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牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证
被引量:
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作者
牛步青
胡术然
+6 位作者
高有
张海浩
陈蕾西
常亚军
易力
姚宇峰
任芳芳
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1232-1235,1242,共5页
目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构...
目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。
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关键词
牛多瘤病毒
聚合酶链反应
细胞培养上清液
原文传递
题名
牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证
被引量:
1
1
作者
牛步青
胡术然
高有
张海浩
陈蕾西
常亚军
易力
姚宇峰
任芳芳
机构
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1232-1235,1242,共5页
基金
云南省科技厅创新人才计划(2019HC006)。
文摘
目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。
关键词
牛多瘤病毒
聚合酶链反应
细胞培养上清液
Keywords
bovine
polyomavirus
(
bpyv
)
Polymerase chain reaction(PCR)
Cell culture supernatant
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证
牛步青
胡术然
高有
张海浩
陈蕾西
常亚军
易力
姚宇峰
任芳芳
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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