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腺病毒介导VEGF165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用 被引量:4
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作者 张珊珊 郑湘榕 +4 位作者 杨于嘉 钟乐 王霞 谢岷 余小河 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第6期737-742,共6页
目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的神经保护作用。方法采用细菌内同源重组技术构建Ad-VEGF腺病毒重组载体。7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分成4组,假手术组(n=20)、HIBD组(n=25... 目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的神经保护作用。方法采用细菌内同源重组技术构建Ad-VEGF腺病毒重组载体。7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分成4组,假手术组(n=20)、HIBD组(n=25)、病毒缓冲液移植组(Buffer组,n=20),Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,n=25)。使用Rice法制成HIBD模型,Ad-VEGF移植组和Buffer组在HIBD后3d于大鼠左侧感觉运动皮层区分别立体定位注射2 μL重组体腺病毒悬液或病毒缓冲液;移植后7d采用RT-PCR法检测鼠脑VEGF165 mRNA的表达;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑皮质神经元凋亡情况;采用免疫组织化学法分别检测VEGF蛋白表达及CD34表达计数大脑皮质微血管密度;30日龄时采用放射型迷宫觅水试验进行行为学测试,35日龄采用苏木精-伊红染色观察鼠脑组织病理学。结果Ad-VEGF组VEGF165基因表达较HIBD组及Buffer组明显增高(P<0.05);Ad-VEGF组脑细胞凋亡数目较HIBD组及Buffer组减少(P<0.05);Ad-VEGF组平均大脑皮质微血管数及VEGF蛋白表达较HIBD组及Buffer组明显增多(P<0.05);Ad-VEGF组行为学测试成绩较HIBD组及Buffer组改善(P<0.05);Ad-VEGF组鼠脑皮层神经元变性坏死较HIBD组及Buffer组减轻。结论腺病毒载体介导的VEGF165基因转移可增加新生鼠脑组织VEGF165 mRNA及VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、增加新生脑血管形成,减轻缺氧缺血性脑损伤,改善远期学习记忆功能。 展开更多
关键词 缺氧缺血性脑损伤 血管内皮生长因子 基因转移 新生大鼠
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将含有报告基因LacZ的重组腺病毒载体从大鼠鼻腔转移至脑的实验研究 被引量:1
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作者 蓝玲 郭灵 《微创医学》 2009年第2期95-97,F0004,共4页
目的探讨将携带有报告基因的腺病毒载体由鼻腔转移至脑途径的可行性。方法将携带半乳糖苷酶报告基因(LacZ)的5型重组腺病毒载体(Ad5 CMVLacZ)注入SD大鼠鼻腔黏膜,分别在注射3 d、7 d、14 d、21 d及28 d切取大鼠鼻腔黏膜以及与嗅觉信息... 目的探讨将携带有报告基因的腺病毒载体由鼻腔转移至脑途径的可行性。方法将携带半乳糖苷酶报告基因(LacZ)的5型重组腺病毒载体(Ad5 CMVLacZ)注入SD大鼠鼻腔黏膜,分别在注射3 d、7 d、14 d、21 d及28 d切取大鼠鼻腔黏膜以及与嗅觉信息传导途径相关的脑组织,进行冰冻切片和β-半乳糖苷酶(β-gal)免疫组织化学反应显色,判断该载体是否转染和表达蛋白质产物。结果β-gal免疫组化染色反应显示,该病毒载体从第3天起即可在鼻腔黏膜与嗅球内的细胞转染和表达,在第7天至第21天病毒载体逐渐向颅内深部的室管膜下区、杏仁核及齿状回细胞转移和表达,持续性表达蛋白质产物达28 d之久。结论经鼻腔黏膜注入腺病毒载体不仅可将外源性基因转移到脑实质内,还可确保外源性基因转染和表达成功。 展开更多
关键词 微创途径 腺病毒载体 脑基因转移 Β-半乳糖苷酶基因 鼻腔
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原核移植技术对子代小鼠脑组织mRNA表达谱的影响
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作者 李天杰 曹延祥 +3 位作者 金小虎 赵红翠 于洋 乔杰 《天津医药》 CAS 2016年第10期1213-1216,1299,共5页
