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Pregnancy-associated glycoproteins as a potential marker for diagnosis of earlypregnancy in goats: A scoping reviewing 被引量:1
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作者 Nandini Sharma Shiva Pratap Singh +1 位作者 Alok Bharadwaj Ramachandran Natesan 《Asian pacific Journal of Reproduction》 2020年第6期255-260,共6页
Early diagnosis of pregnancy plays an important role to minimize reproductive losses in farm animals.There are several methods for pregnancy diagnosis like profiling of reproductive hormones(such as progesterone and e... Early diagnosis of pregnancy plays an important role to minimize reproductive losses in farm animals.There are several methods for pregnancy diagnosis like profiling of reproductive hormones(such as progesterone and estrone sulfate),but sometimes they provide false-positive results.Embryo specific pregnancy markers,which delineate the presence and viability of the embryo,are considered as perfect for pregnancy determination.Pregnancy-associated glycoproteins are distinguished as the best indicator for the determination of early pregnancy,fetal number,and birth weight of kids.Pregnancy-associated glycoproteins are structurally correlated to aspartic proteinase and are communicated in the external epithelial cell layer of the placenta.They have been found to share about half amino acid sequence identity with pepsinogen,pepsin,cathepsin D and E.Dislike different individuals from aspartic proteinase family,numerous pregnancy-associated glycoproteins appear to be latent compound as a result of amino acid substitutions in and around the catalytic site.This review is to discuss the scope and prospects of pregnancy-associated glycoproteins as a pregnancy marker in farm animals,more specifically in goats. 展开更多
关键词 pregnancy-associated glycoproteins Early pregnancy Farm animals PLACENTA Goats
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Cloning and Sequence Analysis of Glycoprotein D Gene of Bovine Herpesvirus-1 Strain Luojing
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作者 LIJi-chang TONGGuang-zhi +2 位作者 QIUHua-Ji ZHOUYan-Jun XUEQiang 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2003年第2期137-140,共4页
By means of PCR,the gene encoding gD of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) strain Luojing was amplified,cloned and sequenced.The nucleotide sequence of this gD gene was (1 251 bp,)encoding 417 amino acids.Comparied with the... By means of PCR,the gene encoding gD of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) strain Luojing was amplified,cloned and sequenced.The nucleotide sequence of this gD gene was (1 251 bp,)encoding 417 amino acids.Comparied with the published P8-2 strain,the homology of the necleotide sequence is 99.92%,and that of the deduced amino acid sequence is 100%.The results indicated that gD of BHV-1 was highly conservative. 展开更多
关键词 bovine herpesvirus-1(BHV-1) D glycoprotein gene(gD) CLONING sequence analysis.
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牛妊娠相关糖蛋白18重组载体构建、表达条件优化和生物信息学分析
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作者 董媛 李汶柯 +3 位作者 孟桂先 刘磊 尹茉莉 王会岩 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期31-39,共9页
