水的酸碱度对Bradford法检测蛋白质含量的影响

目的探讨水酸碱度的变化对Bradford法检测蛋白质含量的影响。方法用pH分别为4.0(pH=4.0组)、7.0(pH=7.0组)和10.0(pH=10.0组)的双蒸水配置Bradford法所需要的试剂,绘制标准曲线,检测标准蛋白浓度,比较水的酸碱度的变化对标准曲线的影响。结果pH=4.0组和pH=7.0组的标准曲线拟合度较pH=10.0组标准曲线拟合度明显增高;pH=4.0组和pH=7.0组检测的蛋白质含量与已知蛋白浓度相比差别无统计学意义(P>0.05);pH=10.0组检测蛋白质的含量与已知蛋白浓度、pH=7.0组和pH=4.0组相比差别均有统计学意义(P<0.05),pH=7.0组和pH=4.0组检测蛋白质含量的准确性高于pH=10.0组。结论双蒸水酸碱度的变化可以影响Bradford法检测蛋白质含量的精确度。

Bradford法测定土壤球囊霉素相关蛋白的影响因子

土壤球囊霉素相关蛋白(glomalin-related soil protein,GRSP)是评价土壤健康的重要指标。研究了土样粒径、贮存条件和高温提取后离心延误时间3个影响因子对采用Bradford法测定GRSP含量的作用效果。结果表明,土样粒径对易提取GRSP(EEG)的提取测定影响显著,过0.074 mm孔径筛土样中提取出的EEG含量高于过0.149、0.25、1 mm孔径筛的土样;总GRSP(TG)含量的测定结果对土样粒径的变化没有明显响应,测定TG含量可采用过1 mm孔径筛的土样。贮存条件影响EEG和TG含量的测定,有机质含量低的土样室温保存18个月条件下测得的EEG含量低于-20℃保存条件下;有机质含量高的土样室温保存条件下测得的EEG含量高于-20℃保存条件下;室温保存条件下3个有机质含量水平的土样TG含量均高于-20℃保存条件下。不同样品保存方式间3个有机质含量水平的土样EEG或TG含量差异均显著。为减小有机质降解等的影响,宜低温保存土样。提取后延误离心将导致EEG含量测定值降低,因此延误时间以控制在1 h之内为宜;离心延误2 h内不同延误时间之间测得的TG含量无显著差异。

螺旋霉素中蛋白含量的测定方法(Bradford法)及验证

建立螺旋霉素中蛋白含量的测定方法。用0.9%NaCl溶液为溶剂,采用Bradford法,于波长595nm处比色,螺旋霉素中蛋白含量的最小检测限:5μg/mL。

威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定方法研究

目的 建立威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定的最佳方法。方法 以氨基酸分析仪测定的威廉环毛蚓提取物中的氨基酸含量为指标,对蛋白质含量检测方法 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法进行对比评价。结果 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法测定威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(上清液)结果分别为27.03%、45.85%、31.58%、11.11%,威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(混悬液)的结果分别为38.44%、52.39%、44.06%、11.56%。采用氨基酸分析仪法测定得到威廉环毛蚓提取物中游离氨基酸含量为4.18%,将威廉环毛蚓提取物蛋白质酸水解之后测定总氨基酸含量为48.53%。结论 在威廉环毛蚓提取物样品溶液的处理方式上,与样品上清液相比,样品混悬液的测定结果更接近样品中蛋白质的真实含量。以牛血清白蛋白(BSA)为对照品,相较于Lowry法2、改良Lowry法和Bradford法,BCA法更适宜用于威廉环毛蚓提取物中的蛋白质含量测定。

用BRADFORD法测定蛋白质含量适宜条件的探讨

在１４～２４℃温度范围内，随着温度上升，蛋白质含量实测值与理论值差异逐渐减少；温度高于２４℃时，实测值与理论值基本一致．２４℃时，反应时间少于３ｍｉｎ，实测值低于理论值；反应时间长于３ｍｉｎ，实测值与理论值基本一致．所以Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量的适宜条件是温度不低于２４℃，反应时间不少于３ｍｉｎ．