目的探讨原核移植(PNT)技术对子代小鼠脑组织m RNA表达谱的影响。方法将SPF级ICR(CD-1)雌鼠超促排卵并与雄鼠交配受精后,收集雌鼠受精卵进行原核移植,获得重构胚胎,将其移植到假孕小鼠输卵管内获得原核移植子代小鼠(PNT组),未经原核移... 目的探讨原核移植(PNT)技术对子代小鼠脑组织m RNA表达谱的影响。方法将SPF级ICR(CD-1)雌鼠超促排卵并与雄鼠交配受精后,收集雌鼠受精卵进行原核移植,获得重构胚胎,将其移植到假孕小鼠输卵管内获得原核移植子代小鼠(PNT组),未经原核移植操作的受精卵经过胚胎移植后获得子代小鼠(对照组)。提取2组小鼠脑组织RNA,逆转录为c DNA后荧光染料标记,利用Agilent小鼠m RNA芯片检测2组m RNA表达谱差异,筛选差异表达的m RNA并进行GO和信号通路分析。结果 PNT组与对照组表达差异倍数在2倍以上的m RNAs有392个,占所有m RNAs的1.7%,其中366个表达升高,26个表达降低;表达差异倍数在4倍以上的共11个。上述差异表达的m RNAs经GO分析结果显示靶基因富集于m RNA可变剪接、小GTP酶介导的信号转导、胰岛素受体信号通路调节等生物学过程以及水解酶活性、跨膜转运蛋白活性、焦磷酸酶活性等分子功能。信号通路富集分析结果显示靶基因集中在离子通道转运、脂肪酸代谢、丁酸甲酯代谢、三酰甘油和酮体代谢等信号通路。结论原核移植可能会对小鼠脑组织一些关键代谢过程产生影响。 展开更多
关键词 核移植技术 胚胎移植 RNA 信使 基因表达谱 计算生物学 原核移植
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用基因转染方法转运神经营养因子(GDNF)进入脑的体外研究
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作者 蒋晨 沢田康文 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期87-90,共4页
Aim The gene encoding neurotrophic factor was transfected into brain capillary endothelial cells with the aim of delivering the gene product extensively into the brain parenchyma by making use of the secretory functio... Aim The gene encoding neurotrophic factor was transfected into brain capillary endothelial cells with the aim of delivering the gene product extensively into the brain parenchyma by making use of the secretory function of BCECs. Methods Plasmid DNA encoding mouse glial cell-derived neurotrophic factor (mGDNF gene) was constructed and prepared. Then, mGDNF gene was transfected into cultured mouse brain capillary endothelial cells (BCECs) in vitro. The amount of mGDNF protein in the transfected cells and secreted from the transfected cells were determined by ELISA. The polarity of the secretion of mGDNF protein from BCECs was investigated in a bicameral culture system. Results The mGDNF protein was detected out not only from the transfected cells but also the cultured media. And mGDNF protein was mainly found in the brain side of the culture compartment. Conclusion It has been demonstrated that a secretory protein can be successfully delivered into brain parenchyma by utilizing the secretory pathway of BCECs. 展开更多
关键词 血脑屏障 脑毛细管内皮细胞 基因转移
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单纯疱疹病毒扩增子载体转导的ATM基因在活体的异位表达(英文)
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作者 齐建国 王苏鸣 Charles J.Link Jr 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期319-327,T054-T055,共11页
