Influence of Follicular Fluid on <i>in Vitro</i>Maturation and Fertilization of Bovine Oocytes

The aim of this study was to investigate the effect of time on in vitro maturation of bovine oocytes and of the addition of follicular fluid on meiotic progression. The cumulus-oocyte complexes (COCs) collected from 3 to 6 mm follicles were obtained from ovaries of slaughtered female animals. The medium of maturation was supplemented or not with 20 μL follicular fluid (FF);661 oocytes were matured in vitro (extrusion of the first polar corpuscle) for 22 hours with added follicular fluid (AFF) (72.01%) or without follicular fluid (WFF) (67.53%) and 679 oocytes were matured in vitro for 26 hours (extrusion of the first polar corpuscle) with AFF (92.1%) and WFF (77.15%). The results of extrusion of the second polar corpuscle as an event related to the fertilization percentages showed that the increase in the fertilization rate is maintained at 26 hours with AFF (79.45%), but the percentage decreases WFF (65.08%). After 22 hours, the fertilization rate was 62.38% AFF and 53.40% WFF. The developmental competence of bovine oocytes is affected by the duration of maturation in vitro and the inclusion in the FF culture medium. The use of follicular fluid in the in vitro maturation medium may be a biological strategy to increase the cumulus expansion, the nuclear maturation and the in vitro fertilization.

BFF、rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响

利用屠宰黄牛卵巢，对２～５ｍｍ卵泡卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）、受精卵的体外培养（ＩＶＣ）进行了系列研究。结果表明，在成熟培养液中单独添加１０％Ｄ０ＥＣＳ（发情当天牛血清）获得了卵泡卵母细胞受精后较高的卵裂率（６４．７％）、桑椹胚发育率（３９．９％）和囊胚发育率（２４．８％），说明在成熟培养液中单独添加Ｄ０ＥＣＳ是可行的；在含１０％Ｄ０ＥＣＳ的成熟培养液中再添加１０％或２０％ＢＦＦ（牛卵泡液），均能提高受精卵的卵裂率以及桑椹胚和囊胚的发育率，以添加２０％ＢＦＦ效果较好，其囊胚发育率（３５．０％）显著高于对照组（２４．８％，Ｐ＜０．０５）；在卵泡卵母细胞成熟培养系统和受精卵共同培养系统中添加１０μｇ／Ｌ重组牛生长因子（ｒｂＧＨ），虽对体外受精卵的卵裂率无显著影响（Ｐ＞０．０５），但能显著提高卵裂胚的囊胚发育率（Ｐ＜０．０５）

不同bFF对延边黄牛卵母细胞成熟及发育的影响

在成熟液中添加不同处理及来源的牛卵泡液（bFF），以研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响。结果表明：未抽滤组与抽滤组间成熟率差异不显著（P〉0．05），但未抽滤组显著提高囊胚率（P〈0．05）；卵泡直径2～8mm组、〉8mm组和混合组（2～8mm组与〉8mm组的混合）之间成熟率、卵裂率和囊胚发育率差异不显著（P〉0．05）；两试验组（黄体组、卵泡组）成熟率、卵裂率和囊胚率差异不显著（P〉0．05），两试验组与血清组相比囊胚率显著提高（P〈0．05）。试验结果提示，未抽滤黄体期卵巢表面卵泡内bFF能有效提高卵母细胞体外囊胚发育率。

不同浓度的牛卵泡液对牛卵母细胞体外核成熟率的影响

通过添加不同浓度的牛卵泡液(bFF),探讨了bFF对牛卵母细胞体外核成熟率的影响;并筛选出bTCM-199(10%)培养体系与TCM-199培养体系进行核成熟效果的对比试验。结果表明:20%、30%bFF组处在GV期和MⅠ期卵母细胞比率极显著高于10%组(P<0.01),而卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率10%组显著高于20%和30%组(P<0.01);TCM-199培养体系与bTCM-199(10%)培养体系2组减数分裂各阶段卵母细胞比率基本一致,前者卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率与后者差异不显著(P>0.05)。与bTCM-199(10%)培养体系相比,TCM-199培养体系成分简单,是理想的牛卵母细胞体外成熟培养体系。

处理方式不同的颗粒细胞和卵泡液对牛卵母细胞体外受精后卵裂率和囊胚率的影响

将牛的卵母细胞置于添加有不同预处理颗粒细胞及含有卵泡液的培养液或不含有卵泡液的培养液中进行体外成熟、受精及胚胎发育培养, 研究了颗粒细胞、卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对牛卵母细胞成熟、受精后卵裂率、囊胚率的影响。 2178 枚卵母细胞体外成熟受精后胚胎发育的对比观察结果表明: 颗粒细胞、卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对卵母细胞成熟受精后胚胎的卵裂具有显著影响 (P<0.05); 颗粒细胞对囊胚的发育有显著影响 (P<0.05); 卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对囊胚的发育无显著影响 (P>0.05)。不同因素对卵裂率、囊胚率的影响表现为: 颗粒细胞因素﹥培养液因素﹥培养液×颗粒细胞交互作用。结论: TCM199 培养液中添加卵泡液和单层颗粒细胞组成的培养系统用于牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的效果较好。共培养体系中的单层颗粒细胞用经酶消化分散处理后在培养箱中孵育 10min 的颗粒细胞替代时, 胚胎的发育效果并不受影响。