考马斯亮蓝法检测活性污泥中蛋白质含量优化

采用考马斯亮蓝法对活性污泥中蛋白质的含量进行测定,并从污泥洗涤、蛋白质提取到蛋白质检测,对该方法用于活性污泥蛋白质含量检测进行优化。试验结果表明：采用Tris-HCl缓冲液洗涤、碱提取法法提取、5~10 min水浴、中性或弱酸、弱碱条件下检测,蛋白质浓度在10~180μg/m L内与吸光度具有良好的线性关系（R2=0.995 7）;该方法的精密度（相对标准偏差（RSD）=3.80%）较高,重复性较好（RSD=2.09%）,加样回收率（n=6）范围为96.99%~109.14%。该方法通过优化后具有快速、精确、可靠的优点,可用于活性污泥蛋白质含量的检测。

考马斯亮蓝染色法测定大豆茎叶中蛋白质含量

应用考马斯亮蓝染色法测定大豆茎叶中蛋白质含量。结果表明,该法测定大豆茎叶中蛋白质含量是可行的,其RSD为0.25%～1.27%,回收率为94.9%～106.4%,大豆茎叶蛋白质平均含量为7.673%和11.315%。该方法简便快速,灵敏度高、重现性好、准确率相对较高,可用于微量可溶性蛋白质含量的测定。

啤酒泡沫蛋白质的初步分离及测定

研究了啤酒泡沫蛋白质的简便测定方法 ,发现Bradford法用于啤酒泡沫蛋白质的测定具有一定的可行性 ,测定结果与泡持值有着良好的线性关系。同时对啤酒泡沫蛋白质进行了凝胶色谱分离 (SephdexG -5 0 ) 。

人参中可溶性蛋白质含量测定

目的：研究人参中可溶性蛋白质含量测定方法。方法：以牛血清白蛋白为对照品,采用考马斯亮蓝比色法对可溶性蛋白质含量进行测定。结果：对照品浓度在33.4~167.0μg/mL范围内具良好的线性关系（r=0.9990）,供试品溶液在60 min内稳定,平均回收率为99.74%,相对标准偏差为2.36%（n=5）。结论：本含量测定方法快速、准确,可为人参的品种选育、合理栽培和利用提供科学依据。

地龙中蛋白质的提取工艺研究

目的确定地龙中的蛋白质含量的最佳提取工艺。方法以地龙中的蛋白质含量为评价指标,采用考马斯亮兰法检测地龙中有效成分蛋白质含量,在确定地龙的最佳提取次数的基础上,选择三因素(浸泡时间、加水量、提取时间),三水平的正交试验方法,并结合得膏率,优化地龙的提取工艺。结果地龙的最佳提取工艺条件是适量的地龙药材加10倍量的水,浸泡40min,煎煮3次,第1次90min,第2,第3次分别为60min。结论该工艺操作方法简单,提取率高,适宜于大批量生产。

生活污水中蛋白质测试方法研究

分别用Folin-酚改进法、考马斯亮兰法和紫外分光光度法等3种测试方法测试了上海市某小区生活污水中的蛋白质含量,对这3种测试方法进行了比较,并采用氨基酸仪分析了生活污水中蛋白质水解后的氨基酸化学组成。试验结果表明,Folin-酚改进法测试蛋白质浓度的准确性与精确性优于考马斯亮兰法和紫外分光光度法,可用于测定生活污水中蛋白质的浓度;氨基酸仪法测得该生活污水中含有17种氨基酸,其中最多的为谷氨酸(3.6 mg/L),含量最低的是脯氨酸(0.8 mg/L);所测生活污水中蛋白质COD占总COD的18.9%。

SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究

目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。

羚羊角药材商品中水溶性蛋白质含量测定

目的:建立羚羊角商品药材中水溶性蛋白质含量测定方法。方法:低温水浸渍提取,考马斯亮蓝显色,可见分光光度法测定羚羊角商品药材中水溶性蛋白质的含量。结果:样品中水溶性蛋白质的含量以牛血清蛋白计在21.6～108μg范围内具有良好线性关系,回归方程为Y=0.0075X+0.0046(r=0.9996)。结论:该方法适用于羚羊角商品药材中水溶性蛋白质的含量测定。