为了制备牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18),并预测其理化性质和功能,本试验优化密码子并合成boPAG 18基因,构建pET30a-boPAG18重组质粒。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的蛋白质表达量为指标,优化装液量、诱导剂浓度、诱导时间和诱导... 为了制备牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18),并预测其理化性质和功能,本试验优化密码子并合成boPAG 18基因,构建pET30a-boPAG18重组质粒。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的蛋白质表达量为指标,优化装液量、诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度条件,采用亲和层析法纯化boPAG18,SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定。预测boPAG18的疏水性、信号肽、修饰位点、结构和蛋白相互作用。结果显示,经双酶切鉴定,pET30a-boPAG18重组质粒构建成功,boPAG 18基因1143 bp,表达蛋白约38 kDa。确定最佳表达条件为在OD 600 nm值为0.6,装液量为40 mL,IPTG终浓度为0.2 g/L,37℃诱导4 h。纯化的boPAG18纯度高达98%,浓度为2.63 mg/mL。该蛋白分子式为C_(1923)H_(3007)N_(519)O_(541)S_(17),分子质量为42.6 ku,等电点为9.31,亲水性平均值为-0.041,为两性蛋白,蛋白质不稳定指数为42.41,在水中不稳定;脂肪系数为88.43,有381个氨基酸;消光系数为47370 mol-1·cm-1,半衰期为30 h。boPAG18前15个氨基酸为信号肽,无跨膜区域;有糖基化修饰位点57个,磷酸化修饰位点68个,B细胞抗原表位13个,二级结构中α-螺旋占比19.42%、β-转角占比5.77%、无规则卷曲占比44.88%、延伸链占比29.92%;有7个相互作用蛋白,可能参与了母体在妊娠期的泌乳、抗菌和神经保护等调节功能。本试验为深入研究boPAG18的结构和功能提供了数据支持。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18) 重组质粒 优化 生物信息学 功能预测
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牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gB和gD的研究进展
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作者 戴莎莎 王健霖 +1 位作者 田兴苗 李继东 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期376-386,共11页
牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是牛的重要传染病,临床以呼吸道症状为主,伴有结膜炎、乳腺炎、流产等症状。其病原是牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV),又称牛疱疹病毒1型... 牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是牛的重要传染病,临床以呼吸道症状为主,伴有结膜炎、乳腺炎、流产等症状。其病原是牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV),又称牛疱疹病毒1型(Bovine herpesvirus 1,BHV-1),共编码30~40种结构蛋白,其中11种为囊膜糖蛋白。糖蛋白在病毒吸附、侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用。糖蛋白gB对病毒侵入宿主细胞、在细胞间扩散及复制至关重要;糖蛋白gD在病毒复制、传播和感染机制方面作用重大,具有良好的免疫原性,是诱导产生中和抗体的主要糖蛋白。对gB、gD的研究不仅可从蛋白层面解析病毒侵染机制,还能够为牛传染性鼻气管炎的临床诊断和预防提供理论依据。本文针对牛传染性鼻气管炎病毒的主要糖蛋白gB、gD的研究结果进行综述,分析其生物学功能以及在疫苗和诊断方面的应用,以期为牛传染性鼻气管炎侵染机制和防控提供参考。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB糖蛋白 gD糖蛋白 生物学功能 诊断 疫苗
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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测 被引量:8
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作者 王延辉 薛飞 +1 位作者 朱远茂 彭伍平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期865-869,共5页
经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用N... 经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用Ni柱亲和层析法在非变性的条件下纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白浓度为0.852mg/mL,纯度为85.2%。Westem blot、间接ELISA检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD糖蛋白 原核表达 活性检测
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牛精子膜伴刀豆素A结合糖蛋白的分离与定位 被引量:7
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作者 周占祥 孙秀华 邓泽沛 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期58-62,共5页
用NP-40处理牛精子获得膜抽提液,经伴刀豆素A-Sepharose4B亲和层析,分离出与伴刀豆素A结合的糖蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出分子量为72、57和3lkD的3条蛋白质带。将分离到的糖蛋白电转移在... 用NP-40处理牛精子获得膜抽提液,经伴刀豆素A-Sepharose4B亲和层析,分离出与伴刀豆素A结合的糖蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出分子量为72、57和3lkD的3条蛋白质带。将分离到的糖蛋白电转移在硝酸纤维素膜上,用酶标的伴刀豆素A检测,3条蛋白质带均呈阳性。用分离的糖蛋白免疫兔,制备抗血清。用抗血清对牛精子膜NP-40抽提物进行免疫印迹法分析,检测出3条阳性带,与亲和层析法分离的糖蛋白带相对应。用抗血清对牛精子进行免疫细胞化学标记,表明该糖蛋白主要分布于精子顶体区。 展开更多
关键词 糖蛋白 伴刀豆素A 亲和层析 免疫细胞化学 精子
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牛妊娠相关糖蛋白1(bPAG1)的真核表达及纯化 被引量:7
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作者 刘长彬 卢春霞 +2 位作者 杨华 张云生 石国庆 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第8期1944-1949,共6页
