宇航 刘黄豪 +7 位作者 李德政 张广欣 乔成鹏 潘艳 覃一峰 李军 韦建华 黄伟坚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期32-39,共8页
为了解广西壮族自治区河池地区牛肠道病毒(BEV)和牛冠状病毒(BCoV)的流行情况及毒株序列特征,本试验应用TRIzol法抽提核糖核酸(RNA),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对2021—2022年广西河池各地区采集得到的422份粪便样品进行病原检... 为了解广西壮族自治区河池地区牛肠道病毒(BEV)和牛冠状病毒(BCoV)的流行情况及毒株序列特征,本试验应用TRIzol法抽提核糖核酸(RNA),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对2021—2022年广西河池各地区采集得到的422份粪便样品进行病原检测及遗传变异分析。结果显示,广西河池地区BEV的检出率为3.23%~19.51%,BCoV的检出率为2.44%~4.62%,BEV和BCoV混合感染率为2.44%~4.44%。按照不同品种牛群对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,西门塔尔杂交牛BEV感染率为13.99%,BCoV感染率为2.07%;本地黄牛BEV感染率为9.00%,BCoV感染率为0.95%;杂交水牛BEV感染率为33.33%,BCoV未发现感染;安格斯牛BEV和BCoV均未发现感染。按照不同年龄对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,0~180日龄BEV感染率为22.11%,BCoV感染率为4.21%,大于180日龄牛群BEV感染率为7.95%,BCoV感染率为0.61%。按照不同养殖模式对牛群BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,农户养殖BEV感染率为12.06%,BCoV感染率为1.42%,合作社养殖BEV感染率为9.29%,BCoV感染率为1.43%。遗传变异分析结果显示,广西河池地区存在E、F型2种BEV感染,检出E型BEV 21份,检出F型BEV 26份。本试验首次揭示了广西河池地区BEV和BCoV的流行病学调查数据,为广西乃至全国牛肠道病毒和牛冠状病毒净化防控提供了理论参考数据。 展开更多
关键词 流行病学调查 牛肠道病毒 牛冠状病毒 遗传进化分析
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新疆地区牛冠状病毒的分子流行病学调查
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作者 王梦娇 蒋倩 +6 位作者 马学军 夏瑞阳 郭雪萍 孙磊 钟旗 马雪连 姚刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5125-5133,共9页
牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一。新疆养牛业发展迅速,国内外引入品种数量日益增多,BCoV感染呈上升态势,但对其流行现状与规律缺乏全面了解。本研究于2020—2022年对新疆南、北疆养牛业主产区BCoV感... 牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一。新疆养牛业发展迅速,国内外引入品种数量日益增多,BCoV感染呈上升态势,但对其流行现状与规律缺乏全面了解。本研究于2020—2022年对新疆南、北疆养牛业主产区BCoV感染的流行情况进行了两年跟踪调查,共采集犊牛腹泻粪样本652份,采用RT-PCR方法进行了BCoV检测。对分离鉴定到的毒株进行了遗传进化分析。结果发现,BCoV总阳性率23.93%(156/652)。BCoV感染呈季节性变化,冬季为主要感染季节,检出率高达50.85%。南疆地区BCoV发病率高于北疆地区。与奶用犊牛相比,肉用犊牛更易感染。遗传进化分析表明:本试验分离到的BCoV毒株暂命名为BCoV/China/XJ-CJ/2022,该毒株的S基因与2018年毒株MN982199.1进化关系最近,N基因与2018年毒株MK095169.1BCOV-China/SWUN/LN4/2018进化关系最近,M基因与2017年毒株MK095148.1 China/SWUN/SC1/2017进化关系最近,HE基因与2017年毒株MK095136.1 BCOV-China/SWUN/SC2/2017进化关系最近。使用软件分析BCoV/China/XJ-CJ/2022与其它国家出现的BCoV毒株之间未出现基因重组现象。经5个结构蛋白的核苷酸和氨基酸相似性分析,发现其基因依然与中国国内本土毒株FJ938064.1_E-AH187-TC相似度最高,分别最低达到91.50%和96.70%。调查结果表明,BCoV在新疆规模化牛场呈现出的季节、地域和品种间的感染差异性可为精准防控策略的制定提供数据支撑。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 分子流行病学 遗传进化分析
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