采用超滤前处理考马斯亮蓝法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量

目的:药品中外源性残留蛋白不仅影响药品质量,且严重威胁人用药安全。青霉素G酰基转移酶(简称PGA)是酶法工艺生产β-内酰胺抗生素过程中所用关键催化酶,有必要对其进行研究并严格控制终产品中的蛋白残留量。已有方法采用凝胶过滤法(GFC)对残留蛋白进行前处理,但该法存在富集效率低等诸多问题。本文探讨并尝试建立一种不同方式和原理的蛋白分离、富集方法,采用超滤前处理结合考马斯亮蓝(Bradford)法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量。方法:采用Amicon?Ultra-15型超滤管(15 mL,截留分子量为3 kDa)对阿莫西林供试液进行前处理,离心力为5000 g(7000rpm),对溶液进行净化并对蛋白进行浓缩富集,再采用Bradford法对浓缩液进行蛋白定量测定,检测波长为595 nm。结果:该法具有较好的专属性;蛋白浓度在1.0~100.0μg·mL-1(r=0.9921)内校正曲线(lg A^lg C)的线性关系良好;回收率>72%(n=3×3);Bradford法最低检出限为0.1μg·mL-1,相当于0.0001%;Bradford法的精密度≤5.0%。结论:该方法准确、可靠,相比于已有方法,蛋白富集量更大、操作简便、设备要求低,可用于酶法工艺阿莫西林中残留蛋白的测定,对酶法工艺半合成抗生素中残留蛋白的质控及酶法工艺稳定性监测提供了一定技术指导。

茶叶可溶性蛋白质含量的测定及添加PVP的效应研究

应用Bradford法测定成品茶中水溶性蛋白质的含量,并研究了添加PVP试剂对测定方法以及对茶叶其它品质成分的影响。

两株耐碱酵母的pH耐受实验观察

对分离鉴定的两株酵母菌用比浊法和Bradford法进行pH耐受范围检测。Trichosporon asahii XJU-1的pH耐受范围为2．0-13．0，最适pH值为8．0。Rhodotonrla mucilaginosa XJU-1的pH耐受范围为3．0-12．0，最适pH值为8．5。比浊法在pH4．0-10．0测出数值比较可靠，而在pH〈4．0和pH≥10．0产生了较大误差。在最适pH时，Bradford法间接测定两酵母的生长量，T．asahii总溶解蛋白为290μg／mL，Rh．mucilaginosa总溶解蛋白为164μg／mL。Bradford法在pH2．0．13．0范围均能较准确地反映出菌株生长状况，数据表明两株酵母有广阔的pH耐受性，它们是耐碱酵母菌的新成员。

流动注射光度法测定黄酒中蛋白质的含量和分子量分布

将流动注射技术引入Bradford蛋白质测定法,利用Sepadex G-100凝胶层析柱分离黄酒中的蛋白质,可直接测定蛋白质的含量和分子量分布.成品酒(熟酒)为5.32 g/L(6.86 g/L);高分子蛋白质(FW>25000)占10.52%(13.08%);中分子蛋白质(FW:25000～5000)占49.12%(54.12%);小分子蛋白质(FW<5000)占40.36%(32.80%),并得到黄酒中蛋白质含量与分子量分布的曲线谱图,可监控和预测黄酒的品质.

哈蟆油发酵乳中蛋白质及氨基酸含量分析

目的建立哈蟆油发酵乳中蛋白质及氨基酸含量分析方法。方法运用考马斯亮蓝法测定哈蟆油发酵乳中蛋白质含量,运用氨基酸自动分析仪测定哈蟆油发酵乳中氨基酸的含量。结果 3批哈蟆油发酵乳蛋白含量分别为8.050 1、8.093 0、7.758 2 mg/m L。平均总氨基酸的含量为15.320 5 mg/m L。结论哈蟆油发酵乳中含有合成人体所需蛋白质及丰富的氨基酸。

人参蛋白四种提取方法的比较研究

通过对人参蛋白的四种提取方法(盐析法、丙酮沉淀法、聚乙二醇沉淀法、中空纤维膜过滤法)进行比较,采用SDS-PAGE电泳法、Bradford蛋白纯度检测法获得相关数据。结果表明,聚乙二醇沉淀法和中空纤维膜过滤法收率最高;中空纤维膜过滤法与盐析法纯度最好;中空纤维膜过滤法的电泳条带最完整清晰。

全蝎药材商品中水溶性蛋白质含量测定

目的：建立全蝎商品药材中水溶性蛋白质含量测定方法,为评价全蝎药材质量通过依据。方法：冰箱低温水浸渍、提取,考马斯亮蓝G-250溶液显色,可见分光光度法测定,10批不同全蝎药材商品中水溶性蛋白质的含量。结果：各样品中水溶性蛋白质的含量,以牛血清蛋白计,在60-464μg范围内线性关系良好,其回归方程为Y=0.001 6X＋0.0734,相关系数r=0.9997。结论：该方法适用于全蝎药材的水溶性蛋白质的含量测定,可作为控制全蝎药材质量的方法之一。