小脑性共济失调与血管扩张症 (A-T)是一种常染色体隐性遗传性疾病 ,具多效表型。此病的特征是小脑变性、免疫缺陷、生长迟缓、早熟性衰老、染色体不稳定、肿瘤易患体质和对辐射的过度敏感。目前尚未发现有效的方法阻断此病的进行性发展... 小脑性共济失调与血管扩张症 (A-T)是一种常染色体隐性遗传性疾病 ,具多效表型。此病的特征是小脑变性、免疫缺陷、生长迟缓、早熟性衰老、染色体不稳定、肿瘤易患体质和对辐射的过度敏感。目前尚未发现有效的方法阻断此病的进行性发展。基因治疗是此病的潜在希望。ATM是此病的致病基因 ,编码 ATM蛋白激酶。本研究将 ATM c DNA完整的读码框架克隆进 1型单纯疱疹病毒 (HSV-1)扩增子载体 (p TO-ATM)。培养的 A-T细胞经 p TO-ATM病毒载体转导后 ,用免疫组织化学方法证明了 ATM在这些细胞的异位表达。为了进一步研究在活体应用此载体系统的可能性 ,选择大鼠脑作为实验靶区。先用免疫组织化学方法观察了内源性 ATM在成年大鼠前脑和小脑的正常分布 ,发现在尾壳核有低水平的 ATM出现 ,而在其余脑区 ,ATM水平则显著地高于尾壳核区。将 p TO-ATM病毒载体注射到成年大鼠的一侧尾壳核 ,3 d后在注射区 (包括针道周围的区域 )观察到密集的 ATM免疫反应阳性神经元。本研究结果证明 ,HSV扩增子病毒载体可以稳定地运载相当大的 c DNA片段 ,转基因在离体和活体均能有效地表达。本研究为使用基因治疗的方法治疗 展开更多
关键词 小脑性共济失调与血管扩张症 ATM基因 HSV-1扩增子载体 基因转移 免疫组织化学 大鼠脑 致病基因 异位表达
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胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤 被引量:7
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作者 王飞 潘庆刚 +3 位作者 邓东风 刘宁涛 海舰 沈峰 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期894-897,共4页
目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的大鼠神经干细胞(NSCs)能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs,在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大... 目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的大鼠神经干细胞(NSCs)能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs,在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘,通过观察记录大鼠行为能力的变化,评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况。结果转染后72h,荧光蛋白大量表达。转基因细胞移植后可以在14d时仍表达GDNF基因,各实验组于移植后3d时行为学指标差异无统计学意义(P〉0.05),而在移植后7d,移植转基因NSCs组和NSCs组即与对照组在行为学指标上差异有统计学意义(P〈0.05);在移植后14d,移植转基因NSCs组与其余两组在行为学指标上差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论转基因NSCs移植后可以分泌GDNF并促进脑外伤大鼠神经功能的恢复。 展开更多
关键词 脑损伤 神经干细胞 基因转移 胶质细胞源性神经营养因子
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神经生长因子和脑源性神经营养因子在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用 被引量:2
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作者 贺民 毛伯镛 +4 位作者 陈俊杰 李忌 刘艳辉 王若菡 高立达 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期202-204,共3页
目的 探讨神经生长因子 (NGF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用。 方法 脂质体介导人NGF和BDNF基因转染鼠成纤维细胞NIH 3T3,使目的基因在细胞中表达 ,过氧化氢 (H2 O2 )处理转染细胞 ,吖啶橙荧光染色法... 目的 探讨神经生长因子 (NGF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用。 方法 脂质体介导人NGF和BDNF基因转染鼠成纤维细胞NIH 3T3,使目的基因在细胞中表达 ,过氧化氢 (H2 O2 )处理转染细胞 ,吖啶橙荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果  5 0 μmol LH2 O2 能诱导NIH 3T3细胞凋亡 ,处理后 2 4h凋亡率为 16 .7% ,而NIH 3T3细胞分别经NGF、BDNF和NGF BDNF转染表达目的基因后 ,能对抗H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,其 2 4h凋亡率分别为 8.2 1%、9.5 1%和 6 .2 6 %。 结论 氧化应激能诱导细胞凋亡 ,NGF和BDNF能抑制氧化应激诱导的细胞凋亡 。 展开更多
关键词 神经生长因子 脑源性神经营养因子 基因转移 氧化应激 细胞凋亡 脑损伤
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