白菜BrYUCCA5.1基因表达和生物信息学及功能分析

[目的]本文旨在研究白菜YUCCA家族基因BrYUCCA5.1在结球白菜和不结球白菜叶片中的表达模式,并探索其在白菜叶片发育中的作用。[方法]利用生物信息学软件对BrYUCCA5.1基因的进化关系、编码蛋白质的保守结构域、蛋白质的理化性质等特性进行分析;利用实时荧光定量PCR检测结球白菜W30和不结球白菜082及其F2代植株不同部位BrYUCCA5.1表达量的差异;利用芜菁黄化花叶病毒(TYMV)介导的病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术沉默不结球白菜082植株的BrYUCCA5.1,研究该基因的功能。[结果]结球白菜BrYUCCA5.1所编码的蛋白与拟南芥、野生甘蓝、甘蓝型油菜、萝卜的同源性较高;保守结构域分析结果表明BrYUCCA5.1蛋白属于FMO类超家族。该基因在结球白菜W30叶片基部和中部以及F2代结球单株叶片基部的表达量极显著高于其他不结球单株。利用VIGS技术沉默不结球白菜的BrYUCCA5.1,沉默效率达84%,且与对照组相比,BrYUCCA5.1-pTY发病株叶片出现大面积病毒侵染症状,叶片卷曲皱缩,表现出远轴化的形态。[结论]BrYUCCA5.1基因参与调控白菜的叶片发育,且在结球白菜叶球发育过程中具有重要作用。

携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高

目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。

MICA-A5.1基因突变对乙型肝炎相关肝癌患者预后的影响及机制研究

目的探讨MHC-Ⅰ类链相关基因A-A5.1(MICA-A5.1)对乙型肝炎相关肝癌患者预后的影响及相关机制研究。方法选取2013年1月-2015年1月期间在南阳市中心医院住院治疗的196例乙型肝炎相关肝癌患者为研究对象,对所有患者术后进行160个月随访。分析MICA-A5.1基因与乙型肝炎相关肝癌患者临床病理特征的关系;应用Transwell实验分析乙型肝炎相关肝癌患者肿瘤细胞的侵袭能力;利用流式细胞术检测乙型肝炎相关肝癌患者肿瘤细胞凋亡情况;用Kaplan-Meier法分析携带与未携带MICA-A5.1基因的乙肝肝癌患者生存曲线。结果MICA-A5.1基因与乙型肝炎相关肝癌患者TNM分期、肿瘤大小、病理分化程度有关(χ^(2)=6.716、18.463、5.431,P<0.05)。携带MICA-A5.1基因的乙型肝炎相关肝癌患者的累积生存率显著低于未携带MICA-A5.1基因患者(0%vs.14.3%),差异有统计学意义(χ^(2)=11.800,P<0.05)。与未携带MICA-A5.1基因患者肿瘤细胞相比,携带MICA-A5.1基因的乙型肝炎相关肝癌患者肿瘤细胞侵袭率较高[(17.54±2.63)%vs.(48.23±5.91)%],差异有统计学意义(t=44.390,P<0.05),凋亡率较低[(32.41±2.74)%vs.(18.74±2.16)%],差异有统计学意义(t=39.052,P<0.05)。结论携带MICA-A5.1基因的乙型肝炎相关肝癌患者病情较重,肿瘤细胞恶性程度较高,且预后较差,提示MICA-A5.1基因可能与乙型肝炎相关肝癌患者病情进展及预后密切相关。