[目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载... [目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载体后转染到CHO细胞,经SDS-PAGE和Western Blot检测重组牛妊娠相关糖蛋白1(rbPAG1)的表达效果。[结果]PCR扩增得到1218 bp的bPAG1基因片段,构建的重组质粒PCDNA3.1(-)-bPAG1经双酶切获得约5400和1218 bp的2条片段,与预期相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为62 kDa的bPAG1重组蛋白,通过Ni柱亲和层析纯化后,rbPAG1纯度可达88%。[结论]本研究为bPAG抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白 重组蛋白 真核表达 PCDNA3.1(-)
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牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立 被引量:6
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作者 曹翀 曹永生 +4 位作者 宋林 高明春 彭统全 张树栋 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期123-127,共5页
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B(g B)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的... 为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B(g B)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,大小约为40 ku。Western blot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的g B蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法,该方法敏感性好,特异性强,与其他病原血清无交叉反应,其组内组间变异系数均低于11%。与IDEXX公司的g B-ELISA试剂盒进行对比,阳性符合率为84.28%,阴性符合率为85.71%。采用本研究建立的方法对黑龙江省10个农场的血清样品进行了IBR的流行性调查,阳性率最高为65.52%,最低为5.56%,平均阳性率为18.01%。本研究建立的ELISA方法为进出口检疫和该病防制工作提供一种可选方法。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 原核表达 间接ELISA
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牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立 被引量:12
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作者 李兆利 薛飞 +1 位作者 朱远茂 王延辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1328-1333,共6页
经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达... 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P>0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 IBRV GB基因 表达 纯化 间接ELISA
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抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的研制 被引量:4
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作者 孙宏进 蒋颖 +4 位作者 林燕清 朱军 姚丰华 刘振华 朱国强 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期1-5,共5页
将含有牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆... 将含有牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该3D8株单抗能识别BVDV1标准毒株(NADL、OregonC24V)、BVDV2标准毒株(890、104)、2株BVDV1分离株和3株BVDV2分离株,而不能识别牛轮状病毒、牛疱疹病毒1型,显示出良好的特异性。阳性杂交瘤细胞的上清液、腹水ELISA抗体效价分别为29和10×27,为IgM亚类。其单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得,为建立单抗介导的检测BVDV1和BVDV2抗原和抗体的血清学方法和实现标准化诊断奠定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 基因型 E2囊膜糖蛋白 基因免疫 单克隆抗体
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牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的真核表达及纯化 被引量:11
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作者 刘长彬 石国庆 卢春霞 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1552-1559,共8页
【目的】构建proEM-bPAG9重组表达载体,并在HEK293细胞中转染表达。为进一步抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研究奠定基础。【方法】通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体proEM中,构建proEM... 【目的】构建proEM-bPAG9重组表达载体,并在HEK293细胞中转染表达。为进一步抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研究奠定基础。【方法】通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体proEM中,构建proEM-bPAG9重组载体后转到DH5α感受态细胞中,重组质粒转染至哺乳动物细胞HEK293中进行瞬时表达,再通过亲和层析纯化bPAG9重组蛋白(rbPAG9),经SDS-PAGE和Western Blot检测rbPAG的表达效果。【结果】通过全基因合成法得到1 182 bp的bPAG9基因片段,构建的重组质粒proEM-bPAG9经双酶切获得约4 369 bp和1 176 bp的两条片段,与预期值相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致,氨基酸未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为68 kDa的bPAG9重组蛋白,通过Ni2+亲和层析纯化后,rbPAG9纯度可达90%。【结论】通过基因优化及真核表达获得分子质量为68 kDa的rbPAG9重组蛋白。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白 重组蛋白 真核表达