卵泡液对牛卵母细胞发育潜力的影响

为了确定卵泡液(直径大于10mm)对卵母细胞成熟的影响,共收集1759枚卵母细胞进行试验。在成熟液中分别添加0%,10%,30%和50%的卵泡液(bFF,bovinefollicularfluid),成熟培养24h后,孤雌激活或者体外受精和胚胎培养;对比10%bFF和10%胎牛血清(FBS),以及观察微滴培养对卵母细胞成熟的影响。结果表明,在孤雌激活组中,bFF浓度对卵裂率的影响差异不显著,但胚胎囊胚发育率高于对照组(P<0.05);在体外受精组中随着bFF浓度增加而卵裂率下降(P<0.01),而且囊胚率也下降(P<0.05)。在10%的bFF组中,孤雌激活囊胚率和体外受精囊胚率分别为47.1%和38.0%,囊胚扩张率显著高于其它组。从试验得出,添加10%bFF有利于卵母细胞胞质成熟,且不会降低到受精率,而且可以替代FBS;微滴培养不利于卵母细胞成熟。

卵泡液对不同大小牛腔前卵泡体外培养过程中E_2分泌的影响

Φ60～150μm牛腔前卵泡在有、无促性腺激素存在下，分别添加0、10%、15%、20%牛卵泡液（BFF）的McCoy＇s 5 a无血清系统体外培养15 d，测定其雌二醇（E2）分泌量。结果显示：各添加卵泡液组在培养3、6、9、12 d的E2分泌量均显著高于对照组（0组）（P〈0.01）。当培养液中有促性腺激素（FSH、LH）存在下，各添加卵泡液组的E2分泌量更高，其中添加10%牛卵泡液组中Φ〉100μm腔前卵泡在培养6 d时E2分泌量达最高，为48.96±11.54 pg/mL。表明培养液中添加一定比例牛卵泡液（BFF）可显著刺激体外培养腔前卵泡E2的分泌，促性腺激素存在下更加强了卵泡液对E2分泌的刺激作用。

人卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外培养的影响

【目的】探讨以人成熟卵泡液作为体外成熟培养液培养牛卵母细胞的可能性。【方法】观察并比较未成熟牛卵母细胞分别在灭活人卵泡液与成熟培养液、灭活与未灭活人卵泡液、未灭活人卵泡液不同培养温度（38,38.5和39℃）下,进行体外成熟培养时卵母细胞的极体排出率。【结果】在灭活人卵泡液与成熟培养液中,牛卵母细胞成熟率分别为58.5%和63.5%,二者无显著性差异（P〉0.05）;在未灭活人卵泡液中,牛卵母细胞成熟率（58.8%）显著高于灭活人卵泡液（37.5%）（P〈0.01）;在未灭活人卵泡液中38,38.5和39℃培养的牛卵母细胞的成熟率分别为60.7%,58.1%和54.1%,三组间差异不显著（P〉0.05）。【结论】人卵泡液可以用于未成熟牛卵母细胞体外成熟;人卵泡液用作成熟培养液时无需灭活,培养温度为38-39℃。

催乳素和牛卵泡液对胚胎体外成熟及未成熟的牛卵母细胞的影响(英文)

对催乳素和牛卵泡液在水牛卵母细胞体外成熟中的作用进行了探讨.来自屠宰场水牛卵巢的卵母细胞和卵丘细胞复合体,在含体积分数为5%CO2的培养箱中培养24～26h,然后通过体外受精测定其受精和胚胎发育能力.实验1在成熟液中添加1 0μg/mL催乳素(PRL),卵母细胞的囊胚发育比例(12 8%)比对照组(9 1%)高但不显著.实验2添加5%牛卵泡液(BFF),卵母细胞卵裂的比例明显高于对照组,但囊胚形成率则几乎一样;添加1 0μg/mLPRL和5%BFF组卵母细胞卵裂的比例为38 1%,而发育成囊胚阶段的卵母细胞的比例为14%.试验结果表明:添加适宜浓度的BFF和PRL能促进未成熟的水牛卵母细胞体外成熟后的胚胎发育能力.

牛卵泡液对牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究系统探讨了牛卵泡液（ＢＦＦ）对牛卵母细胞体外成熟的影响。在成熟培养液中添加１０％的ＢＦＦ，明显提高牛卵母细胞体外成熟后的囊胚发育率（４５．１％比２８．２％，Ｐ＜０．０５），虽然该处理对牛卵母细胞体外成熟后的受精分裂率无明显影响（８７．５％比８７．５％）。然而，当ＢＦＦ在成熟培养液中的浓度提高到４０％时，卵母细胞体外成熟后的受精分裂率（６８．６％）和囊胚发育率（１６．６％）均明显下降（Ｐ＜０．０５）。来自不同大小卵泡（２～５ｍｍ，５．１～８ｍｍ和大于８ｍｍ）ＢＦＦ的卵母细胞体外成熟培养效果无明显差异，只是来自大于８ｍｍ卵泡的ＢＦＦ将卵母细胞粘在一起，明显地降低成熟培养后的可用卵母细胞数。在成熟培养液中加入激素（２．５×１０３ｉｕ／Ｌ促性腺激素（ＨＣＧ），５０ｉｕ／Ｌ促乳素，０．０５ｍｇ／Ｌ胰岛素、睾酮和雌二醇）对ＢＦＦ的卵母细胞成熟培养效果无影响。这些结果表明，在成熟培养液中添加一定浓度的ＢＦＦ可促进牛卵母细胞获得胚胎发育能力，ＢＦＦ的这一作用与其来源的卵泡大小和激素的存在与否无关。