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牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白研究进展 被引量:7
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作者 李兆利 薛飞 朱远茂 《动物医学进展》 CSCD 2006年第4期1-4,共4页
牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生... 牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生大量的中和抗体。对gB蛋白的研究不仅是理解病毒分子生物学功能特征的需要,而且在临床诊断和疾病预防中也具有重要意义。文章就gB蛋白的结构特征、生物学功能以及在免疫学和诊断方面的研究做了综述,并对上述方面进行了展望。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 物学功能 免疫学 诊断
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牛传染性鼻气管炎病毒gD基因截短表达及其抗血清制备 被引量:2
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作者 张辉 宋玲玲 +5 位作者 杨宏军 王洪梅 武建明 候佩莉 何洪彬 王立群 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第1期29-33,共5页
gD糖蛋白是IBRV感染细胞的主要分子,在病毒吸附和侵入宿主细胞中发挥着重要作用。利用IBRV基因组DNA为模板,经生物学软件DNAstar分析主要抗原区,PCR扩增gD基因786bp片段,定向连接到pET32a(+)表达载体中,筛选阳性克隆转化BL21(DE3)表达菌... gD糖蛋白是IBRV感染细胞的主要分子,在病毒吸附和侵入宿主细胞中发挥着重要作用。利用IBRV基因组DNA为模板,经生物学软件DNAstar分析主要抗原区,PCR扩增gD基因786bp片段,定向连接到pET32a(+)表达载体中,筛选阳性克隆转化BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达部分可溶的重组蛋白。Ni-NTA非变性纯化系统纯化蛋白,纯化的蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,利用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶6400;同时以该血清进行血清中和病毒实验,中和指数为1∶640,显示该抗血清具有良好的抗病毒能力,为进一步开发牛传染性鼻气管炎(IBR)的诊断检测试剂和疫苗奠定了重要基础。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD糖蛋白 原核表达 抗血清
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牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 庄东明 王建华 +4 位作者 吴春涛 霍蕾 侯艳梅 赵祥平 牛钟相 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载... 用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ、pET-gDQB、pET-gDHB,利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小,Western blot表明表达产物均有抗原性。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gD糖蛋白基因 克隆 原核表达
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牛妊娠相关糖蛋白6基因密码子优化及其在HEK293细胞中的表达 被引量:3
15
作者 刘长彬 卢春霞 +2 位作者 石国庆 倪建宏 卢守亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2597-2606,共10页
[目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持。[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodon^TM在不改变氨基酸序列的前提下,对b... [目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持。[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodon^TM在不改变氨基酸序列的前提下,对bPAG6基因密码子进行优化,采用全基因合成技术扩增优化后的bPAG6基因,构建proEM-bPA G6重组载体,并转染至HEK293细胞中进行高效表达;然后通过SDS-PAGE电泳、Western blotting和ELISA检测重组蛋白的表达效果及免疫反应性,并利用在线生物信息学分析软件对重组蛋白的结构及功能进行预测。[结果]优化后bPAG6基因的密码子适用指数(CAI)由0.80提高到0.96,G+C含量由49.4%提高到58.8%,其蛋白编码区(CDS)长度为1137 bp,共编码379个氨基酸残基。将全基因合成技术扩增获得的bPAG6基因插入proEM载体构建proEM-bPA G6重组载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定可获得2条与预期结果相符的片段[proEM载体(4369 bp)和bPAG6基因(1176 bp)],测序结果也显示其碱基序列与优化后的bPAG6基因完全一致。proEM-bPA G6重组载体转染HEK293细胞表达获得的重组蛋白bPAG6分子量约46 kD。重组蛋白bPAG6可被抗bPAG6抗体识别,即具有良好的免疫反应性。重组蛋白bPAG6信号肽由N端的前15个氨基酸残基组成;存在5个N-糖基化位点,其N-糖基化修饰主要位于57Asn、73Asn、102Asn、124Asn和181Asn位点处;重组蛋白bPAG6为分泌性蛋白,无跨膜螺旋区,其二级结构由无规则卷曲(42.74%)、延伸链(31.93%)、α-螺旋(19.26%)和β-转角(6.07%)组成。[结论]通过基因优化及真核表达获得的重组蛋白bPAG6具有良好免疫反应性,可作为抗原应用于牛早期妊娠快速诊断产品的研发。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白6(bPAG6) 早期妊娠诊断 密码子优化 真核表达
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抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测 被引量:4
16
作者 吴靖 许健 +3 位作者 黄秀芬 沈俊俊 何后军 李永清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2475-2482,共8页
为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列... 为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LICBse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VHVL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 囊膜糖蛋白gD 单链抗体 杆状病毒表达系统
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牛传染性鼻气管炎病毒gD基因表达质粒免疫小鼠的试验研究 被引量:1
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作者 李继昌 童光志 仇华吉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期494-497,共4页
基因疫苗是近几年来发展起来的一种新型疫苗,具有使用安全,生产、运输、贮存方便,免疫效果稳定持久的特点。实验采用PCR方法将从洛阳种牛场西门塔尔牛精液中分离的牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhino tracheitisvirus,IBRV)洛精株g... 基因疫苗是近几年来发展起来的一种新型疫苗,具有使用安全,生产、运输、贮存方便,免疫效果稳定持久的特点。实验采用PCR方法将从洛阳种牛场西门塔尔牛精液中分离的牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhino tracheitisvirus,IBRV)洛精株gD基因进行了扩增,经序列测定确证后构建了gD基因的真核表达质粒。将其单独或连同脂质体肌肉注射于BALB/c小鼠,应用ELISA定期检测血清抗体水平。结果表明,含IBRVgD基因的表达质粒能够引起小鼠的特异性血清抗体反应。 展开更多
关键词 传染性 鼻气管炎 病毒 gD 基因表达 质粒 免疫小鼠 试验
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牛疱疹病毒1型洛精株gD基因的分子克隆及序列分析 被引量:1
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作者 李继昌 童光志 +3 位作者 仇华吉 周艳君 薛强 刘忠贵 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第6期3-6,共4页
根据已发表的牛疱疹病毒 1型 (BHV 1)P8 2株 gD基因的核苷酸序列设计了 1对特异性引物 ,对我国BHV 1洛精株 gD基因进行PCR扩增 ,并对其克隆、测序和分析。结果表明 ,gD基因的核苷酸长度为 12 5 1bp ,其编码 417个氨基酸 ;BHV 1洛精株gD... 根据已发表的牛疱疹病毒 1型 (BHV 1)P8 2株 gD基因的核苷酸序列设计了 1对特异性引物 ,对我国BHV 1洛精株 gD基因进行PCR扩增 ,并对其克隆、测序和分析。结果表明 ,gD基因的核苷酸长度为 12 5 1bp ,其编码 417个氨基酸 ;BHV 1洛精株gD与国外报道的P8 2株的 gD基因的核苷酸的同源性高达 99.92 % ,氨基酸的同源性高达 10 0 %。这说明BHV 1的 展开更多
关键词 牛疱疹病毒 gD糖蛋白 基因克隆 序列分析
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缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较
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作者 尹龙勃 尹文玲 +5 位作者 叶伟成 孙学强 杨鸣琦 王一成 袁秀芳 张存 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期839-843,共5页
为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺... 为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺失突变体pBHV1-△gN-△gE则未能观察到细胞病变。病毒噬斑大小和生长曲线试验表明,在感染细胞内和培养基中,rBHV1-△gE滴度与亲本毒株BHV1无明显差异,而rBHV1-△gN显著降低;重组病毒rBHV1-△gE和前期构建的rBHV1-△gN形成的噬斑均显著小于亲本病毒,其大小分别为亲本病毒的18%和64%。rBHV1-△gE和rBHV1-△gN的构建将有助于阐明gE与gN协同作用机制和为研制BHV1新型基因标记疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛Ⅰ型疱疹病毒 感染性克隆 RedE/T重组 囊膜蛋白gN 囊膜蛋白gE
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牛初乳和牛常乳乳清N-糖蛋白质的差异分析 被引量:4
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作者 曹雪妍 刘瑛 +8 位作者 杨梅 杨宁 梁肖娜 武俊瑞 乌日娜 陶冬冰 刘彪 叶文慧 岳喜庆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第12期160-167,共8页
为阐明牛乳蛋白质N-糖基化,采用糖蛋白质组学技术,在牛初乳和牛常乳乳清中共鉴定到154 个N-糖蛋白和246 个糖基化位点,其中,牛初乳鉴定到117 个N-糖蛋白和183 个糖基化位点;牛常乳鉴定到109 个N-糖蛋白和145 个糖基化位点。初乳中丛生蛋... 为阐明牛乳蛋白质N-糖基化,采用糖蛋白质组学技术,在牛初乳和牛常乳乳清中共鉴定到154 个N-糖蛋白和246 个糖基化位点,其中,牛初乳鉴定到117 个N-糖蛋白和183 个糖基化位点;牛常乳鉴定到109 个N-糖蛋白和145 个糖基化位点。初乳中丛生蛋白(P17697)糖基化位点N-283表达量最高,常乳中α-乳白蛋白糖基化位点N-93表达量最高。考虑定量差异及有无差异,在牛初乳和牛常乳乳清中共鉴定到129 个糖蛋白的190 个差异表达糖基化位点。基因本体论功能注释表明,差异表达糖蛋白参与的生物学过程是生物调节、刺激性反应、多细胞生物过程、定位、免疫系统过程等;主要分布为细胞外区域和细胞器;主要的分子功能是结合作用、催化活性和分子功能调节。差异表达糖蛋白参与的代谢通路主要是补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染和溶酶体等。此外,通过蛋白互作分析,找到一些具有高连接度的重要糖蛋白。本研究丰富了牛乳N-糖蛋白质组成及其糖基化位点信息,阐明了牛乳乳清N-糖基化的功能,为评价和改善牛乳品质、研发婴幼儿配方乳中糖蛋白质的改良及功能食品的生产提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛乳初 牛常乳 乳清 N-糖蛋白 功能分析
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